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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１７３７．３—２０１０除草剂残留量检验方法第３部分：液相色谱质谱／质谱法测定进出口食品中环己烯酮类除草剂残留量犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犺犲狉犫犻犮犻犱犲狉犲狊犻犱狌犲狊—犘犪狉狋３：犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮狔犮犾狅犺犲狓犪狀犲犱犻狅狀犲狊犺犲狉犫犻犮犻犱犲狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犫狔犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书前 言ＳＮ／Ｔ１７３７《除草剂残留量检验方法》共分为５部分：———第１部分：气相色谱串联质谱法测定粮谷及油籽中酰胺类除草剂残留量；———第２部分：气相色谱／质谱法测定粮谷及油籽中二苯醚类除草剂残留量；———第３部分：液相色谱质谱／质谱法测定进出口食品中环己烯酮类除草剂残留量；———第４部分：液相色谱质谱／质谱法测定进出口食品中芳氧苯氧丙酸酯类除草剂残留量；———第５部分：液相色谱质谱／质谱法测定进出口食品中硫代氨基甲酸酯类除草剂残留量。本部分为ＳＮ／Ｔ１７３７的第３部分。本部分的附录Ａ、附录Ｂ和附录Ｃ均为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。本部分主要起草人：杨长志、刘永、王维、王传松、邓立育、汤敏顺、康庆贺、吴岩、程阳。Ⅰ犛犖／犜１７３７．３—２０１０食品伙伴网除草剂残留量检验方法第３部分：液相色谱质谱／质谱法测定进出口食品中环己烯酮类除草剂残留量１ 范围ＳＮ／Ｔ１７３７的本部分规定了进出口食品中吡喃草酮、禾草灭、噻草酮、烯草酮、稀禾定、丁苯草酮、三甲苯草酮、环苯草酮残留量的液相色谱质谱／质谱测定和确证方法。本部分适用于大米、大豆、猪肉、牛肝、鸡肝、牛奶、橙子、蓝莓、菠菜、洋葱、核桃仁、茶叶中吡喃草酮、禾草灭、噻草酮、烯草酮、稀禾定、丁苯草酮、三甲苯草酮、环苯草酮残留量的检测。２ 方法提要试样中残留的环己烯酮类除草剂用酸性乙腈或乙腈提取，提取液经犖丙基乙二胺（ＰＳＡ）、十八烷基硅烷（ＯＤＳ）和石墨化炭黑净化，用液相色谱质谱／质谱仪检测和确证，外标法定量。３ 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。３．１ 乙腈：色谱纯。３．２ 乙酸（９９．５％）。３．３ 甲酸（８８．０％）。３．４ 乙酸钠。３．５ 氯化钠。３．６ 无水硫酸镁：经６５０℃灼烧４ｈ，置于干燥器内备用。３．７ １％乙酸乙腈溶液：取１０ｍＬ乙酸（３．２），加入９９０ｍＬ乙腈（３．１），混匀。３．８ ６０％乙腈水溶液：取６０ｍＬ乙腈，加入４０ｍＬ水，混匀。３．９ 甲酸水溶液（０．２＋９９９．８，体积比：取０．２ｍＬ甲酸（３．３），用水溶解并稀释至１０００ｍＬ。３．１０ 环己烯酮类标准品：烯草酮（Ｃｌｅｔｈｏｄｉｍ），ＣＡＳ编号：９９１２９２１２，纯度大于等于９９％；吡喃草酮（Ｔｅｐｒａｌｏｘｙｄｉｍ），ＣＡＳ编号：１４９９７９４１９，纯度大于等于９９％；噻草酮（Ｃｙｃｌｏｘｙｄｉｍ），ＣＡＳ编号：１０１２０５０２１，纯度大于等于９３．５％；三甲苯草酮（Ｔｒａｌｋｏｘｙｄｉｍ），ＣＡＳ编号：８７８２０８８０，纯度大于等于９３．５％；禾草灭（Ａｌｌｏｘｙｄｉｍｓｏｄｉｕｍ），ＣＡＳ编号：５５６３５１３７，纯度大于等于９８％；环苯草酮（Ｐｒｏｆｏｘｙｄｉｍｌｉｔｈｉｕｍ），ＣＡＳ编号：１３９００１４９３，纯度大于等于９８．５％；丁苯草酮（Ｂｕｔｒｏｘｙｄｉｍ），ＣＡＳ编号：１３８１６４１２２；纯度大于等于９９％；稀禾定（Ｓｅｔｈｏｘｙｄｉｍ），ＣＡＳ编号：７４０５１８０２，纯度大于等于９９％。３．１１ 标准溶液：３．１１．１ 环己烯酮类标准储备溶液：准确称取适量环己烯酮类的标准品，用乙腈溶解并定容至１００ｍＬ棕色容量瓶中，得浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准储备溶液，此溶液避光储存。