DBS13 005-2016 食品安全地方标准 动物源性食品中多溴联苯醚的测定

2016-11-28发布2017-01-01实施DBS13河北省地方标准DBS13/005—2016食品安全地方标准动物源性食品中多溴联苯醚的测定河北省卫生和计划生育委员会发布DBS13/005—20162前言本标准按照GB/T1.1-2009规定的格式编写。本标准附录A为规范性附录。本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。本标准于2016年11月28日首次发布。ⅠDBS13/005—20161食品安全地方标准动物源性食品中多溴联苯醚的测定1范围本标准规定了畜禽肉、生鲜乳及水产品等动物源性食品中（蛋类及其制品除外）多溴联苯醚类化合物的检测方法。本标准适用于畜禽肉、生鲜乳及水产品等动物源性食品中（蛋类及其制品除外）多溴联苯醚类化合物（BDE28、BDE47、BDE99、BDE100、BDE153、BDE154、BDE183和BDE209）的测定。2原理冻干后的试样加入内标溶液（十溴联苯醚BDE209的测定使用13C标记的同位素内标，其他多溴联苯醚类化合物使用BDE77做内标），经加速溶剂提取，酸化硅胶除脂、硅胶氧化铝复合层析柱净化后，使用气相色谱-质谱联用仪（负化学电离源）测定，内标法定量。3培养基和试剂注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。整个分析过程应避免塑料类容器的使用，如枪头，塑料离心管等。3.1试剂3.1.1正己烷（C6H14）：色谱纯。3.1.2二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。3.1.3壬烷（C9H20）：色谱纯。3.1.4硫酸（H2SO4）：含量95%～98%，优级纯。3.1.5色谱用硅胶（0.063～0.100mm粒径）：将市售硅胶装入玻璃色谱柱中，依次用正己烷和二氯甲烷淋洗两次，每次使用的溶剂体积约为硅胶体积的两倍。淋洗后，将硅胶转移到烧瓶中，以铝箔盖住瓶口置于马弗炉中600℃烘烤6小时，冷却后装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.6无水硫酸钠（Na2SO4）：农残纯。3.1.7酸性氧化铝：色谱层析用碱性氧化铝，660℃烘烤6h后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.844%酸化硅胶：称取活化好的硅胶100g，逐滴加入78.6g硫酸，振摇至无块状物后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.2标准品3.2.1PBDEs混合标准溶液：M-1614-CSM，见附录A中表1。DBS13/005—201623.2.2定量内标（IS）标准溶液，见附录A中表1。3.2.3校正系列标准溶液，见附录A中表2。4仪器4.1气相色谱-负化学电离/质谱联用仪（GC-NCI/MS）。4.2色谱柱：VF-5ms（7m×0.25mm×0.1μm），或等效毛细管色谱柱。4.3分析天平：感量为0.01g和0.1mg。4.4真空冷冻干燥机（冷凝器的最低温度-50℃）。4.5加速溶剂提取仪。4.6氮气浓缩器。4.7旋转蒸发仪。4.8玻璃层析柱（柱长30cm，柱内径1.8cm）。4.9涡漩混合器。4.10玻璃仪器的准备：所有需重复使用的玻璃器皿应在使用后尽快认真清洗，清洗过程如下：a）用含碱性洗涤剂的清水清洗；b）依次用清水和去离子水冲洗；c）依次用丙酮、正己烷和二氯甲烷洗涤。5分析步骤5.1试样制备取代表性可食部位的样品，其中均匀样品直接混合（如奶类），非均匀样品用组织匀浆机充分搅拌均匀（如鱼、肉类），取液态乳样品20mL（鱼类、肉类2g）经冷冻干燥24h后，放入干燥器中保存。5.2试样提取将冻干后的预处理试样0.5g与10g硅藻土混匀，加入定量内标溶液13C-BDE209（500μg/L，2μL）和BDE77（50μg/L，2μL）后，将样品和硅藻土的混合物装入萃取池中，萃取池顶部用适量硅藻土填满。提取溶剂为正己烷-二氯甲烷（1+1）100mL。提取条件为：压力为10Mpa(1500psi)；温度为120℃；加热时间5min；稳定时间8min；清洗体积占萃取池体积的60％；吹扫时间为120s；静态循环次数为2次。提取完成后，将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。如分析结果以脂肪计则需要测定试样的脂肪含量。脂肪含量的测定：浓缩前准确称重茄形瓶，将溶剂浓缩至干后准确称重茄形瓶，两次称重结果的差值为试样的脂肪量。测定脂肪量后，加入少量正己烷溶解瓶中残渣。5.3试样净化5.3.1酸化硅胶净化DBS13/005—20163将提取液转移至旋转蒸发瓶中，加入10g酸化硅胶，于60℃水浴加热振摇10min，缓慢倾出上层溶液，浓缩至大约1mL。5.3.2复合硅胶柱净化净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依次填入2g无水硫酸钠、6g酸性氧化铝、5g酸化硅胶、2g活化硅胶、2g无水硫酸钠。