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ICS65.020.40B60DB41河南省地方标准DB41/T1746—2018紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程2018-12-06发布2019-03-06实施河南省市场监督管理局发布DB41/T1746—2018I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省林业厅提出并归口。本标准起草单位：河南省农业科学院园艺研究所。本标准主要起草人：李艳敏、王利民、符真珠、董晓宇、尚泓泉、王慧娟、张和臣、蒋卉、高杰、张晶、师曼、袁欣、王耀瑭、崔巍。DB41/T1746—20181紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程1范围本标准规定了紫叶加拿大紫荆组培快繁技术相关的术语及定义、培养基配制、组培快繁程序、炼苗移栽等内容。本标准适用于河南省境内紫叶加拿大紫荆组培快繁技术。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T1882林木组织培养育苗技术规程3术语及定义下列术语和定义适用于本文件。3.1紫叶加拿大紫荆紫叶加拿大紫荆（CercisCanadensis‘ForestPansy’）是加拿大紫荆的一个品种，属豆科紫荆属，落叶小乔木或灌木；花粉红色，春季先叶开放，花期3～4月；叶片心形，春夏秋三季紫红色，是重要的彩叶观赏植物。3.2植物组培快繁在无菌条件下，将离体的植物材料接种到培养基上，在适宜的培养条件下，使其形成完整的植株，达到快速增殖目的的一种繁育方法。3.3外植体用于植物组织培养的离体植物器官、组织及原生质体。4培养基配制按照LY/T1882的规定执行。基本培养基采用WoodyPlantmedium（WPM）和MurashigeSkoogmedium（MS），成分及用量见附录A和附录B。培养基中添加的植物生长调节物质的浓度及配制参见附录C。5组培快繁程序DB41/T1746—201825.1外植体采集与消毒4月中旬，选择生长健壮、无病虫害植物的半木质去叶新梢作为外植体。将新梢剪成1cm～2cm的带腋芽茎段，按下列程序消毒：自来水下冲洗20min，之后转移至超净工作台上，先用75%的乙醇消毒30s，再用1%的次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗1遍后，用0.5%的次氯酸钠消毒10min～13min，最后用无菌水冲洗3～4遍。5.2培养条件温度25℃±2℃，光照强度25μmol·m-2·s-1，光照时间12h/d。5.3启动培养将消毒后的外植体接种至启动培养基：WPM+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，7d～10d外植体开始萌发，30d后芽长至2cm～3cm时进行增殖培养。5.4增殖培养将启动培养诱导形成的高度为2cm～3cm幼芽切下，转接至增殖培养基：WPM+6-BA1.5mg/L～2.5mg/L+NAA0.05mg/L～0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，增殖周期为30d。5.5生根培养将高度为4cm～6cm的无根幼苗进行两步生根培养：第一步转入1/2MS+IBA5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L培养基，黑暗培养11d进行根诱导；第二步转入MS+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L培养基，在光照下继续培养。6炼苗移栽6.1炼苗生根培养30d后，当幼苗基部长出3～5条长1cm的新根即可进行炼苗。将生根瓶苗在温室内放置5d，然后半开瓶口1d～2d，是瓶苗逐步适应外界的环境。温室温度在20℃～30℃，湿度在60%～90%。6.2基质准备6.2.1基质配制移栽基质选用草炭和珍珠岩的混合基质，二者的体积比为3：1.6.2.2基质消毒移栽前用50%多菌灵可湿性粉剂500倍液喷匀基质，充分搅拌后用薄膜密封，堆置7d后揭开薄膜，晾24h即可使用。6.3移栽炼苗结束后，取出培养瓶中的生根组培苗，用清水洗净根系粘附的培养基，栽入6.5cm×6.5cm的营养钵中，摆放在温室苗床上，并立即浇透水。6.4移栽后管理DB41/T1746—201836.4.1温、湿度管理移栽后立即搭小拱棚密闭保湿，保持小苗的生长温度25℃±3℃，相对湿度90%以上。移栽10d～15d后，逐渐揭膜，透气通风，直至完全适应外界的环境。6.4.2光照管理组培苗移栽后，用遮光率为50%～75%的遮阳网遮阴。小苗长出新叶后，及时撤去遮阳网。6.4.3施肥当新叶出现时进行首次施肥，以后每隔2～3周追肥一次，施用N-P2O5-K2O比例为20-20-20的水溶性平衡肥，稀释1000～2000倍叶面喷施。DB41/T1746—20184AA附录A（规范性附录）WPM基本培养基母液配制WPM基本培养基母液配制见表A.1。表A.1WPM基本培养基母液配制类别成分配方用量mg/L称取量mg配1L培养基吸取量mL大量元素母液硝酸铵400800050硫酸钾99019800磷酸二氢钾1703400硫酸镁3707400硝酸钙5561120氯化钙961920微量元素母液硫酸锰22.545005硫酸锌8.61720硼酸6.21240钼酸钠0.2550硫酸铜0.2550铁盐母液硫酸亚铁27.855605乙二胺四乙酸二钠37.37460有机物母液肌醇100200005烟酸0.5100盐酸硫胺素1.0200盐酸吡哆醇0.5100甘氨酸2.0400DB41/T1746—20185BB附录B（规范性附录）MS基本培养基母液配制MS培养基母液的配制见表B.1。表B.1MS培养基母液配制类别成分配方用量mg/L配制母液称取量mg/L配1升培养基吸取量mL大量元素母液硝酸铵16503300050硝酸钾190038000磷酸二氢钾1703400硫酸镁3707400氯化钙4408800微量元素母液硫酸锰22.344605硫酸锌8.61720硼酸6.21240碘化钾0.83166钼酸钠0.2550氯化钴0.0255硫酸铜0.0255铁盐母液硫酸亚铁27.855605乙二胺四乙酸二钠37.37460有机物母液肌醇100200005烟酸0.5100盐酸硫胺素0.120盐酸吡哆醇0.5100甘氨酸2400DB41/T1746—20186CC附录C（资料性附录）植物生长调节物质的浓度及配制植物生长调节物质的浓度及配制参见表C.1。表C.1植物生长调节物质的浓度及配制名称浓度mg/mL配制方法6-苄氨基腺嘌呤（6-benzyladenine，简称6-BA）1称取0.1g药品，先用0.1mol/L的HCl溶解，然后用蒸馏水定容至100mL。α-萘乙酸（α-naphthaleneaceticacid，简称NAA）1称取0.1g药品，先用0.1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容至100mL。吲哚丁酸（indolebutyricacid，简称IBA）1称取0.1g药品，先用95%的酒精溶解，然后用蒸馏水定容至100mL。_________________________________