３．１１．２ 混合标准中间溶液：准确吸取环己烯酮类的标准储备溶液各２．５ｍＬ于５０ｍＬ棕色容量瓶中，１犛犖／犜１７３７．３—２０１０食品伙伴网用乙腈稀释成浓度为５．０μｇ／ｍＬ的混合标准中间溶液，此溶液避光储存。３．１１．３ 混合标准工作溶液：根据需要使用前用空白样品基质配制适当混合标准工作溶液。３．１２ 石墨化炭黑吸附剂：１２０μｍ～４００μｍ。３．１３ 犖丙基乙二胺（ＰＳＡ）吸附剂：４０μｍ～１００μｍ。３．１４ 十八烷基硅烷（ＯＤＳ）键合相：４０μｍ～１００μｍ。３．１５ 水相滤膜：０．２２μｍ。４ 仪器和设备４．１ 液相色谱质谱／质谱联用仪：配ＥＳＩ电离源。４．２ 电子天平：感量０．０１ｍｇ，０．０１ｇ。４．３ 粉碎机。４．４ 组织捣碎机。４．５ 离心机：４０００ｒ／ｍｉｎ。４．６ 旋涡混合器。４．７ 氮吹仪。４．８ 均质器：１００００ｒ／ｍｉｎ。４．９ 螺旋盖聚丙烯离心管：５０ｍＬ、１５ｍＬ。４．１０ 玻璃具塞离心管：１５ｍＬ。５ 试样制备与保存５．１ 试样制备５．１．１ 橙子、蓝莓、菠菜、洋葱取有代表性样品约５００ｇ（不可用水洗涤），将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。５．１．２ 大豆、大米、茶叶、核桃仁取有代表性样品约５００ｇ，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。５．１．３ 猪肉、牛肝、鸡肝取有代表性样品约５００ｇ，将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将其充分捣碎均匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。５．２ 试样保存大豆、大米、茶叶、核桃仁和牛奶等试样于０℃～４℃保存；橙子、蓝莓、菠菜、洋葱、猪肉、牛肝、鸡肝等试样于－１８℃以下保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。６ 测定步骤６．１ 提取６．１．１ 大豆、大米、茶叶和核桃仁称取试样５ｇ（茶叶试样２ｇ，精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ螺旋盖聚丙烯离心管中，加入１０ｍＬ水，于旋涡混合器上混合３０ｓ，放置１５ｍｉｎ。加入３ｇ无水硫酸镁（３．６）、１ｇ氯化钠（３．５）、１ｇ乙酸钠（３．４）和１５ｍＬ１％乙酸乙腈溶液（３．７），用均质器以１００００ｒ／ｍｉｎ均质２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。将上清液转移至２５ｍＬ容量瓶中。再用１０ｍＬ１％乙酸乙腈溶液重复提取一次，合并提取液于同一２５ｍＬ容量瓶中，并用乙腈定容至刻度，待净化。２犛犖／犜１７３７．３—２０１０食品伙伴网６．１．２ 猪肉、牛肝、鸡肝、牛奶、橙子、菠菜和洋葱称取试样约５ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ螺旋盖聚丙烯离心管中，加入５ｍＬ水、３ｇ无水硫酸镁、１ｇ氯化钠、１ｇ乙酸钠和１５ｍＬ１％乙酸乙腈溶液，用均质器以１００００ｒ／ｍｉｎ均质２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。将上清液转移至２５ｍＬ容量瓶中。再用１０ｍＬ１％乙酸乙腈溶液重复提取一次，合并提取液于同一２５ｍＬ容量瓶中，并用乙腈定容至刻度，待净化。６．１．３ 蓝莓称取试样约５ｇ（精确到０．０１ｇ）于５０ｍＬ螺旋盖聚丙烯离心管中，加入５ｍＬ水、３ｇ无水硫酸镁、１ｇ氯化钠、１ｇ乙酸钠和１５ｍＬ乙腈，用均质器以１００００ｒ／ｍｉｎ均质２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。将上清液转移至２５ｍＬ容量瓶中。再用１０ｍＬ乙腈重复提取一次，合并提取液于同一２５ｍＬ容量瓶中，并用乙腈定容至刻度，待净化。６．２ 净化６．２．１ 大豆、大米、核桃仁、猪肉、牛肝、牛奶、洋葱移取８ｍＬ上述提取液于１５ｍＬ螺旋盖聚丙烯离心管中，加入３００ｍｇ无水硫酸镁、２５０ｍｇＰＳＡ（３．１３）和５００ｍｇＯＤＳ（３．１４），在旋涡混合器上混合２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。