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ICS67.080.01X24DB61陕西省地方标准DB61/T954—2015水果及果汁产品中多种农药残留量测定方法液相色谱-串联质谱法DeterminationofMultiplePesticideResiduesinFruitsandFruitJuices—LC-MS/MS2015-02-12发布2015-05-01实施陕西省质量技术监督局发布DB61/T954—2015I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由陕西出入境检验检疫局提出。本标准由陕西省质量技术监督局归口。本标准由陕西出入境检验检疫局负责解释。本标准起草单位：陕西出入境检验检疫局，宝鸡出入境检验检疫局，西安理工大学。本标准主要起草人：何强、孔祥虹、李建华、邹阳、张璐、巨亚杰、刘学芝、付骋宇、李莹。本标准首次发布。联系信息如下：单位：陕西出入境检验检疫局；电话：029-85407235；地址：西安市含光北路10号；邮编：710068。DB61/T954—20151水果及果汁产品中多种农药残留量测定方法液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了水果及果汁产品中61种农药（见附表A.1）残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。本标准适用于苹果、梨、石榴、猕猴桃、葡萄、柑桔、苹果汁、梨汁、石榴汁、猕猴桃汁、葡萄汁等水果及果汁产品中61种农药残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样中加入磷酸氢二钠缓冲溶液，调pH后用乙腈萃取，N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4术语和定义下列术语和定义适用于本标准。4.1定量限LimitofQuantity是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。5试剂和材料5.1除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.2乙腈：色谱纯。5.3甲醇：色谱纯。5.4磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。5.5氯化钠。5.6氢氧化钠。5.7无水硫酸钠：650℃灼烧4h，贮于密封容器中备用。5.8甲酸：色谱纯。5.9氢氧化钠溶液（2mol/L）5.10称取8g氢氧化钠，用水溶解并定容至100mL。DB61/T954—201525.11磷酸氢二钠缓冲液：称取50g磷酸氢二钠、300g氯化钠，用水溶解并定容至1000mL。5.12乙腈-甲醇（1+1，V/V）：取50mL乙腈、50mL甲醇混合均匀。5.13甲酸溶液（0.1%）：取500mL超纯水，加入500μL甲酸，混匀。5.14甲醇-甲酸溶液（65+35，V/V）：取65mL甲醇，加入本标准5.13条规定的甲酸溶液35mL，混匀。5.15农药标准物质：相关信息见附录A中表A.1。5.16标准储备液：分别称取适量的农药标准物质，用甲醇配制成0.5mg/mL或1.0mg/mL的溶液。-18℃避光保存。5.17混合标准溶液：分别移取各个农药的标准储备液，用甲醇定容，配制成浓度均为5μg/mL的标准混合溶液，-18℃避光保存。5.18基质混合标准工作溶液：用样品空白溶液配制，现用现配。5.19N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱：500mg/3mL或相当者。使用前在柱上端装填约2cm高的本标准5.7条要求的无水硫酸钠，然后用5mL乙腈活化，保持柱体湿润。5.20微孔滤膜：0.2μm，有机系。6仪器和设备6.1液相色谱-串联质谱仪：配有ESI电离源、串联四级杆质量分析器。6.2分析天平：感量0.01mg、0.01g。6.3组织捣碎机。6.4振荡器。6.5固相萃取装置。6.6离心机：转速不低于4000r/min。6.7减压旋转蒸发器。7试样制备与保存7.1取代表性水果样品约500g，将其可食用部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于-18℃冷冻避光保存。7.2取代表性果汁样品约500g，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于4℃避光保存。7.3在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。8测定步骤8.1提取净化8.1.1称取2.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入6mL磷酸氢二钠缓冲液，振摇1min，用氢氧化钠溶液调节pH至8～9，加入10.0mL乙腈，振荡提取10min，4000r/min离心5min。8.1.2准确取5.0mL上层乙腈提取液，上样于活化好的N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱，然后用5mL乙腈-甲醇洗脱，固相萃取过程保持流速2～3mL/min，收集上样液和洗脱液于50mL玻璃浓缩瓶中。8.1.3收集液于40℃旋转蒸发至近干，用1.00mL甲醇-甲酸溶液溶解定容，过0.2μm微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱仪检测。8.2测定DB61/T954—201538.2.1液相色谱参考条件a)色谱柱：HSST3柱1)，长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm，或相当者；b)流动相：甲醇-甲酸溶液梯度洗脱，参见表1，梯度变化模式为线性递增或递减；表1流动相条件时间（min）流速（mL/min）甲醇（%）甲酸溶液（%）0.000.3020803.000.3060406.000.3060409.500.3095512.000.3095512.200.30208014.000.302080a)柱温：35ºC；b)进样量：5.0μL；c)61种农药的参考色谱保留时间参见附录B中表B.1。