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ICS67.060B25DB36江西省地方标准DB36/T1027—2018饲料中赭曲霉毒素A的快速筛查胶体金快速定量法ScreeningofochratoxinAinanimalfeedingstuffs——rapidquantitativemethodofcolloidalgoldtechnique2018-03-19发布2018-09-20实施江西省质量技术监督局发布DB36/T1027—2018I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13原理..............................................................................14试剂和材料........................................................................15仪器和设备........................................................................16样品制备与留存....................................................................27检测步骤..........................................................................28结果表述..........................................................................39重复性............................................................................3附录A（资料性附录）胶体金快速定量检测条性能评价要求................................4DB36/T1027—2018II前言本标准按照GB/T1.1《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由江西省农业厅提出并归口。本标准起草单位：江西省兽药饲料监察所、中检环贸生物技术（北京）有限公司、中国农业科学院北京畜牧研究所、双胞胎（集团）股份有限公司、江西正邦科技股份有限公司。本标准主要起草人：杨琳芬、符金华、李瑾瑾、李华、张军民、饶正华、廖丰、刘四宁、徐国茂、董泽民、刘国花、黄艳清、邢磊、尹腾桂。DB36/T1027—20181饲料中赭曲霉毒素A的快速筛查胶体金快速定量法1范围本标准规定了饲料中赭曲霉毒素A的胶体金快速定量检测方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备与留存、检测步骤、结果表述和重复性。本标准适用于饲料产品及饲料原料中赭曲霉毒素A的快速定量检测。检测限为2μg/kg，检测范围为2μg/kg～150μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测3原理样品提取液中赭曲霉毒素A与检测条中胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与样品中赭曲霉毒素A含量相关。用读数仪测定检测条的颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出样品中赭曲霉毒素A的含量。4试剂和材料4.1试剂纯度饲料中赭曲霉毒素A的快速筛查胶体金快速定量法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T6682二级水的规定。4.2赭曲霉毒素A检测试纸条符合附录A规定的技术要求，并按说明书要求保存。4.3稀释缓冲液与胶体金检测条配套提供，或按照其说明书配制。4.4提取液70%（v/v）甲醇溶液或胶体金检测条配套的提取液。5仪器和设备DB36/T1027—201825.1天平分度值0.01g。5.2粉碎机样品粉碎后后全部通过0.85mm筛。5.3离心机转速不低于4000r/min。5.4涡旋振荡器转速不低于1500r/min。5.5孵育器调节时间、温度,控温精度±1℃。5.6读数仪可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果。6样品制备与留存6.1样品制备按GB/T20195要求制备样品，取有代表性的样品至少500g，粉粹及粉碎至全部通过0.85mm筛，混匀。6.2样品留存如需留样，样品应置于-10℃～-20℃下避光保存。7检测步骤7.1样品提取准确称取10.00g试样于100mL具塞锥形瓶中，加入20.00mL试样提取液，密闭，用涡旋振荡器振荡1min～2min，静置后用滤纸过滤，或取1.00mL～1.50mL混合液于离心管中，用离心机（4000r/min）离心1min。取滤液或离心后上清液100μL于另一离心管中，加入1.00mL稀释缓冲液，充分混匀待测。7.2样品测定7.2.1将孵育器预热至孵育温度45℃。将检测条平放在孵育器凹槽中，打开加样槽。7.2.2准确移取300μL待测溶液，加入检测条加样孔中，关闭孵育器盖。7.2.3孵育5min后，取出检测条观察质控线和检测线显色情况，必须出现清晰齐整的质控线即C线。若C线不出现或T线显色不清晰不均匀，视为检测条无效。7.2.4选取读数仪赭曲霉毒素A检测频道中“基质00”（MATRIX00）样品测定类型进行测定，测定需在2min内完成，读数仪显示样品中赭曲霉毒素A的含量。若读数仪显示“30+”，需将样品稀释后，读DB36/T1027—20183数仪设定为“基质01”（MATRIX01）样品测定类型重新进行测定。稀释方法为：移取300μL稀释提取液于离心管中，加入1.00mL稀释缓冲液后混匀，按7.2.1～7.2.4重新测定。8结果表述赭曲霉毒素A含量以μg/kg表示，由读数仪直接显示和读取。9重复性在相同测定条件下的两次独立测试结果的绝对差值大于算术平均值20%的情况不超过5%。DB36/T1027—20184AA附录A（资料性附录）胶体金快速定量检测条性能评价要求本附录参照GB/T27404的要求，规定了胶体金定量检测试纸条的技术性能要求，用于对胶体金快速定量检测类产品的技术性能进行验证，以确认其适用于本方法。A.1准确度采用5μg/kg、10μg/kg和20μg/kg三个浓度水平的阳性样品，每个浓度水平测定不低于6次，通过偏差来表达，3个浓度水平的偏差均应控制在-20%～+20%之间。A.2精密度采用5μg/kg浓度水平的实际样品，测定不低于6次，通过批内变异系数来表达，变异系数应≤20%。A.3检测限计算20份阴性样品测定均值加3倍标准差，其结果应小于或等于产品灵敏度标示值。A.4批间稳定性采用5μg/kg左右浓度水平的阳性样品，不得低于6个批次，每个批次测定不低于2次，批内测定取平均值，通过批间变异系数来表达，变异系数应≤25%。A.5质控检测阴性质控和阳性质控以验证检测条性能，购买有标准证书的阴性参考样及阳性参考样进行质控，可根据参考样的证书上的真实含量水平对检测体系进行质控。_________________________________