DBS13 007-2016 食品安全地方标准 食品中11 种双酚类物质的测定 高效液相色谱-串联质

12016-11-28发布2017-01-01实施DBS13河北省地方标准DBS13/007—2016食品安全地方标准食品中11种双酚类物质的测定——高效液相色谱-串联质谱法河北省卫生和计划生育委员会发布DBS13/007—20162前言本标准按照GB/T1.1-2009规定的格式编写。本标准的附录A、附录B、附录C、附录D为资料性附录。本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。本标准于2016年11月28日首次发布。ⅠDBS13/007—20161食品安全地方标准食品中11种双酚类物质的测定——高效液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了食品中11种双酚类物质含量的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）测定方法。本标准适用于肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水等七类包装食品中11种双酚类物质含量的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理样品中的双酚A、双酚A-二缩水甘油醚、双酚F、双酚F-二缩水甘油醚及其衍生物用叔丁基甲醚或乙腈提取，HLB固相萃取小柱净化，高效液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，本标准所用水均为GB/T6682规定的一级水，试剂均为HPLC级。4.1甲醇。4.2乙腈。4.3叔丁基甲醚。4.4正己烷：分析纯。4.5乙酸：分析纯。4.6氯化钠：分析纯。4.711种双酚类物质标准品：双酚A-二缩水甘油醚（BADGE）、双酚A-(2,3-二羟基丙基)缩水甘油醚（BADGE·H2O）、双酚A-(3-氯-2-羟丙基)缩水甘油醚（BADGE·HCl）、双酚A-双(2,3-二羟基丙基)醚（BADGE·2H2O）、双酚A-双(3-氯-2-羟丙基)甘油醚（BADGE·2HCl）、双酚A-(3-氯-2-羟丙基)(2,3-二羟基丙基)醚（BADGE·H2O·HCl）、双酚F-二缩水甘油醚（BFDGE）、双酚F-双(2,3-二羟基丙基)醚（BFDGE·2H2O）、双酚F-双(3-氯-2-羟丙基)甘油醚（BFDGE·2HCl）、双酚A（BPA）、双酚F（BPF），其纯度及其他信息参见附录A。DBS13/007—201624.8氯化钠饱和溶液：室温下，向一定体积的水中加入过量的氯化钠（4.6）。4.90.1%（v/v）乙酸的乙腈溶液：取0.1mL乙酸（4.5），用乙腈（4.2）定容至100mL。4.10甲醇-水溶液（80+20，v/v）：取甲醇80mL，水20mL，混合均匀。4.11HLB固相萃取柱：60㎎，3mL，填料为亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物，或相当者。使用前分别用5mL甲醇和5mL水预淋洗并保持柱体湿润。4.12标准储备液：称取适量标准品（精确至0.0001g），分别用甲醇溶解配制浓度为1.0㎎/mL的标准储备液，保存于-18℃冰箱内。4.13混合标准工作液：用甲醇将各种标准储备液混合稀释成10.0µg/mL的标准工作溶液，保存于4℃冰箱内。4.14基质标准工作液：准确移取一定体积的标准中间工作液，根据需要用空白样品处理液稀释成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。4.15微孔滤膜：有机系，0.22µm。5仪器5.1液相色谱-三重四级杆串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2固相萃取装置。5.3超声波振荡器。5.4高速离心机。5.5旋转蒸发器。5.6氮吹仪。5.7涡旋混合器。5.8玻璃离心管。5.9分析天平：感量0.1mg和0.01g。6分析步骤6.1试样制备取有代表性固态样品100g、液态样品100mL，固态样品用组织捣碎机充分捣碎混匀，液态样品混合均匀，碳酸饮料需预先除气，待用。6.2试样处理6.2.1提取6.2.1.1果蔬制品、饮料、饮用水样品DBS13/007—20163称取样品2g（精确至0.01g）于50mL离心管内，向其中加入15mL叔丁基甲醚，超声振荡提取10min。在12000r/min下离心3min，转移叔丁基甲醚层至100mL浓缩瓶中，再用15mL叔丁基甲醚重复提取一次，合并提取液于浓缩瓶中。