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ICS65.020.20B39DB14山西省地方标准DB14/T1375—2017双孢蘑菇菌种生产技术规程2017-05-30发布2017-07-30实施山西省质量技术监督局发布DB14/T1375—2017I目 次前言.....................................................................................................................................................................II1范围.................................................................................................................................................................12规范性引用文件.............................................................................................................................................13术语和定义.....................................................................................................................................................14生产条件.........................................................................................................................................................25生产原料与菌种.............................................................................................................................................26培养基.............................................................................................................................................................37接种.................................................................................................................................................................38培养.................................................................................................................................................................49成品.................................................................................................................................................................4附录A（规范性附录）厂区布局和设备........................................................................................................5DB14/T1375—2017II前 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西省农业科学院提出并归口。本标准起草单位：山西省农业科学院食用菌研究所、山西宇昊蘑菇种植有限公司。本标准主要起草人：郭尚、周林、郭霄飞、吴风明、刘晓钢。DB14/T1375—20171双孢蘑菇菌种生产技术规程1范围本标准规定了双孢蘑菇菌种（固体菌种）生产的术语和定义、生产条件、原料与菌种、培养基、接种、灭菌、培养和成品。本标准适用于双胞蘑菇菌种（固体菌种）的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB7096食品安全国家标准食用菌及其制品GB/T12728食用菌术语GB/T19171双孢蘑菇菌种GB/T23190双孢蘑菇NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1731食用菌菌种良好作业规范NY/T1846食用菌菌种检验规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1双孢蘑菇隶属担子菌亚门、伞菌目、蘑菇科、蘑菇属的草腐菌。3.2菌种生长在适宜培养基上具有一定的结实能力、一致性、生长稳定性、生产经济性的菌丝体培养物，包括母种、原种、栽培种。3.3种性食用菌的品种特性，一般包括对温度、湿度、酸碱度、光线、气体的适应性等生理特性，以及丰产性、抗逆性、出菇早晚、出菇潮数、栽培周期等农艺性状和商品性状。3.4母种DB14/T1375—20172经各种方法分离、选育或杂交得到的具有出菇能力的菌丝体纯培养物及其继代培养物。也称一级种，或试管种。3.5原种由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，称为原种，以扩繁栽培种为主要目的，也称二级菌种。