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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２０７３—２００８进出口植物性产品中吡虫啉残留量的检测方法 液相色谱串联质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犻犿犻犱犪犮犾狅狆狉犻犱狉犲狊犻犱狌犲犻狀狆犾犪狀狋狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２００８０４２９发布２００８１１０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言本标准的附录Ａ和附录Ｂ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国浙江出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：谢文、丁慧瑛、蒋晓英、奚君阳、钱艳、黄雷芳。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２０７３—２００８进出口植物性产品中吡虫啉残留量的检测方法 液相色谱串联质谱法１ 范围本标准规定了植物性产品中吡虫啉残留量的制样和液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于毛豆、西兰花、萝卜、板栗、大米、辣椒和茶叶中吡虫啉残留量的检测。２ 方法提要用乙腈提取样品中吡虫啉，提取液再用弗罗里硅土和活性炭混合柱净化，液相色谱串联质谱测定和确证，外标法定量。３ 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。３．１ 乙腈：高效液相色谱级。３．２ 正己烷：高效液相色谱级。３．３ 丙酮：高效液相色谱级。３．４ 甲醇：高效液相色谱级。３．５ 甲酸：高效液相色谱级。３．６ 氯化钠。３．７ 活性炭：粒度０．０３８ｍｍ～０．１２４ｍｍ（１２０目～４００目）。３．８ 无水硫酸钠：６５０℃灼烧４ｈ，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。３．９ 弗罗里硅土：粒度０．１５ｍｍ～０．２５ｍｍ（６０目～１００目）。６５０℃灼烧４ｈ，使用前１３０℃活化４ｈ，在干燥器内冷却至室温，加１％的水脱活，备用。３．１０ ０．１５％甲酸水溶液：０．１５ｍＬ甲酸溶解于１００ｍＬ水中。３．１１ 丙酮正己烷（１＋１，体积比）。３．１２ 甲醇水（１＋１，体积比）。３．１３ 吡虫啉标准品（ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ，ＣＡＳＮｏ．１３８２６１４１３，Ｃ９Ｈ１０ＣｌＮ５Ｏ２）：纯度大于等于９８．５％。３．１４ 吡虫啉标准储备溶液：称取适量标准品（３．１３），用甲醇溶解，溶液浓度为１００μｍ／ｍＬ。１℃～４℃冷藏保存。有效期６个月。３．１５ 标准工作曲线工作液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成５ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ的混合标准工作溶液，当样品取样量为２ｇ时，相当于样品中含有５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ吡虫啉。３．１６ 无水硫酸钠柱：８０ｍｍ×４０ｍｍ（内径）筒形漏斗，底部垫５ｍｍ脱脂棉，再装４０ｍｍ无水硫酸钠。３．１７ 净化柱：２００ｍｍ×１５ｍｍ（内径）玻璃柱，底部垫约５ｍｍ脱脂棉和约２０ｍｍ无水硫酸钠，５ｇ弗罗里硅土和０．２ｇ活性炭混匀装柱，顶端加约２０ｍｍ无水硫酸钠，使用前用２０ｍＬ正己烷预洗。４ 仪器和设备４．１ 高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。４．２ 旋转蒸发器。１犛犖／犜２０７３—２００８４．３ 粉碎机。４．４ 均质器。４．５ 旋涡混合器。４．６ 离心机：４０００ｒ／ｍｉｎ。４．７ 氮吹仪。５ 试样制备与保存５．１ 蔬菜、坚果从所取全部样品中取出有代表性样品约２００ｇ，取可食部分经捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，装入洁净容器内，一份作为试样，另一份作为留样，密封，标明标记，４℃冰箱存放。５．２ 茶叶、粮谷将所取全部样品缩分成１００ｇ，磨碎，通过孔径为０．８５ｍｍ的筛（２０目），均分成两份，装入洁净的容器内，一份作为试样，另一份作为留样，密封，标明标记，室温存放。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。６ 测定步骤６．１ 提取６．１．