8.2.2质谱参考条件a)电离方式：ESI+；b)毛细管电压：3kV；c)萃取电压：3V；d)脱溶剂气：氮气，纯度≥99.9%，500L/h；e)锥孔气：氮气，纯度≥99.9%，50L/h；f)碰撞气：氩气，纯度≥99.999%，0.2mL/min；g)脱溶剂气温度：400ºC；h)离子源温度：115ºC；i)采集模式：多重反应监测模式（MRM）；j)多重反应监测条件参见附录B中表B.1。注：8.2.2为典型的质谱检测参数，选用不同仪器，可根据具体情况进行调整。8.3定量测定及定性确证8.3.1定性鉴定对标准工作液及样液按本标准8.2规定的条件进行测定时，如果样液与标准工作液的选择离子流图中，样液中目标物质的保留时间与相近浓度标准溶液的保留时间偏差在±2.5%以内；且定性离子对的相对丰度与相近浓度标准溶液对应定性离子对的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。1)1)HSST3柱是商品名称，给出这一信息只是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。DB61/T954—20154表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/(%)5020至5010至20≤10允许的相对偏差/(%)±20±25±30±508.3.2定量测定根据样液中农药残留含量情况，选定与样液浓度相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中农药的响应值均应在仪器检测线性范围内，如果样液中农药含量超出检测的线性范围，则稀释后再进样。对标准工作溶液和样液等体积分时段参插进样测定，外标法定量。8.4空白试验除不加试样外，均按上述检测步骤进行。8.5结果计算和表述8.5.1用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中各个农药残留量。10001000×××××=mAVcAXss…………………………………………（1）式中：X——试样中农药的含量（mg/kg）；A——样液中农药的色谱峰面积；cs——标准工作液中农药的浓度(μg/mL)；V——样液最终定容体积(mL)；As——标准工作液中农药的色谱峰面积；m——最终样液所代表的试样量(g)。8.5.2计算结果保留两位有效数字。9检出限、定量限、回收率9.1检出限、定量限本方法中61种农药的检出限均为0.003mg/kg，定量限均为0.01mg/kg。9.2回收率不同样品基质中61种农药的加标回收率均在65%～125%范围内，平均回收率均大于75%，回收率相对标准偏差均低于15%。DB61/T954—20155附录A（规范性附录）农药标准物质信息表A.1农药标准物质基本信息序号化合物英文名称CAS.号应用分子式分子质量表B.1中序号1苯醚甲环唑Difenoconazole119446-68-3杀菌剂C19H17Cl2N3O3405.0647532吡虫啉Imidacloprid138261-41-3杀虫剂C9H10ClN5O2255.052363吡虫清Acetamiprid135410-20-7杀虫剂C10H11ClN4222.067274丙环唑Propiconazole60207-90-1杀菌剂C15H17Cl2N3O2341.0698455残杀威Propoxur114-26-1杀虫剂C11H15NO3209.1052136除虫脲Diflubenzuron35367-38-5杀虫剂C14H9ClF2N2O2310.0321387哒螨灵Pyridaben96489-71-3杀螨剂/杀虫C19H25ClN2OS364.1376618敌百虫Trichlorfon52-68-6杀虫剂C4H8Cl3O4P255.922689敌敌畏Dichlorvos62-73-7杀螨剂/杀虫C4H7Cl2O4P219.94591210毒死蜱Chlorpyrifos2921-88-2杀虫剂C9H11Cl3NO3PS348.92635811多菌灵Carbendazim10605-21-7杀菌剂C9H9N3O2191.0695312多效唑Paclobutrazol76738-62-0生长调节剂C15H20ClN3O293.12953213二嗪磷Diazinon333-41-5杀虫剂C12H21N2O3PS304.10114614氟苯嘧啶醇Nuarimol63284-71-9杀菌剂C17H12ClFN2O314.06223015氟虫脲Flufenoxuron101463-69-8杀螨剂/杀虫C21H11ClF6N2O3488.03626016氟硅唑Flusilazole85509-19-9杀菌剂C16H15F2N3Si315.10033917氟菌唑Triflumizole99387-89-0杀菌剂C15H15ClF3N3O345.08565118环氟菌胺Cyflufenamid180409-60-3杀菌剂C20H17F5N2O2412.1214819甲胺磷Methamidophos10265-92-6杀螨剂/杀虫C2H8NO2PS141.0013120甲基嘧啶磷Pirimiphos-meth29232-93-7杀虫剂C11H20N3O3PS305.09634421甲萘威Carbaryl63-25-2杀虫剂C12H11NO2201.0791722甲霜灵Metalaxyl57837-19-1杀菌剂C15H21NO4279.14712223腈菌唑Myclobutanil88671-89-0杀菌剂C15H17ClN4288.11423424抗蚜威Pirimicarb23103-98-2杀虫剂C11H18N4O2238.143925克百威Carbofuran1563-66-2杀虫剂C12H15NO3221.10521426氯苯嘧啶醇Fenarimol60168-88-9杀菌剂C17H12Cl2N2O330.03273627氯吡脲Forchlorfenuron68157-60-8生长调节剂C12H10ClN3O247.05122428嘧啶磷Pirimiphos-ethy23505-41-1杀虫剂C13H24N3O3PS333.12765529嘧菌环胺Cyprodinil121552-61-2杀菌剂C14H15N3225.12663