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ICS65.020.20B31备案号：54552-2017DB32江苏省地方标准DB32/T3283—2017番茄抗南方根结线虫鉴定技术规程Technicalregulationforidentificatingtomatoresistancetosouthernroot-knotnematode2017-07-01发布2017-08-01实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T3283—2017I前 言本标准的按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的规定编写。本标准由江苏省农业科学院提出并归口。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准主要起草人：王银磊、赵统敏、余文贵、杨玛丽、赵丽萍。DB32/T3283—20171番茄抗南方根结线虫鉴定技术规程1范围本标准规定了番茄对番茄根结线虫病抗性鉴定及评价的育苗管理、线虫准备、病情鉴定、病情调查、抗性评价等技术要求。本标准适用于江苏省范围内的番茄对南方根结线虫病的抗性鉴定及其抗性评价工作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。GB/T8321农药合理使用准则NY/T1858.7番茄抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程3术语和定义3.1病情级别Diseaseratingscale人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述(注:引自NY/T1858.7)。3.2病情指数Diseaseindex是全面考虑发病率与严重度两者的综合指标(注:引自NY/T1858.7)。病情指数按公式（1）计算：∑(Xi×ni)DI=──────────×100%.....................................................................................(1)Ni×ａmax式中：DI：病情指数Xi：病害分级标准各级级值ni：各级严重度的调查单株数Ni：调查单株总数ａmax：最高级值4试剂与耗材DB32/T3283—201724.1试剂10％磷酸三钠溶液50g磷酸三钠(Na3PO4•12H2O)溶于500mL水中即成。4.2耗材本鉴定技术规程中使用耗材包括：磷酸三钠、培养皿、烧杯、剪刀、镊子、草炭、蛭石、育苗盘、营养钵等。5仪器与设备本鉴定技术规程中使用仪器设备包括：冰箱、恒温培养箱、计数器、烘箱、改进贝曼漏斗、人工气侯室、移液器、显微镜、血球计数板等。6育苗及育苗管理6.1育苗方式将鉴定品种用10％磷酸三钠溶液浸种、催芽，种子露白后进行播种。以日光温室或塑料大棚作为育苗场地，播种选用基质配比为草炭：蛭石=2:1。播种选用128孔（16*8）的穴盘，每孔播种1粒。幼苗达到2叶1心时及时进行移栽，移栽时选用基质为沙壤土：河沙=2:1，基质配好混匀后置于烘箱180℃烘烤2小时。将幼苗单株定植于直径15cm*高15cm的营养钵中。接种苗所处环境温度白天23℃~26℃，夜间17℃~19℃。6.2播种及接种期间田间肥水管理参鉴品种播种至接种期间，水肥管理与常规生产一致。6.3病虫害的防治参鉴番茄品种在接种前10d和接种后45d内应避免施用任何农药，其它期间病虫害防治使用药剂按照GB4285和GB8321规定执行。6.4对照品种试验中设置抗病和感病对照品种，可选用Moneymaker或苏粉9号（Solanumlycopersicum）作为感病对照品种，选用含有纯合Mi-1基因的Motelle（Solanumlycopersicum）作为抗病对照材料。7接种方法7.1根结线虫的准备利用分子鉴定的方法，对根结线虫进行鉴定，确定所用线虫为南方根结线虫。用感病材料作为根结线虫的繁殖寄主，待根结线虫在植株根部繁殖出大量卵块后，将植株连根拔起，挑取线虫卵块于改进的贝曼漏斗上。将贝曼漏斗置于培养皿中，培养皿加水至液面与卵块层面平齐。将培养皿置于28℃的培养箱中，进行二龄幼虫的孵化。每24小时收集孵化液并再次加入蒸馏水进行孵化，将收集好的线虫接种液放置于室温，每天对接种液进行3~4次的人工补氧。收集两次孵化液后，在显微镜下，用血球计数板对接种液的浓度测定，待线虫接种液的总虫量达到接种所需量时用于接种。7.2人工接种鉴定方法DB32/T3283—20173待鉴定品种苗龄为4叶1心时，方可进行人工接种。接种实验以人工气候室为宜，便于对温度进行控制。接种前一天浇水一次。待鉴定品种和抗感病对照品种各30株。接种时，用1.5ml的移液器吸头在距植株根茎部2cm的位置左右对称扎两个深约1cm~2cm的小洞。用移液器将接种液平均的接终于两个洞内，每个苗盆接种3000条南方根结线虫二龄幼虫，接种后一天方可浇水，但不可浇大水，7天后浇水恢复正常管理。控制人工气候室环境，使环境温度白天23℃~26℃，夜间17℃~19℃。鉴定室内不施用任何杀虫剂。8病情调查8.1调查时间接种45d后，将待鉴定材料和抗感病对照材料小心的从苗钵中取出，抖掉土壤，用水冲洗干净。8.2调查方法对每份鉴定材料的根结数进行人工统计，根据根结数对每一植株进行鉴定分级，记载病情级别。8.3发病记载分级标准：根据分级标准记载病情，分级标准见表1。表1番茄根结线虫病病情级别及其症状描述病情级别症状描述0级无根结或卵块1级1~5个根结2级6~30个根结3级31~100个根结4级超过100个根结，或多个根结连接在一起8.4病情指数的计算和记载根据表1记载接种植株的病情级别及其相对应的症状描述，调查所有接种植株的发病情况，记载各品种（系）每一单株的病情级别，按公式（1）计算病情指数。9抗性评价9.1鉴定有效性判别当鉴定圃中的感病对照品种的病情指数达到75％以上，该批次抗番茄根结线虫病鉴定视为有效。9.2抗性级别依据鉴定番茄品种（系）发病程度（病情指数）确定其对番茄根结线虫病的抗性水平，划分标准见表2。表2番茄品种(系)对番茄根结线虫病抗性评价标准DB32/T3283—20174病情指数（％）抗性评价英文缩写0免疫IM0DI≤20高抗HR20DI≤40抗病R40DI≤60中抗MR60DI≤80感病S80DI≤100高感HS9.3重复鉴定初次鉴定中表现为高抗、抗病、中抗、感病的材料，进行重复鉴定。9.4抗性评价一次鉴定结果仅能作为初步鉴定结果，不能作为抗性评价的依据。根据两次及两次以上抗性鉴定结果对鉴定材料进行抗病性评价，抗性级别以统计的最高病情指数为准。10接种后与鉴定材料的处理将鉴定后的田间病株及病土进行高温烘箱烘烤后方可丢弃。11鉴定记载表格番茄抗根结线虫病鉴定结果记载表格见表3表3年番茄根结线虫病鉴定结果记载表编号品种名称来源病情级别及发病株数病情指数抗性评价0级1级2级3级4级注1：鉴定地点注2：播种日期注3：接种日期注4：调查日期鉴定技术负责人（签字）：_________________________________