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ICS71.040.01A43DB21辽宁省地方标准DB21/T2598—2016褐藻酸寡糖含量的检测Determinationofthecontentofalginateoligosaccharides2016-03-28发布2016-05-28实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T2598—2016I前言本标准是依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草的。本标准由中国科学院大连化学物理研究所提出。本标准由大连市质量技术监督局归口。本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。本标准主要起草人：赵勇、尹恒、陈玮。DB21/T2598—20161褐藻酸寡糖含量的检测1范围本标准规定了褐藻酸寡糖含量的检测的术语和定义、原理、仪器、试剂、操作步骤和重复性。本标准适用于从海带、马尾藻、巨藻、泡叶藻等褐藻类植物中提取的褐藻酸盐，经过加工制成的褐藻酸寡糖产品中褐藻酸寡糖含量的测定。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件2.1褐藻酸寡糖AlginateOligosaccharides,AOS褐藻酸在酸水解或生物酶降解条件下转变为聚合度为2～20的线性低聚糖。2.2褐藻酸寡糖的含量ContentofAOS褐藻酸寡糖产品中褐藻酸寡糖占褐藻酸寡糖产品的质量百分比。3原理在沸水浴条件下，利用含四硼酸钠的硫酸溶液将待测样品中的褐藻酸寡糖彻底水解，生成糖醛酸。糖醛酸可与间羟联苯试剂发生反应，生成紫红色物质，在波长为525nm处有吸收。在吸收值为0～1.0的范围内，该紫红色物质的吸收值与糖醛酸浓度呈线性关系，通过计算可得到待测样品中糖醛酸的浓度和总质量。利用糖醛酸的总质量除以待测样品的总质量，计算得出褐藻酸寡糖的含量。4仪器4.1分光光度计。4.2分析天平：感应量为0.0001g。4.3电子天平：感应量为0.01g。4.4水浴锅。4.5漩涡混合振荡器。4.6恒温干燥箱。5试剂5.1去离子水。DB21/T2598—201625.2浓硫酸：分析纯。5.3半乳糖醛酸：色谱纯，纯度≥98%。5.4氢氧化钠：分析纯。5.5十水合四硼酸钠：分析纯。5.6间羟联苯：优级纯，纯度≥98%。5.70.1g/L半乳糖醛酸标准溶液：将0.10g半乳糖醛酸用200mL～300mL去离子水在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入1L容量瓶中，加去离子水至容量瓶刻度线。5.8120mM四硼酸钠-硫酸溶液：将4.576g十水合四硼酸钠用50mL～60mL浓硫酸在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入100mL容量瓶中，加浓硫酸至容量瓶刻度线。5.90.5%（w/v）氢氧化钠溶液：将0.50g氢氧化钠用50mL～60mL去离子水在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入100mL容量瓶中，加去离子水至容量瓶刻度线。5.100.15%（w/v）间羟联苯试剂：将0.15g间羟联苯用50mL～60mL上述氢氧化钠溶液在烧杯中溶解，再将溶解后溶液移入100mL容量瓶中，加上述氢氧化钠溶液至容量瓶刻度线，置于棕色瓶中，阴暗处保存。6操作步骤6.1待测样品的预处理待测样品为固体，按下述步骤直接检测样品中褐藻酸寡糖的含量。待测样品为液体，需先利用恒温干燥箱将液体进行干燥处理，然后再按下述步骤对样品中褐藻酸寡糖的含量进行检测。6.2标准曲线制作6.2.1取10mL带塞试管，分别加入0mL，0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL半乳糖醛酸标准溶液（5.7），利用去离子水将每个试管中溶液的总体积定容为0.4mL，置于漩涡混合振荡器上振荡30s，得到浓度分别为0µg/mL，25µg/mL，50µg/mL，75µg/mL，100µg/mL的半乳糖醛酸梯度溶液。6.2.2将上述试管置于冰水浴中预冷3min～5min，然后在每个试管中缓慢加入2.4mL四硼酸钠-硫酸溶液（5.8），加盖后置于漩涡混合振荡器上振荡30s。随后将试管置于沸水浴中反应20min，反应结束后将试管冷却至室温。6.2.3在每个试管中分别加入80µL间羟联苯试剂（5.10），置于漩涡混合振荡器上振荡30s，室温放置10min。6.2.4利用分光光度计测量525nm波长下的吸收值（A525nm）。6.2.5以半乳糖醛酸的浓度为横坐标，以A525nm为纵坐标，制作标准曲线。6.3待测样品中褐藻酸寡糖含量的测定6.3.1准确称取0.050g待测样品，用25mL蒸馏水在烧杯中溶解，再将溶解后溶液转移到1L的容量瓶中，用蒸馏水定容到1L，配成0.05g/L的样品溶液。6.3.2取0.4mL样品溶液，加入到10mL带塞试管中，置于冰水浴中预冷3min～5min，随后缓慢加入2.4mL四硼酸钠-硫酸溶液（5.8），加盖后置于漩涡混合振荡器上振荡30s。随后将试管置于沸水浴中反应20min，反应结束后将试管冷却至室温。6.3.3在每个试管中分别加入80µL间羟联苯试剂（5.10），置于漩涡混合振荡器上振荡30s，室温放置10min。利用分光光度计测量待测样品的A525nm。DB21/T2598—201636.3.4如果测得的A525nm不在标准曲线范围内，需提高或稀释待测样品的浓度，使其测得的A525nm在标准曲线范围内。6.3.5通过标准曲线，计算得出待测样品中糖醛酸的浓度。6.3.6待测样品中褐藻酸寡糖的含量按式（1）进行计算：式中：CAOS—待测样品中褐藻酸寡糖的含量，%；C1—样品溶液中糖醛酸质量浓度，g/L；V—样品溶液的体积，L；W—待测样品的质量，g。7重复性在同一实验室由同一操作人员完成的三个平行测定结果，对质量分数大于10%的组分，相对标准偏差不大于5%；对质量分数小于10%的组分，相对标准偏差不大于10%；以三次平行测定结果的算术平均值为测定结果。_________________________________