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ICS11.200B41备案号：58785-2018DB32江苏省地方标准DB32/T3395-2018鸡孵化厂菌落总数检测与评判Detectionandevaluationofthetotalnumberofcoloniesinincubationplant2018-5-10发布2018-6-10实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T3395—2018I前 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由常州市质量技术监督局提出。本标准由常州市农业委员会归口。本标准起草单位：江苏立华牧业股份有限公司。本标准主要起草人：许长娣、黄祖芬、袁青妍、薛亚梅、李得梅、钱程、熊平文。DB32/T3395—20185鸡孵化厂菌落总数检测与评判1范围本标准规定了孵化厂的种蛋表面、空气、水质、绒毛和其它设施设备表面的菌落总数检测方法与评判标准。本标准适用于孵化厂内部的菌落总数检测与评判。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订版）适用于本标准。NY5027-2008无公害食品畜禽饮用水水质3种蛋表面3.1采样与检测3.1.1采样位置：对于消毒前种蛋，在一个蛋车的最上面一层蛋盘、最中间一层蛋盘、最下面一层蛋盘各取每个蛋盘最中间一枚种蛋，共采取5个蛋车的样本。5个蛋车共计采样15枚种蛋。种蛋消毒过后，采用同样的方法采样。3.1.2采样方法：将特制规板的圆形部分（直径为3.5cm，面积为9.62㎝²）进行火焰灭菌，待冷却后将规板套在待检测种蛋的大头部分，在装有5mL灭菌生理盐水的玻璃试管中浸湿灭菌的棉签，在玻璃试管壁上挤去多余的盐水，然后在规板范围内滚动棉签，涂抹待检测蛋表面30s完成一个采样。规板图示见附录A。折去棉签手持部位，使采样部位落入5mL灭菌生理盐水玻璃试管中，并与生理盐水充分混合，带回实验室检验。3.1.3检测要求：对于消毒前种蛋，吸取用灭菌生理盐水稀释10倍的样品水溶液0.5mL，注入直径9cm的灭菌平皿中，然后倾注20mL已融化并冷却到40℃~50℃的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水溶液与培养基充分混匀。每次检验时，应用单独一个平皿只倾注营养琼脂培养基作空白对照。对于消毒后的种蛋，直接吸取0.5mL样品水溶液，处理方法同前。在37℃培养箱内培养24h，进行细菌计数。3.2菌落总数计数（CFU/㎝²）3.2.1消毒前种蛋单位面积菌落总数计算方法如下：N=（A×100）/9.62备注:式中DB32/T3395—20185N：种蛋表面每平方厘米菌落总数A：培养皿中的菌落数3.2.2消毒后种蛋单位面积菌落总数计算方法如下：N=（A×10）/9.62备注:式中N：种蛋表面每平方厘米菌落总数A：培养皿中的菌落数3.3判定判定标准详见表1表1种蛋菌落总数判定标准采样每平方厘米菌落总数（CFU/㎝²）判定消毒前种蛋400合格≥400不合格消毒后种蛋8.7合格≥8.7不合格4.空气4.1采样位置及方法4.1.1采样位置在以下位置进行空气采样：a)孵化机：入口和出口b)孵化厅：两头和中间c)出雏机：左右两边d)出雏厅：两头和中间e)苗鸡房：四角和中央f)疫苗间：四角和中央g)种蛋室：四角和中央4.1.2采样器皿提前24h用平板制作好普通营养琼脂培养基，密闭备用。4.1.3采样方法DB32/T3395—20185在上述采样位置，各放置一直径9cm的普通营养琼脂培养皿，打开培养皿盖暴露15min后盖好盖子回收。4.2检测4.2.1回收的平板在37℃培养箱中培养24h。4.2.2计算平板上的菌落数。4.2.3菌落总数判定标准见表2。表2空气菌落总数判定标准采样菌落总数（CFU/㎝²）判定苗鸡房350合格≥350不合格出雏机/出雏厅30合格≥30不合格孵化机/种蛋室/疫苗间/孵化厅20合格≥20不合格5雏鸡绒毛5.1采样方法：使用灭菌样品袋采集出雏机内的绒毛2g~3g，带回化验室检测。5.2细菌培养：无菌称取0.5g绒毛与50mL无菌蒸馏水混合1h，过滤去除绒毛。取1mL过滤后的水溶液倒在营养琼脂平板上，在37℃培养箱中培养24h。5.3判定标准：单位面积菌落总数小于1.0×104CFU/cm²，判定为合格。6加湿水加湿水按照NY5027标准进行判定，菌落总数小于10MPN/100mL判定为合格用水。7其它孵化设施设备表面7.1采样位置DB32/T3395—20185其它设施设备表面在以下位置表面进行采样：a)孵化机内壁b)孵化机蛋架c)孵化机蛋车d)孵化机胚蛋表面（1胚龄-3胚龄或15胚龄-17胚龄）e)出雏机内壁f)出雏机蛋盘g)疫苗间墙壁h)疫苗用容器i)疫苗间工作台面j)蛋筐k)蛋托l)苗鸡箱垫纸（消毒前和消毒后）7.2检测7.2.1当待检测部位的面积较大时，用特制规板的圆形部分（直径为3.5cm，面积为9.62㎝²）；否则用特制规板的正方形部分（边长为1cm，面积为1.0㎝²），检测方法同3.1.2和3.1.3。7.2.2判定判定合格指标见表4。表3其它孵化设施设备表面菌落总数判定合格指标采样合格指标（CFU/㎝²）孵化机内壁、孵化机蛋架、孵化机蛋车、孵化机胚蛋表面、出雏机内壁、出雏机蛋盘、蛋筐、蛋托、苗鸡箱垫纸≤12疫苗间墙壁、疫苗用容器、疫苗间工作台面≤48孵化厂菌落总数检测频率以上项目每20天检测一次，遇特殊异常情况，需要增加检测频率。孵化厂内部检测项目见附录B。DB32/T3395—20185附录A（规范性附录）规板图示A.1规板图示见图A1图A1规板图DB32/T3395—20185附录B（规范性附录）孵化厂内部检测项目B.1孵化厂内部检测项目见表B1。表B1孵化厂内部检测项目检测项目采样地点采样位置采样数量培养基类别种蛋表面蛋盘中15个×1普通空气孵化机入口、出口2个×2普通孵化厅两头、中间3普通出雏机左、右2个×2普通出雏厅两头、中间3普通苗鸡房四角、中央5普通疫苗间四角、中央5普通种蛋室四角、中央5普通雏鸡绒毛出雏机内部2-3克普通加湿水加湿器1普通其它孵化设施设备孵化机左右内壁2个普通孵化机蛋架2个普通孵化机蛋车2个普通孵化机胚蛋表面2个×2普通出雏机内壁2普通出雏机蛋盘对角3普通疫苗间墙壁2普通疫苗间容器2普通疫苗间工作台面2个普通蛋筐2蛋托2普通苗鸡箱垫纸消毒前后表面1个×2普通A_________________________________