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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１８１—２００８一代繁殖毒性试验犗狀犲犵犲狀犲狉犪狋犻狅狀狉犲狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀狋狅狓犻犮犻狋狔狊狋狌犱狔２００８０９０４发布２００９０３１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 本标准修改采用联合国经济合作与发展组织（ＯＥＣＤ）化学品测试方法Ｎｏ．４１５《一代繁殖毒性试验》（１９８３）。本标准与ＯＥＣＤ化学品测试方法Ｎｏ．４１５相比，存在以下差异：———对ＯＥＣＤ化学品测试方法Ｎｏ．４１５进行了编辑性修改；———增加了前言部分；———增加了大鼠染毒时间和程序；———增加了繁殖指数的计算公式。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所、江南大学、天津市检验检疫科学院。本标准主要起草人：张园、吕刚、赵琢、于智睿、周磊、李学洋。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２１８１—２００８一代繁殖毒性试验１ 范围本标准规定了动物一代繁殖毒性试验的术语和定义、试验动物、剂量水平、试验步骤、结果评价、试验报告及试验结果的解释。本标准适用于检测化学品的繁殖毒性。２ 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ１４９２４．１ 实验动物 配合饲料通用质量标准ＧＢ１４９２５ 实验动物 环境及设施３ 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。３．１繁殖毒性 狉犲狆狉狅犱狌犮狋犻狏犲狋狅狓犻犮犻狋狔由化学品引起的雌性或雄性生殖功能的损伤或生殖能力的降低，如繁殖率的下降；或引起子代的非遗传性不良效应，如生长发育毒性，包括致畸性和哺乳期中的健康损害效应。４ 试验动物４．１ 种类和品系的选择首选健康的成年大鼠或小鼠。最常使用断乳，７周～８周龄，至少经过５ｄ适应期的动物来进行繁殖毒性试验。雌性动物必须是未产过仔的。４．２ 动物数目雄性和雌性动物通常按１∶１或１∶２的比例合笼交配。交配的动物数应保证每个剂量组及对照组都能获得２０只左右的孕鼠。４．３ 饲养环境试验动物的饲养和环境设施应符合ＧＢ１４９２４．１和ＧＢ１４９２５的要求。本试验动物采用自由饮食。孕鼠临近分娩时，应单笼饲养在分娩笼中，需要时笼中放置造窝垫料。５ 剂量水平试验至少设三个剂量组和一个对照组。最高剂量应使亲代动物出现明显的毒性反应，但不引起动物死亡；中间剂量可引起轻微的毒性反应；低剂量应不引起动物及其子代的任何毒性反应。如果受试样品的毒性较低，剂量达到１０００ｍｇ／ｋｇ时，仍未对繁殖过程产生任何毒作用，则可以采用限量试验，即试验不需要设其他剂量组。若高剂量的预试验观察到明显的母体毒性作用，但对生育无影响，也可以采用预试验的高剂量进行限量试验。６ 试验步骤６．１ 分组和对照染毒前将动物按体重随机分为剂量组和对照组。如果受试样品使用赋形剂，对照组应采用赋形剂１犛犖／犜２１８１—２００８的最大使用量进行平行染毒。如果受试样品引起动物食物摄入量和利用率的下降时，那么对照组动物需要与试验组动物配对喂饲。６．２ 染毒剂量如果受试样品是通过灌胃或胶囊染毒时，给样量应按每只动物的体重来确定，且每周进行调整。对于妊娠期的母鼠，染毒量应按妊娠的第０天或第６天的体重计算。６．３ 染毒时间和程序（以大鼠为例）大鼠的染毒时间和程序见表１。表１ 大鼠染毒程序和时间试验周期亲代（Ｐ）子代（Ｆ１）第１周始～第８周末给予雄性与雌性亲代动物受试样品—第９周始～第１１周末交配（染毒），交配后处死雄性亲代动物—第１２周始～第１４周末雌性亲代动物继续染毒（妊娠及分娩）Ｆ１出生第１５周始～第１７周末哺乳结束后，停止染毒并处死雌性亲代动物断乳后处死Ｆ１６．４ 交配程序６．４．１ 雄性和雌性动物按１∶１或１∶２的比例进行交配。