１ 蔬菜、坚果、粮谷称取２ｇ样品（精确到０．０１ｇ）置于５０ｍＬ具塞离心管中，脱水蔬菜、粮谷加３ｍＬ水浸泡０．５ｈ，加入１５ｍＬ乙腈，以１４０００ｒ／ｍｉｎ均质３０ｓ，以３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，将上层乙腈置另一个５０ｍＬ离心管中，再加入１５ｍＬ乙腈，重复上述操作，合并乙腈提取液，加入过量氯化钠振摇，以３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，将上层乙腈提取液过无水硫酸钠柱（３．１６），收集于浓缩瓶中，再用５ｍＬ乙腈洗涤无水硫酸钠柱，在４５℃下旋转蒸发至近干。６．１．２ 茶叶称取１ｇ试样（精确到０．０１ｇ）置于５０ｍＬ具塞离心管中，加３ｍＬ水浸泡０．５ｈ，加入１５ｍＬ乙腈，以１４０００ｒ／ｍｉｎ均质３０ｓ，按６．１．１方法操作。６．２ 净化用５ｍＬ丙酮分两次将残渣转移至净化柱中（３．１７），用８０ｍＬ正己烷丙酮（１＋１，体积比）洗脱。收集全部洗脱液，在４５℃以下水浴上减压浓缩至干，用甲醇水（１＋１，体积比）定容至２．０ｍＬ，混匀，将溶液通过０．４５μｍ滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。６．３ 测定６．３．１ 液相色谱串联质谱条件ａ） 色谱柱：Ｃ８柱，５μｍ，１５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径）或相当者；ｂ） 流动相见表１；表１ 流动相梯度洗脱时间／ｍｉｎ乙腈／％０．１５％甲酸水溶液／％０３０７０３．５７０３０８７０３０１０３０７０１６３０７０ｃ） 流速：３００μＬ／ｍｉｎ；ｄ） 进样量：１０μＬ；２犛犖／犜２０７３—２００８ｅ） 离子源：电喷雾离子源；ｆ） 扫描方式：正离子扫描；ｇ） 检测方式：多反应监测；ｈ） 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录Ａ；ｉ） 监测离子对（ｍ／ｚ）：吡虫啉２５６．０／２０９．３（定量离子）、２５６．０／１７５．２。６．３．２ 高效液相色谱串联质谱测定根据试样中被测样液的含量情况，选取待测物的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如超出仪器线性响应范围应进行稀释。在上述色谱条件下吡虫啉的参考保留时间约为９．５ｍｉｎ，标准溶液的选择性离子流图参见附录Ｂ中图Ｂ．１。６．３．３ 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。６．３．４ 液相色谱串联质谱确证按照液相色谱串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中待测物质的保留时间偏差在±２．５％之内。定量测定时采用标准曲线法。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表２规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表２ 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０７ 结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（１）计算试样中吡虫啉残留含量，计算结果需扣除空白值：犡＝犮犻×犞犿……………………………（１）式中：犡———试样中吡虫啉的残留量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犮犻———从标准曲线上得到的吡虫啉溶液浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———最终样液代表的试样质量，单位为克（ｇ）。８ 测定低限（犔犗犙）和回收率８．１ 测定低限（犔犗犙）茶叶测定低限为０．０２ｍｇ／ｋｇ，毛豆、西兰花、萝卜、板栗、大米、辣椒测定低限为０．０１ｍｇ／ｋｇ。８．２ 回收率回收率的实验数据（在不同添加浓度范围内）见表３：表３ 吡虫啉在不同基质中回收率范围基质添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率范围／％毛豆０．０１７４．１～９５．１０．０５７０．４～９５．６０．１０７４．３～１０１．６３犛犖／犜２０７３—２００８表３（续）基质添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率范围／％西兰花０．０１７０．５～９２．４０．０５７１．８～８５．００．１０７４．５～９１．５萝卜０．０１７３．０～９１．８０．０５７１．２～９３．８０．１０７０．３～９７．６板栗０．０１７１．４～９１．６０．０５７１．８～９３．００．１０７０．５～９２．４大米０．０１７１．０～９４．６０．０５７１．６～９８．