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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１５２—２００８进出口食品中氟铃脲残留量检测方法高效液相色谱质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犺犲狓犪犳犾狌犿狌狉狅狀狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犎犘犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２００８０９０４发布２００９０３１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 本标准的附录Ａ和附录Ｂ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国重庆出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈冬东、罗礻韦、李建中、安娟、冯楠、高旭、王国民、李贤良、李英国。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２１５２—２００８进出口食品中氟铃脲残留量检测方法高效液相色谱质谱／质谱法１ 范围本标准规定了进出口食品中氟铃脲残留量的液相色谱质谱／质谱检测方法。本标准适用于大米、大豆、番茄、洋葱、蘑菇、苹果、草莓、芦笋、胡萝卜、紫苏叶、花生、板栗、鸡肉、牛肉和猪肾中氟铃脲残留量的测定和确证。２ 方法提要试样中残留的氟铃脲用乙腈提取，经固相萃取柱净化，用高效液相色谱质谱／质谱仪测定，外标法定量。３ 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。３．１ 乙腈：流动相用乙腈为色谱纯，其他均为分析纯。３．２ 丙酮。３．３ 正己烷。３．４ 甲酸。３．５ 乙酸铵。３．６ 无水硫酸钠：在６５０℃灼烧４ｈ，贮于干燥器中，冷却后备用。３．７ 丙酮正己烷（１＋９，体积比）：量取１ｍＬ丙酮和９ｍＬ正己烷，混匀。３．８ 丙酮正己烷（１＋１，体积比）：量取１ｍＬ丙酮和１ｍＬ正己烷，混匀。３．９ ０．１％甲酸＋０．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵水溶液：称取０．０３８５ｇ乙酸铵加入１ｍＬ甲酸，用水溶解定容至１Ｌ备用。３．１０ 乙腈：０．１％甲酸＋０．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵水溶液＝７０∶３０（体积比）：量取７０ｍＬ乙腈和３０ｍＬ（３．９）溶液，混匀。３．１１ 氟铃脲标准品（Ｈｅｘａｆｌｕｍｕｒｏｎ，ＣＡＳＮｏ．：８６４７９０６３）：纯度大于等于９９％。３．１２ 氟铃脲标准溶液：准确称取适量的氟铃脲标准物质，用乙腈配成浓度为１００．０ｍｇ／Ｌ的标准储备溶液，４℃下避光保存６个月。根据需要用乙腈将储备液稀释成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。３．１３ 弗罗里硅土固相萃取柱：１０００ｍｇ，６ｍＬ，或相当者。４ 仪器和设备４．１ 高效液相色谱质谱／质谱仪，配有电喷雾（ＥＳＩ）源。４．２ 分析天平：感量０．１ｍｇ，０．０１ｇ。４．３ 样品粉碎机。４．４ 振荡器。４．５ 旋转蒸发仪。４．６ 氮吹仪。４．７ 固相萃取装置。４．８ 涡旋振荡器。４．９ 离心机：５０００ｒ／ｍｉｎ。１犛犖／犜２１５２—２００８５ 试样制备和保存５．１ 试样制备５．１．１ 大米、大豆取有代表性样品５００ｇ，粉碎并使其全部通过孔径为２．０ｍｍ的样品筛。混合均匀，装入洁净的容器内，密封并标识。５．１．２ 番茄、洋葱、蘑菇、苹果、草莓、芦笋、胡萝卜、紫苏叶、花生、板栗取有代表性样品５００ｇ，取可食部分后将其切成小块（不可水洗），用组织捣碎机将样品匀浆，混合均匀，装入洁净的容器内，密封并标识。５．１．３ 鸡肉、牛肉、猪肾取有代表性样品５００ｇ，切碎并用组织捣碎机将样品加工成浆状，混合均匀，装入洁净的容器内，密闭并标识。５．２ 试样保存粮谷、坚果类试样在０℃～４℃避光保存；水果、蔬菜、肉等试样在－１８℃避光保存。制样和样品保存过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。６ 测定步骤６．１ 提取６．１．１ 大米、大豆称取５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加１０ｍＬ水放置１５ｍｉｎ，加入５ｇ氯化钠和３０ｍＬ乙腈，均质２ｍｉｎ，振荡提取３０ｍｉｎ后５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，上清液过无水硫酸钠并收集于１００ｍＬ梨形瓶中，残渣中再加入３０ｍＬ乙腈重复上述操作，合并两次上清液，混匀，准确移取３０ｍＬ上述液体至浓缩瓶中，于４０℃旋转浓缩至干，加入５ｍＬ正己烷溶解待净化。６．１．２ 番茄、洋葱、蘑菇、苹果、草莓、芦笋、胡萝卜、紫苏叶、花生、板栗称取５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入３０ｍＬ乙腈（３．１），均质２ｍｉｎ，振荡提取３０ｍｉｎ，５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，上清液过无水硫酸钠（３．６）收集于１００ｍＬ梨形瓶中，残渣再加入３０ｍＬ乙腈重复上述操作，合并两次上清液，混匀，准确移取３０ｍＬ上述液体于４０℃减压浓缩至于，加入５ｍＬ正己烷（３．３）溶解，待净化。６．１．