3.6栽培种由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物,是适用于栽培生产用的菌种，不可做再繁殖使用。也称三级菌种。3.7培养基（固体培养基）以富含木质纤维素或淀粉类天然物质为主要原料，添加适当数量的有机氮源和无机盐类原料，具有一定水分含量的培养基质。4生产条件4.1场地条件选择地势高、干燥、通风良好、排水畅通、交通方便的地方建厂。厂区周围300m内不应有禽畜舍、垃圾粪便堆积点、污水废水废渣点等污染源。50m内不应有食用菌生产场地、农贸市场。厂区布局与厂房设置见附录A。4.2设备条件见附录A。5生产原料与菌种5.1生产原料主要是农作物谷粒及农副产品的废弃下脚料如稻秆、麦秆、棉籽皮等，使用前确认农作物下脚料的原产地、作物种类及品种，农药使用情况并进行登记。其他生物制剂、化学药品，如酵母粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾等，采购及使用记录在案。5.2菌种菌种来源可靠，从具相应技术资质的供种单位引种。菌种生产前，应对菌种的质量和种性做正规的栽培试验。DB14/T1375—201736培养基6.1培养基配制6.1.1母种培养基使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，严格掌握原料配比及培养基的pH值。6.1.2原种与栽培种培养基6.1.2.1原料选择双孢蘑菇原种和栽培种的生产培养基，可根据当地的原料资源、农作物生产情况以及农药使用状况选用合适的原材料。6.1.2.2原料配方可以选择以下的培养基配方，注意调配PH值。配方1：谷粒（小麦、谷子、玉米、高粱）98%，石膏粉2%,含水量50%±1%,pH7.5。配方2：腐熟麦杆或稻杆(干)77%，腐熟牛粪粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量62%±1%,pH7.5。配方3：腐熟棉籽壳（干）97%，石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量55%±1%,pH7.5。6.2培养基分装母种培养基的分装量掌握在试管长度的1/4至1/5，灭菌后摆放成的斜面顶端距试管口不少于50mm。原种和栽培种培养基装至距瓶(袋)口不少于50mm，灭菌后不少于45mm。6.3灭菌及灭菌效果检查6.3.1灭菌母种的培养基配制分装后应立即灭菌；原种和栽培种培养基配制后应在4h内灭菌。母种培养基灭菌在0.11MPa～0.12MPa气压下，维持30min，原种和栽培种培养基灭菌应使用0.14MPa～0.15MPa,维持2.5h。6.3.2灭菌效果检查灭菌后应对培养基进行灭菌效果检查。母种培养基可直接放入28℃恒温培养，原种和栽培种培养基随机抽取1%作为样品，选取其中的基质颗粒接入无菌PDA培养基中，置于28℃恒温培养，48h后检查有无微生物长出，判断培养基灭菌是否合格。6.4冷却冷却室在使用前要进行清洁和消毒处理。将灭菌后的原种瓶(袋)或栽培种瓶(袋)放置在冷却室中自然冷却到料温降至适宜温度。7接种7.1接种室(箱)的清毒杀菌DB14/T1375—20174接种室为专门接种用，室内应清洁无菌。在搬入接种物和被接种物前应进行清洁和消毒处理。超净台（接种箱）用气雾消毒剂和紫外灯照射消毒杀菌。7.2接种物的消毒接种用培养基可以先放入培养室与培养室一起消毒杀菌。菌种在放入超净台里时，应进行表面消毒杀菌。7.3接种操作在无菌室(箱)或净化工作台上严格按无菌操作接种。接种的品接要单品种操作，中间不应更换品种。一个品种操作完成后，再换另一品种。无论是接种母种还是原种、栽培种，接种时均应从开口处接种，避免打孔多点接种。接种完成后及时贴好标签，按照品质管理要求，记录品种、接种时间等必要信息。7.4接种室(箱)后处理接种室每次使用后，应及时清理清洁，排除废气，清除废物，台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦拭消毒。8培养8.1培养室杀菌处理在使用培养室的前两天，采用气雾消毒剂和紫外灯照射消毒杀菌。8.2培养条件双孢蘑菇的菌种培养条件应保持适宜的温度24℃±1℃，保持空气相对湿度在75%以下，通风良好，避免阳光直射。8.3培养期的检查各级菌种培养期间应定期检查，及时拣出不合格菌种，并做好检验记录。9成品9.1成品检验培养结束后进行产品的最终检验。9.2入库管理入库之前应确认产品正常，并做好入库登记。母种在5℃±1℃贮存，保存期不超过90d；原种于5℃±1℃贮存，保存期不超40d，短期贮存可在温度24℃±1℃、清洁、通风、干燥(相对湿度70%～75%)、避光的室内存放，保存期不超过10d。栽培种应尽快使用，在温度24℃±1℃、清洁、通风、干燥(相对湿度70%～75%)、避光的室内存放谷粒种不超过10d，其余培养基的栽培种不超过20d。在5℃±1℃条件下，可贮存90d。DB14/T1375—20175AA附录A（规范性附录）厂区布局和设备表A.1、表A.2分别给出了厂区布局和设备设施。表A.1厂区布局与厂房设置一般区域无菌区域办公区域厂房名称功能与设置要点厂房名称功能与设置厂房名称功能与设置原料晾晒场晾晒培养基原材料，要求地面平整，光照好，空旷，远离火源灭菌室培养基灭菌功能。要求水电，安全设备齐全，通风排气良好，进出原料便利质量管理室原料储存库储存生产原料等，要求防雨，防潮，防火，防虫，防鼠，放杂菌冷却室用于灭菌后培养基的冷却。要求室内清洁，防尘，散热通气良好技术与生产室配料分装室用于原料配制，调整，分装及灭菌准备。要求水电方便，空间充分接种室用于菌种生产的接种。要求有较好的防尘性能，内壁及屋顶光滑，便于清洗和消毒，通风换气良好销售及服务室培养室用于接种后的菌种培养。要求有较好的防尘性能，内壁及屋顶光滑，便于清洗和消毒，通风换气良好。温度，湿度，通风调节良好，防虫防鼠放杂菌行政管理室储存库用于菌种产品存放。要求与培养同样的设置条件质量检验室用于菌种质量检验。要求水电等条件具备，有利于安装各种检验试验用设备和设施。栽培试验场用于菌种质量检验。要求水电等条件具备，有利于安装各种检验试验用设备