DB32∕T 3104-2016 红掌种苗组培快繁技术规程

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ICS65.020.20B62备案号:51449-2016DB32江苏省地方标准DB32/T3104-2016红掌种苗组培快繁技术规程TechnicalregulationfortissuecultureseedlingsofAnthura2016-09-20发布2016-11-20实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T3104-2016I前言本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写》的规定编写。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位:江苏省农业科学院。本标准主要起草人:叶晓青、佘建明、梁丽建、贾新平、邓衍明、孙晓波、汤日圣。DB32/T3104-20161红掌种苗组培快繁技术规程1范围本标准规定了红掌种苗组培快繁的设施设备和操作流程。本标准适用于红掌组培苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的,凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。GB/T8321(所有部分)农药合理使用准则JB/T10594-2006日光温室和塑料大棚结构与性能要求3设施设备3.1场地选择交通便捷、地势平坦、光照充足、通风良好、水电配套、排灌便利的场地进行设施建设。3.2主要设施3.2.1准备室用于玻璃、塑料器皿及其他实验用具的清洗、干燥和保存,药品的称量、溶解、配制,培养基的配制、分装、包扎和灭菌,以及植物材料的预处理、培养材料的观察分析等。3.2.2接种室放置超净工作台,开展植物材料的无菌操作,包括外植体的消毒、接种、培养物的转移和试管苗的扩繁、生根等。3.2.3培养室用于接种材料的无菌培养和观察,一般要求温度在25±2℃,光照强度1500Lux~3000Lux,光照周期12h/12h(光/暗)。3.2.4温室DB32/T3104-20162用于试管苗的炼苗、移栽和生长,根据实际情况可选择玻璃温室或薄膜温室,必须具备夏季可调节室内温度至32℃以下,冬季可调节室内温度至15℃以上的条件,可以喷水补湿,并且具有良好的防虫隔离条件。设施建造按JB/T10594-2006中规定执行。3.3主要设备3.3.1准备室设备蒸馏水器、冰箱、培养箱、天平、电热磁搅拌器、酸度计、高压蒸汽灭菌锅、烘箱。3.3.2接种室设备超净工作台(水平送风)、双筒实体显微镜或生物显微镜、空调、紫外灯或空气净化装置。3.3.3培养室设备培养架、紫外灯或空气净化装置、空调、自动记录温度、湿度计。4操作流程4.1接种前准备工作4.1.1培养基配制和灭菌以MS培养基为基本培养基,添加琼脂6.0g/L~6.5g/L,蔗糖30g/L,调节PH值为5.6~5.8;诱导愈伤培养基:MS+BA0.2mg/L~0.5mg/L+2.4-D2.0mg/L~3.0mg/L+NAA0.1mg/L~0.2mg/L;分化培养基:MS+BA0.5mg/L~1.0mg/L+NAA0.2mg/L;芽增殖培养基:MS+BA0.1mg/L~0.5mg/L+NAA0.1mg/L~0.2mg/L;生根培养基为:1/2MS+NAA0.1mg/L~0.3mg/L+IBA0.1mg/L~0.3mg/L。培养基配制完毕后,分装至组培瓶中。在121℃下高压灭菌15min~20min,并尽快取出使其冷却备用。4.1.2超净工作台消毒接种前半小时用70%酒精喷雾、擦洗超净工作台;然后打开用紫外灯照射20min并通风。在点燃酒精灯的情况下严禁用酒精喷雾。4.1.3接种人员的准备①入无菌室前洗手,洗净指甲中的污物。②入室时穿戴上经过消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。③操作前和操作中经常用70%酒精棉球擦手。DB32/T3104-201634.2外植体接种4.2.1外植体选取和清洗选择生长健壮、无病虫害的植株作为母株,以其幼嫩的叶片为外植体。外植体在加有适量洗衣粉的自来水中浸泡后,用自来水冲洗20min~30min。4.2.2接种工具的消毒将刀和镊子等接种工具浸入95%酒精中,使用之前进行燃烧灭菌,然后放凉备用。燃烧时应注意浸入酒精的一端斜向下进行,不可倒置,防止烧伤。4.2.3外植体的灭菌将外植体置于已灭菌的超净工作台上,用无菌的吸水纸吸去水分,放入70%酒精中表面灭菌15秒,然后再用0.1%的升汞灭菌8min~10min,无菌水浸洗3次~5次。消毒时间应根据生长季节和材料的带菌程度灵活调整,如果接种后污染严重则相应增加灭菌时间。4.2.4材料切割将叶片平放在无菌滤纸上进行切割操作,先用解剖刀沿主脉切开叶片,再将两侧纵切成3mm左右宽的条形,然后横切,使外植体保持3mm左右见方块待用。4.2.5接种接种时以左手拿培养瓶,用右手轻轻取下盖子;将培养瓶口靠近酒精灯火焰处,保存瓶口倾斜,然后用镊子将材料送入瓶中。接种外植体所用培养基为诱导愈伤培养基。接种时,使接种块和培养基紧密接触,并使其在培养容器内分布均匀。接种完毕立即盖好瓶盖并作好标记,注明材料名称、接种日期等事项。接种结束后将组培瓶整齐、均匀摆放在培养架上。培养期间定期观察培养物的生长情况,并作好记载;如发现污染物,应立即取出,待高压灭菌后清洗或丢弃。4.3培养4.3.1分化培养愈伤组织生长50d左右可将愈伤组织切割成2mm~3mm的小块,均匀接种于分化培养基表面。4.3.2增殖培养将分化的不定芽从愈伤组织上切下,并使芽的基部插入增殖培养基中;一般4周~5周继代一次。DB32/T3104-201644.3.3生根培养将增殖的芽丛切割成单个完整的幼芽,并使其基部插入生根培养基中;一般生根培养3周~4周能发育出完整的根系,即可用于炼苗和移栽。4.4炼苗移栽4.4.1炼苗移栽前3天,打开根系发育良好组培苗的瓶盖,加注少量无菌水(水深0.5cm左右)炼苗。移栽前1天,将培养瓶移至温室中接受散射阳光的照射。4.4.2移栽基质使用专用育苗基质,提前1天填充穴盘并喷水备用。4.4.3移栽取出试管苗,以一手的拇指和食指轻捏茎叶部,在流水下轻轻洗净根部附着的琼脂。一定要尽量减少对根系的伤害。移栽时每穴栽1苗,栽后及时浇透水。根据季节情况,刚出瓶移栽的小苗应加遮阳网,光照强度在10000lux~20000lux。4.4.4消毒移栽后立即喷施一遍800倍~1000倍的多菌灵、百菌清或托布津等水溶液,以防小苗感病。_________________________________

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