准确移取５ｍＬ净化液于１５ｍＬ玻璃具塞离心管中，经６０℃氮吹仪吹干后，用６０％乙腈水溶液（３．８）溶解并定容１．０ｍＬ，过０．２２μｍ滤膜（３．１５）供液相色谱质谱／质谱仪测定。６．２．２ 鸡肝、橙子、菠菜、蓝莓、茶叶移取８ｍＬ上述提取液于１５ｍＬ螺旋盖聚丙烯离心管中，加入３００ｍｇ无水硫酸镁、２５０ｍｇＰＳＡ、５００ｍｇＯＤＳ和１０ｍｇ石墨化炭黑（３．１２），在旋涡混合器上混合２ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。准确移取５ｍＬ净化液于１５ｍＬ玻璃具塞离心管中，经６０℃氮吹仪吹干后，用６０％乙腈水溶液溶解并定容１．０ｍＬ，过０．２２μｍ滤膜供液相色谱质谱／质谱仪测定。６．３ 测定６．３．１ 液相色谱条件ａ） 色谱柱：Ｃ１８，５０ｍｍ×２．１ｍｍ（内径），粒度１．７μｍ，或相当者；ｂ） 流动相：见梯度洗脱程序表１；表１ 梯度洗脱程序表时间／ｍｉｎ甲酸水溶液（３．９）／％乙腈／％０．２５６０４０１．５０６０４０１．６０４０６０２．００４０６０３．００２０８０４．５０２０８０５．００６０４０６．００６０４０３犛犖／犜１７３７．３—２０１０食品伙伴网 ｃ） 流速：０．２５ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ） 柱温：３０℃；ｅ） 进样量：５μＬ。６．３．２ 质谱条件参见附录Ａ。６．３．３ 液相色谱质谱／质谱检测和确证根据样液中被测物的含量情况，选定浓度与样液相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中环己烯酮类响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述液相色谱质谱条件下，环己烯酮类的保留时间分别为吡喃草酮２．８３ｍｉｎ，禾草灭３．４０ｍｉｎ，噻草酮３．８１ｍｉｎ，烯草酮３．８９ｍｉｎ，稀禾定４．０５ｍｉｎ，丁苯草酮４．０８ｍｉｎ，三甲苯草酮４．１７ｍｉｎ，环苯草酮４．８３ｍｉｎ。环己烯酮类标准品的液相色谱质谱／质谱多反应监测色谱图参见附录Ｂ中图Ｂ．１。在上述液相色谱质谱条件下，样品中待测物质保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间的偏差在±２．５％，且样品中被测物质的相对离子丰度与浓度相当标准工作溶液的相对离子丰度进行比较，相对丰度允许相对偏差不超过表２规定的范围，则可确定样品中存在对应的被测物。表２ 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０６．４ 空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。７ 结果计算和表达用ＬＣＭＳ／ＭＳ色谱数据处理机或按式（１）计算试样中环己烯酮类残留含量，计算结果需扣除空白值。 犡犻＝犃犻×犮犻×犞犃ｓ犻×犿…………………………（１） 式中：犡犻———试样中环己烯酮类残留量，单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；犃犻———样液中环己烯酮类的峰面积；犮犻———标准工作液中环己烯酮类的浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ犻———标准工作液中环己烯酮类的峰面积；犿———最终样液所代表的试样质量，单位为克（ｇ）。４犛犖／犜１７３７．３—２０１０食品伙伴网８ 测定低限和回收率８．１ 测定低限本方法的测定低限均为５μｇ／ｋｇ。８．２ 回收率样品的添加浓度及回收率的数据参见附录Ｃ中表Ｃ．１。５犛犖／犜１７３７．３—２０１０食品伙伴网附 录 犃（资料性附录）质谱参考条件表犃．１ 质谱参考条件１）离子源ＥＳＩ，正模式扫描方式多反应监测ＭＲＭ源温度１１０℃去溶剂气流量５５０Ｌ／ｈ，氮气去溶剂温度３５０℃锥孔气流量５０Ｌ／ｈ，氮气碰撞气压力３．３０×１０－３ｍｂａｒ，氩气，纯度≥９９．９９９％毛细管电压３．０ｋＶ表犃．２ 多反应监测条件化合物母离子（ｍ／ｚ）子离子（ｍ／ｚ）驻留时间／ｓ锥孔电压／Ｖ碰撞能量／ｅＶ禾草灭３２４．７１７８．４０．０２２３２１２６６．５ａ０．０２２３１２噻草酮３２