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ICS67.060B25DB36江西省地方标准DB36/T1025—2018饲料中呕吐毒素的快速筛查胶体金快速定量法Screeningofvomitoxininanimalfeedingstuffs——rapidquantitativemethodofcolloidalgoldtechnique2018-03-19发布2018-09-20实施江西省质量技术监督局发布DB36/T1025—2018I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13原理..............................................................................14试剂和材料........................................................................15仪器和设备........................................................................26样品制备与留存....................................................................27检测步骤..........................................................................28结果表述..........................................................................39重复性............................................................................3附录A（资料性附录）胶体金快速定量检测条性能评价要求................................4DB36/T1025—2018II前言本标准按照GB/T1.1《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由江西省农业厅提出并归口。本标准起草单位：江西省兽药饲料监察所、北京勤邦生物技术有限公司、拜发分析系统销售（北京）有限公司、双胞胎（集团）股份有限公司、江西正邦科技股份有限公司。本标准主要起草人：符金华、杨琳芬、李瑾瑾、赵正苗、龙光宗、崔廷婷、廖丰、刘四宁、贺丽丽、彭正学、王玉兰、徐国茂、赵薇娜、徐田放。DB36/T1025—20181饲料中呕吐毒素的快速筛查胶体金快速定量法1范围本标准规定了饲料中呕吐毒素的胶体金快速定量检测方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备与留存、检测步骤、结果表述和重复性。本标准适用于饲料产品及饲料原料中呕吐毒素的快速定量检测。检测限为0.5mg/kg，检测范围为0.5mg/kg～5.5mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测3原理样品提取液中呕吐毒素的与检测条中胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与样品中呕吐毒素的含量相关。用读数仪测定检测条的颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出样品中呕吐毒素的含量。4试剂和材料4.1试剂纯度饲料中呕吐毒素的快速筛查胶体金快速定量法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T6682二级水的规定。4.2呕吐毒素残留检测试纸条符合附录A规定的技术要求，并按说明书要求保存。4.3样本提取液0.1%的TritonX-100水溶液：量取1L实验用溶液，加入1gTritonX-100，混匀。商品试剂盒中提供此溶液。4.4氢氧化钠（NaOH1.00mol/L）称取40g氢氧化钠，加水定容至1000mL，混匀。DB36/T1025—201824.5盐酸（HCL1.00mol/L）：量取83.33mL，ρ=1.18g/mL的盐酸，加水定容至1000.00mL，混匀。5仪器和设备5.1天平感量0.01g。5.2涡旋仪转速不低于1500r/min。5.3离心机转速不低于3000r/min。5.4微量移液器20μL～200μL。5.5读数仪可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果。6样品制备与留存6.1样品制备按GB/T20195要求制备样品，取有代表性的样品至少500g，粉粹及粉碎至全部通过0.85mm筛，混匀。6.2样品留存如需留样，样品应置于-10℃～-20℃下避光保存。7检测步骤7.1样品提取7.1.1称取(5.00±0.01)g谷物样品至50.00mL聚苯乙烯离心管中，加入10.00mL70%甲醇，将瓶塞盖紧，涡动3min，室温3000r/min以上离心5min，取100μL上清液加入200μL样本稀释液，混匀，待测。7.1.2非谷物基质，如果上清液pH值小于6或大于8，则需要用1.00mol/L氢氧化钠溶液或1.00mol/L盐酸溶液调节pH至7左右，然后取100μL此溶液加入200μL样本稀释液，混匀，待测。7.2样品检测7.2.1将胶体金检测条取出放置至最适试验温度23℃～25℃。将读数仪打开，按照提示输入样品，检测人员，检测项目，方法等相关信息。将比色卡平放于桌面，用读数仪扫描比色卡上的二维码，等待检测。DB36/T1025—201837.2.2准确移取100μL待测溶液，加入检测条加样孔中，准确计时5min。7.2.3孵育5min后，用读数仪扫描检测卡，按下读取键，几秒钟读数仪的屏幕上即可显示测试样中呕吐毒素的含量信息。7.2.4如结果显示：invalid,如果检测条上质控线（C线）无色，测试线（T线）上颜色肉眼可见很深，则表明试样中呕吐毒素含量非常高，可将试样提高稀释倍数，重新进行检测。8结果表述呕吐毒素含量以mg/kg表示，由读数仪直接显示和读取。9重复性在相同测定条件下的两次独立测试结果的绝对差值大于算术平均值20%的情况不超过5%。DB36/T1025—20184AA附录A（资料性附录）胶体金快速定量检测条性能评价要求本附录参照GB/T27404的要求，规定了胶体金定量检测试纸条的技术性能要求，用于对胶体金快速定量检测类产品的技术性能进行验证，以确认其适用于本方法。A.1.1准确度采用700.00µg/kg、1000.00µg/kg和2000.00µg/kg三个浓度水平的样品，每个浓度水平测定不低于6次，通过偏差来表达，3个浓度水平的6次重复的偏差均应控制在-20%～+20%之间。A.1.2精密度采用1000.00µg/kg浓度水平的实际样品，测定不低于6次，通过批内变异系数来表达，变异系数应≤20%。A.1.3检测限计算20份阴性样品测定均值加3倍标准差，其结果应小于或等于产品灵敏度标示值。A.1.4批间稳定性采用700.00µg/kg左右浓度水平的阳性样品，用至少6个不同批次的试剂条进行实验，每个批次测定不低于2次，批内测定取平均值，通过批间变异系数来表达，变异系数应≤25%。A.2质控检测阴性质控和阳性质控以验证检测条性能，购买有标准证书的阴性参考样及阳性参考样进行质控，可根据参考样的证书上的真实含量水平对检测体系进行质控。_________________________________