６．４．２ 雌鼠应始终与同剂量组的同一只雄鼠合笼直至受孕，合笼最长时间可为３周。将检查到精子或阴栓的当天计为雌鼠妊娠的第０天（判为交配成功动物）。６．５ 窝的规格出生后的第４天，应将仔鼠数尽量随机调整到每窝４雌和４雄。若得不到４雌和４雄时可作不均等的调整（如５雄３雌）。但每窝的幼仔数至少为８只。６．６ 观察及检查６．６．１ 临床观察每日至少对动物进行一次仔细的观察。记录有无行为改变，难产或滞产以及所有的毒性反应（包括死亡）。６．６．２ 体重和食物摄入量６．６．２．１ 在交配前和交配期，应测定每只动物每天的食物摄入量（交配期间雌、雄动物摄食量分别按交配前一周平均值计算）。６．６．２．２ 产仔后，每窝仔鼠需要称量体重时，母鼠的食物摄入量也应同时计算。６．６．２．３ 如受试样品是添加到水中进行给样的，则还应记录水的摄入量。６．６．２．４ 亲代动物应在给样的第１天进行称量，以后每周称量体重一次。６．６．２．５ 妊娠周期应该从怀孕的第０天开始计算。生产下的仔鼠应尽早分辨性别，记录每窝的出生数、活仔数以及幼仔外观有无异常和畸形。同时记录母鼠或仔鼠在生理上和行为上的异常表现。６．６．２．６ 以窝为单位，对仔鼠于出生的当天上午、第４天、第７天、第１４天和第２１天进行称量。６．６．３ 大体解剖检查死亡和到期处死的亲代动物都应解剖进行大体检查，肉眼观察有无组织器官形态上的改变，特别是生殖器官。死亡或濒临死亡的仔鼠也应接受检查，查看是否有外观或器官形态的缺陷。６．６．４ 病理组织学检查保留上述剖检的所有亲代动物的卵巢、子宫、子宫颈、阴道、睾丸、附睾、精囊、前列腺、脑下垂体和靶器官标本。先对最高剂量组和对照组的动物标本以及剖检中发现异常的标本进行组织病理学检查。如最高剂量组没有发现有意义的病变，其他剂量组的标本可不必再进行病理检查。若最高剂量组发现有意义的病理改变，则其他剂量组相关的标本也应作进一步的检查。２犛犖／犜２１８１—２００８７ 试验结果评价７．１ 繁殖指数繁殖指数见式（１）～式（５）：交配成功率＝交配成功动物数用于交配的雌性动物数×１００％……………………（１）受孕率＝受孕动物数用于交配的雌性动物数×１００％……………………（２）活产率＝产生活仔的雌性动物数受孕动物数×１００％……………………（３）出生存活率＝出生后４ｄ幼仔存活数出生当时存活幼仔数×１００％……………………（４）哺育成活率＝２１ｄ断奶时幼仔成活数出生后４ｄ幼仔存活数×１００％……………………（５）７．２ 数据处理７．２．１ 列表表示试验数据，表中应显示每组的试验动物数、交配的雄性动物数、受孕的雌性动物数、各种毒性反应及其出现动物的百分数。７．２．２ 应采用适当的统计方法对数据进行统计分析。７．３ 结果评价逐一比较剂量组动物与对照组动物繁殖指数是否有显著性差异，以评定受试样品有无繁殖毒性，同时还可根据出现统计学差异的指标（如体重、观察指标、大体解剖和病理组织学检查结果等），进一步估计繁殖毒性的损害作用特点。８ 试验报告试验报告应包括以下内容：———受试样品名称、理化特性、配制方法；———试验动物的种类、品系、性别、体重、数量和来源（注明合格证号和动物级别）；———试验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、合笼或单笼饲养、动物实验室合格证号；———试验方法：给样方法和期限，剂量分组；———亲代动物的食物摄入量和体重资料；———按性别和剂量组分别记录的毒性反应，包括繁殖、妊娠和发育能力的异常；———试验过程中，动物死亡的时间以及试验到期时是否还有存活的动物；———每窝仔鼠的体重和仔鼠的平均体重，以及试验后期单个仔鼠的体重；———任何有关繁殖、子鼠及其生长发育的毒性和其他健康损害效应；———观察到的各种异常症状的时间和持续过程；———大体解剖检查的结果；———详述病理组织学检查结果；———统计处理的结果；———结论。９ 试验结果的解释本试验可反映动物在多次接触某一受试样品后所产生的生殖毒性。在分析结果时，应将其与亚慢性试验，致畸试验以及其他试验的结果相结合，进行综合分析。试验结果能提供无作用剂量水平和人体安全接触水平，但试验结果外推到人仍存在着一定的局限性。犛犖／犜２１８１—２００８