DB41∕T 1574-2018 芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定 高效液相色谱法

ICS65.080G20DB41河南省地方标准DB41/T1574—2018芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定高效液相色谱法2018-04-17发布2018-07-17实施河南省质量技术监督局发布DB41/T1574—2018I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省质量技术监督局提出。本标准起草单位：河南省产品质量监督检验院。本标准主要起草人：郭蕊、孙晓霞、丁国涛、侣丽莎、仵春、赵海波、鲍春铭。DB41/T1574—20181芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定方法。本标准适用于以芝麻饼为原料，经微生物发酵、加工制成的芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定。本方法的检出限为：芝麻素0.02mg/100g；芝麻林素0.04mg/100g。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY525—2012有机肥料3方法提要试样中芝麻素、芝麻林素经乙醇溶液超声提取，以甲醇+水为流动相，在波长287nm处使用C18反相高效液相色谱柱进行分离，外标法定量。4鉴别试验本鉴别试验可与芝麻素（或芝麻林素）含量的测定同时进行。在相同的色谱条件下，试样溶液某一色谱峰的保留时间与标样溶液色谱图上芝麻素（或芝麻林素）色谱峰的保留时间，其相对差值在1.5%以内，即可确认试样中含有芝麻素或芝麻林素。当以上方法对芝麻素（或芝麻林素）鉴别有疑问时，可采用其他有效方法进行鉴别。5试剂和材料芝麻素标样：已知质量分数≥98.0%；芝麻林素标样：已知质量分数≥98.0%；甲醇：色谱纯；乙醇：优级纯，8+2溶液；标准储备液：称取0.0100g（精确至0.0001g）芝麻素标样于100mL容量瓶中，加入80mL乙醇溶液，超声5min，取出，冷却至室温，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀。配制成100µg/mL芝麻素标准贮备液，于4℃避光保存。采用同样的方法，称取0.0100g（精确到0.0001g）芝麻林素标样，配制成100µg/mL芝麻林素标准贮备液，于4℃避光保存。6仪器和设备高效液相色谱仪：具紫外可变波长检测器或二极管阵列检测器；DB41/T1574—20182色谱数据处理机或色谱工作站；色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm（i.d.)，5µm，或柱效相当的色谱柱；进样器：20µL；过滤器：滤膜孔径为0.45µm；涡旋混匀器；超声波振荡器；离心机。7标准曲线的制备7.1标准溶液的制备准确量取1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL、20.0mL、40.0mL芝麻素和芝麻林素标准储备液于100mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀。其质量浓度为1µg/mL、2µg/mL、5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL、50µg/mL的芝麻素、芝麻林素混合标准溶液。7.2色谱操作条件流动相：甲醇+水＝80+20，经滤膜过滤，并进行脱气；柱温：室温（温度波动应不大于2℃）；流速：1.0mL/min；检测波长：287nm；进样体积：5.0µL；保留时间：芝麻素约6.0min，芝麻林素约7.2min。以上操作参数是典型的，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳分离效果（见图1）。图1芝麻饼肥提取液高效液相色谱图DB41/T1574—201837.3操作步骤在上述色谱条件下，待仪器稳定后，对标准溶液进行分析。以芝麻素、芝麻林素标准溶液浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程。按式（1）计算回归参数：bxay………………………（1）式中：y——色谱图上芝麻素或芝麻林素的峰面积值；a——回归曲线的斜率；x——标准溶液中芝麻素或芝麻林素的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）；b——回归曲线的截距。8测定8.1试样提取液的制备按NY525—2012中6.6规定的方法制备试样，称取试样0.5g（精确至0.0001g），置于10mL离心管中，准确加入5mL乙醇溶液，涡旋混匀，超声提取15min，以8000r/min离心6min，取上清液于10mL容量瓶中；残渣中再加入4mL乙醇溶液按同样步骤提取，合并提取液，用乙醇溶液定容，摇匀，过滤。8.2色谱操作条件同7.2。8.3测定按8.2的方法，对试样提取液进样分析，得到芝麻素和芝麻林素色谱峰峰面积。9计算试样中芝麻素或芝麻林素含量按式（2）计算。10mVcX………………………（2）式中：X——试样中芝麻素或芝麻林素的含量，单位为毫克每100克（mg/100g）；c——试样提取液中芝麻素或芝麻林素的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）；V——样品提取液的体积，单位为毫升（mL）；m——试样的质量，单位为克（g）。10允许差DB41/T1574—20184在重复条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%，结果保留至小数点后两位。_________________________________