２０．１０７０．８～９１．２辣椒０．０１７２．６～９４．５０．０５７１．２～９６．４０．１０７１．５～９４．１茶叶０．０２７０．０～９３．００．１７０．５～８９．１０．２０７０．０～８５．１４犛犖／犜２０７３—２００８附 录 犃（资料性附录）犃犘犐４０００犔犆犕犛／犕犛系统电喷雾离子源参考条件１）监测离子对及电压参数：ａ） 电喷雾电压（ＩＳ）：４８００Ｖ；ｂ） 雾化气压力（ＧＳ１）：２８９．５９ｋＰａ（４２Ｐｓｉ）；ｃ） 气帘气压力（ＣＵＲ）：１７２．３７５ｋＰａ（２５Ｐｓｉ）；ｄ） 辅助气流速（ＧＳ２）：３１０．２７５ｋＰａ（４５Ｐｓｉ）；ｅ） 离子源温度（ＴＥＭ）：５４０℃；ｆ） 碰撞气（ＣＡＤ）４１．３７ｋＰａ（６Ｐｓｉ）；ｇ） 离子对、去簇电压（ＤＰ）、碰撞气能量（ＣＥ）及碰撞室出口电压（ＣＸＰ）见表Ａ．１。表犃．１ 离子对、去簇电压（犇犘）、碰撞气能量（犆犈）及碰撞室出口电压（犆犡犘）待测物离子对ｍ／ｚ去簇电压（ＤＰ）／Ｖ碰撞气能量（ＣＥ）／Ｖ碰撞室出口电压（ＣＸＰ）／Ｖ吡虫啉２５６．０／２０９．３ａ６２２２１８２５６．０／１７５．２６２２２１２ ａ为定量离子对。１） 非商业性声明：附录表Ａ．１所列参数是在ＡＰＩ４０００质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。５犛犖／犜２０７３—２００８附 录 犅（资料性附录）吡虫啉标准品选择性离子流图图犅．１ 吡虫啉（５狀犵／犿犔）标准品的选择性离子流图６犛犖／犜２０７３—２００８犉狅狉犲狑狅狉犱犃狀狀犲狓犃犪狀犱犃狀狀犲狓犅狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犪狉犲犻狀犳狅狉犿犪狋犻狏犲犪狀狀犲狓．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲犱狅犳犮犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犪犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犪犱犿犻狀犻狊狋犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犣犺犲犼犻犪狀犵犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犲狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犿犪犻狀犾狔犱狉犪犳狋犲犱犫狔犠犲狀犡犻犲，犎狌犻狔犻狀犇犻狀犵，犡犻犪狅狔犻狀犑犻犪狅，犑狌狀狔犪狀犵犡犻，犢犪狀犙犻犪狀，犔犲犻犳犪狀犵犎狌犪狀犵．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狉狅犳犲狊狊犻狅狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱犳狅狉犲狀狋狉狔犲狓犻狋犻狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅犿狌犾犵犪狋犲犱犳狅狉狋犺犲犳犻狉狊狋狋犻犿犲．犖狅狋犲：犜犺犻狊犈狀犵犾犻狊犺犞犲狉狊犻狅狀，犪狋狉犪狀狊犾犪狋犻狅狀犳狉狅犿狋犺犲犆犺犻狀犲狊犲狋犲狓狋，犻狊狊狅犾犲犾狔犳狅狉犵狌犻犱犪狀犮犲．７犛犖／犜２０７３—２００８犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犻犿犻犱犪犮犾狅狆狉犻犱狉犲狊犻犱狌犲犻狀狆犾犪狀狋狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱１ 犛犮狅狆犲犜犺犲狊狋犪狀犱犪狉犱狊狆犲犮犻犳犻犲狊狋犺犲犿犲狋犺狅犱狊狅犳狊犪犿狆犾犲狆狉犲狆犪狉犪狋犻狅狀犪狀犱犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犫狔犔犆犕犛／犕犛狅犳犻犿犻犱犪犮犾狅狆狉犻犱狉犲狊犻犱狌犲犻狀狆犾犪狀狋狆狉狅犱狌犮狋狊．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狆犾犻犮犪犫犾犲狋狅狋犺犲犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犻犿犻犱犪犮犾狅狆狉犻犱犻狀犵狉犲犲狀狊狅狔犫犲犪狀狊，犫狉狅犮犮狅犾犻，狉犪犱犻狊犺，犮犺犲狊狋狀狌狋，狉犻犮犲，狆犻犿犻犲狀狋狅犪狀犱狋犲犪．２ 犘狉犻狀犮犻狆犾犲犐犿犻犱犪犮犾狅狆狉犻犱犻狊犲狓狋狉犪犮狋犲犱犳狉狅犿狋犺犲狊犪犿狆犾犲犫狔犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲．犐狋犻狊犮犾犲犪狀犲犱狌狆狑犻狋犺犿犻狓狋狌狉犲犳犾狅狉犻狊犻犾犪狀犱犪犮狋犻狏犲犮犺犪狉犮狅犪犾犮狅犾狌犿狀．犉犻狀犪犾犾狔犻狋犻狊犱犲狋犲狉