３ 鸡肉、牛肉、猪肉称取５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入３０ｍＬ乙腈，均质２ｍｉｎ，振荡提取３０ｍｉｎ后５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，上清液过无水硫酸钠并收集于１２５ｍＬ分液漏斗中，残渣中再加入３０ｍＬ乙腈重复上述操作，合并两次上清液，加入２０ｍＬ用乙腈饱和的正己烷，振荡１０ｍｉｎ，静置分层，弃去正己烷层，准确移取３０ｍＬ乙腈层溶液至浓缩瓶中，于４０℃水浴减压浓缩至干，加入５ｍＬ正己烷溶解待净化。６．２ 净化依次用５ｍＬ丙酮（３．２），１０ｍＬ正己烷活化氟罗里硅土柱（３．１３），将６．１步骤所获得的正己烷溶解液全部转移至氟罗里硅土柱，控制流速小于等于２ｍＬ／ｍｉｎ，依次用５ｍＬ正己烷、５ｍＬ丙酮正己烷混合溶液（１＋９，体积比）进行淋洗，弃去淋洗液，用８ｍＬ丙酮正己烷混合溶液（１＋１，体积比）洗脱，控制流速在１ｍＬ／ｍｉｎ左右，收集全部洗脱液，于４０℃下用氮气吹干，用流动相溶解并定容至１．０ｍＬ，供液相色谱质谱质谱仪测定。６．３ 测定６．３．１ 液相色谱条件ａ） 色谱柱：Ｃ１８柱１５０ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），５μｍ或相当者；ｂ） 流动相：乙腈：０．１％甲酸＋０．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵水溶液＝７０∶３０（体积比）；２犛犖／犜２１５２—２００８ｃ） 进样量：１０μＬ；ｄ） 柱温：４０℃；ｅ） 流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ。６．３．２ 质谱质谱条件条件参见附录Ａ中表Ａ．１和表Ａ．２。６．３．３ 液相色谱质谱质谱测定根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的标准工作溶液，待测样液中氟铃脲的响应值应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液及样液（６．２）等体积参插进样测定。在上述仪器条件下，氟铃脲保留时间约为５．９５ｍｉｎ。液相色谱串联质谱总离子流和质量色谱图参见附录Ｂ。６．３．４ 定性测定进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超过表１中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表１ 定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０６．４ 空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。７ 结果计算试样中的氟铃脲残留含量，按式（１）计算，计算结果需将空白值扣除：犡＝犃×犮×犞犃ｓ×犿…………………………（１） 式中：犡———试样中残留氟铃脲含量，单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；犃———样液中氟铃脲的峰面积；犮———标准工作溶液中氟铃脲的浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ———标准工作溶液中氟铃脲的峰面积；犿———最终样液所代表试样质量，单位为克（ｇ）。８ 测定低限和回收率８．１ 测定低限本方法中氟铃脲的测定低限为５．０μｇ／ｋｇ。８．２ 添加浓度和回收率不同基质中氟铃脲添加浓度和回收率数据见表２。表２ 添加浓度及回收率范围样 品 名 称添加浓度／（μｇ／ｋｇ）回收率范围／％大米５．０７７．８～９５．４１０．０７７．６～９４．２２５．０７７．６～９４．６３犛犖／犜２１５２—２００８表２（续）样 品 名 称添加浓度／（μｇ／ｋｇ）回收率范围／％大豆５．０７７．９～９５．４１０．０７７．１～９５．１２５．０７６．５～９６．５番茄５．０７７．８～９４．６１０．０７６．３～９６．１２５．０７７．８～９４．５洋葱５．０７８．５～９４．７１０．０７７．４～９４．６２５．０８０．０～９５．５蘑菇５．０７７．９～９４．１１０．０７７．６～９５．９２５．０８１．２～９４．３苹果５．０７７．０～９３．８１０．０７９．８～９５．６２５．０７６．９～９６．６草莓５．０８１．２～９６．２１０．０８０．５～９６．２２５．０８０．４～９５．９芦笋５．０７７．２～９０．７１０．０７８．６～９５．７２５．０７６．７～９５．７胡萝卜５．０７７．１～９５．２１０．０７８．５～９５．８２５．０７７．０～９４．４紫苏叶５．０７７．０～９３．８１０．０７８．２～９６．０２５．０８１．４～９５．０花生５．０７７．８～９４．８１０．０７８．７～９５．９２５．０７７．１～９６．１板栗５．０７９．０～９５．１１０．０７９．３～９５．９２５．０７８．７～９１．５鸡肉５．０７７．４～９５．０１０．０７８．０～９５．１２５．０７６．２～９６．３４犛犖／犜２１５２—２００８表２（续）样 品 名 称添加浓度／（μｇ／ｋｇ）回收率范围／％牛肉５．０７７．４～９３．９１０．０７６．３～９６．４２５．０７８．３～９４．９猪肾５．０７６．６～９６．６１０．０７６．７～９４．２２５．０７９．２～９５．３５犛犖／犜２１５２—２００８附 录 犃（资料性附录）液相色谱质谱／质谱法仪器参数与监测离子１）表犃．１ 质谱条件电离方式ＥＳＩ毛细管电压３．０ｋＶ源温度１２０℃去溶剂温度３５０℃锥孔气流氮气，１００Ｌ／ｈ去溶剂气流氮气，６００Ｌ／ｈ碰撞气压氩气，２．４０×１０－６Ｐａ监测模式多反应监测（ＭＲＭ）表犃．２ 多反应监测条件化合物母离子（ｍ／ｚ）子离子（ｍ／ｚ）驻留时间／ｓ锥孔电压／Ｖ碰撞能量／ｅｖ氟铃脲４５９４３９ａ２７６０．２００．２０３０３０１０１５ ａ离子用于定量。１） 非商业性声明：附录表Ａ所列参数是在ＷａｔｅｒｓＱｕａｔｔｒｏＰｒｅｍｉｅｒ质谱仪上完成的，此外列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。６犛犖／犜２１５２—２００８附 录 犅（资料性附录）液相色谱质谱／质谱法与液相色谱法氟铃脲标准品谱图图犅．１ 氟铃脲标准物质棒状图图犅．２ 氟铃脲标准物质犕犚犕色谱图７犛犖／犜２１５２—２００８