然后用50mL正己烷预淋洗。将经过5.3.1净化后浓缩洗脱液全部转移至柱上，用约5mL正己烷冲洗茄形瓶3次～4次，洗液转移至柱上。待液面降至无水硫酸钠层时加入100mL二氯甲烷-正己烷（1+1）洗脱，洗脱液浓缩至约1mL。5.3.3试样溶液浓缩将净化后的试样溶液转移至进样小管中，在氮气流下浓缩，用少量正己烷洗涤茄形瓶3次～4次，洗涤液也转移至进样内插管中，氮气浓缩至约50μL，然后封盖待上机分析。5.4仪器测定5.4.1气相色谱条件色谱柱：VF-5ms（7m×0.25mm×0.1μm）。进样口温度：275℃。色谱柱升温程序：120℃保持2min，以26℃/min速度升至310℃，并保持3min。载气：高纯氦气（纯度99.999%），柱流量：3mL/min。进样器模式：230kPa高压脉冲进样。进样量：不分流进样1μL。5.4.2质谱条件离子化方式：负化学电离（NCI），甲烷为反应气。传输线温度：280℃。离子源温度：220℃。溶剂延迟时间：3min。离子监测方式：选择离子监测（SIM），BDE-209的监测碎片为m/z486，488，13C-BDE-209的监测碎片为m/z492，494，其他多溴联苯醚的监测碎片为m/z79，81。5.4.3标准曲线的测定分别将试样和系列标准注入气相色谱-质谱系统，记录PBDEs和内标的峰面积。计算PBDEs（m/z79）和BDE77内标(m/z79)的峰面积比，并计算BDE209(m/z486)和13C-BDE209内标(m/z494)的峰面积比，以各系列标准溶液的进样量（ng）与对应的PBDEs（m/z79）和BDE77内标(m/z79)的峰面积比，以及BDE209(m/z486)和13C-BDE209内标(m/z494)的峰面积比分别绘制线性曲线。5.5结果计算5.5.1定性以相对保留时间和PBDEs相应监测离子的丰度比进行定性分析。要求所检测的PBDEs色谱峰信噪比(S/N)大于3，PBDEs相应监测离子的丰度比偏差不超过标准溶液中相应离子丰度比的20%。5.5.2定量DBS13/005—20164采用内标法，以相对响应因子（RRF）进行定量计算。系列标准溶液进样，各个浓度连续进样3针，按公式（1）计算RRF值：RRF=……………………………………（1）式中：RRF——目标化合物对内标的相对响应因子；An——目标化合物的峰面积；Cn——目标化合物的量(ng)；As——内标的峰面积；Cs——内标的量(ng)。在系列标准溶液中，各目标化合物的RRF值相对标准偏差（RSD）应小于20%。按公式（2）计算样品中PBDEs的含量：Xn=……………………………………（2）式中：Xn——目标化合物的含量（ng/g或ng/mL）；Ms——样品中加入内标的量（ng）；An——目标化合物的峰面积；As——定量内标的峰面积；m——取样量（g或mL）。计算结果保留三位有效数字。CnAsCsAnmssnRRFAMADBS13/005—20165附录A（规范性附录）混合标准溶液及色谱图和方法检出限表1多溴联苯醚及其定量内标标准溶液化合物CAS#溴原子数浓度（mg/L）纯度%（GC/MS）BDE2841318-75-632099.2BDE475436-43-142098.0BDE9960348-60-952098.3BDE100189084-64-8520100.0BDE15368631-49-2620100.0BDE154207122-15-462097.0BDE183207122-16-572098.8BDE2091163-19-51020098.3BDE77（IS）93703-48-145099.113C-BDE209（IS）1163-19-5102598表2多溴联苯醚校正系列标准溶液化合物浓度μg/LCS1CS2CS3CS4CS5BDE280.51.05.01050BDE470.51.05.01050BDE990.51.05.01050BDE1000.51.05.01050BDE1530.51.05.01050BDE1540.51.05.01050BDE1830.51.05.01050BDE2095.01050100500BDE77（IS）5.05.05.05.05.013C-BDE209（IS）5050505050DBS13/005—201663.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.00.51.01.52.02.53.0(x100,000)TICTIC912345678图1多溴联苯醚混合标准溶液总离子流色谱图（0.01mg/L）（注：1：BDE28,2:BDE47,3:BDE77(IS),4:BDE100,5:BDE99,6:BDE154,7:BDE153,8:BDE183,9:BDE209+13C-BDE209）表3多溴联苯醚的方法检出限和定量限化合物检测限（ng/kg）定量限（ng/kg）BDE282.06.0BDE472.57.0BDE996.520.0BDE1003.07.0BDE1535.014.5BDE1544.09.0BDE1833.06.0BDE2098.022.0