于45℃下减压浓缩至干。加入5mL甲醇-水溶液（4.10）溶解，溶解液再加入10mL水混匀。6.2.1.2肉及肉制品、鱼类水产品样品称取样品2g（精确至0.01g）于50mL离心管内，向其中加入15mL叔丁基甲醚，超声振荡提取10min。在12000r/min下离心3min，转移叔丁基甲醚层至100mL浓缩瓶中，剩余残渣再次用15mL叔丁基甲醚提取一次，合并提取液，于45℃下减压浓缩至干。加入5mL甲醇-水溶液（4.10）溶解后，再加入10mL水，混匀。加入5mL正己烷，振荡10min后，于12000r/min下离心3min，弃去正己烷层，下层待净化。6.2.1.3乳及乳制品样品称取液态乳样品2g（固态样品0.25g，精确至0.01g）于50mL离心管内（固态样品需加水至2g，混合均匀），向其中依次加入15mL0.1%乙酸的乙腈溶液（4.9）、5mL饱和NaCl溶液（4.8），混匀，超声振荡提取10min。在12000r/min下离心3min，转移上清液（乙腈层）至100mL浓缩瓶中，剩余部分再次加入15mL0.1%乙酸乙腈溶液提取，合并提取液。于55℃下减压浓缩至干。加入5mL甲醇-水溶液（4.10）溶解后，再加入10mL水混匀。6.2.2净化将上述提取液过已活化的HLB固相萃取柱，加5mL水淋洗。待淋洗液全部流出后，弃去全部流出液，减压抽干3min。用5mL甲醇洗脱，接取全部洗脱液。将洗脱液在40℃下用氮气吹干，再以5.0mL甲醇-水溶液（4.10）溶解残渣，混匀，微孔滤膜过滤，滤液供液相色谱-串联质谱仪测定。6.3测定6.3.1液相色谱条件液相色谱条件如下：a）色谱柱：C18柱，柱长100mm，内径3.0mm，粒径2.7µm，或相当者。b）流动相：A为水，B为甲醇。梯度洗脱条件见表1。表1液相色谱梯度洗脱程序时间/minA/%B/%09550.59555208010208010.595515955c）流速：0.4mL/min。d）进样量：5µL。e）柱温：30℃。6.3.2质谱条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI）。DBS13/007—20164b）扫描方式：正离子扫描和负离子扫描。c）检测方式：多反应监测（MRM）。d）其他参考质谱条件参见附录B。6.3.3定量测定根据样液中被测物含量选定浓度相近的基质标准溶液一起进行色谱分析。基质标准溶液和样液中被测物的响应值均应在仪器检测线性响应范围内。对基质标准溶液和样液等体积进样测定。在6.3.1色谱条件下，11种被测物的保留时间参见附录B，二级质谱图参见附录C图C.1～C.11，多反应监测（MRM）色谱图参见附录D图D.1～D.11。6.3.4定性测定被测组分选择1个母离子、2个子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与基质标准工作液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%﹥50﹥20～50﹥10～20≤10允许的相对偏差/%±20±25±30±506.4空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。7结果计算试样中的被测物含量按式（1）计算，计算结果需扣除空白值：isis10001000ACVXAm…………………………….(1)式中：Xi——试样中被测物含量，单位为微克每千克（µg/kg）Ai——样液中被测物的峰面积；As——基质标准溶液中被测物的峰面积；Cs——基质标准溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。8检出限和定量限8.1检出限（LOD）七类包装食品（包括肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水）中BADGE、BADGE•H2O、BADGE•HCl、BADGE•H2O•HCl和BFDGE•2H2O的检出限为1.5µg/kg，BADGE•2H2O、BFDGE和BFDGE•2HCl的检出限为3µg/kg，BADGE•2HCl、BPA和BPF的检出限为6µg/kg。8.2定量限（LOQ）DBS13/007—20165七类包装食品（包括肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水）中BADGE、BADGE·H2O、BADGE·HCl、BADGE·H2O·HCl和BFDGE·2H2O的定量限为5µg/kg，BADGE·2H2O、BFDGE和BFDGE·2HCl的定量限为10µg/kg，BADGE·2HCl、BPA和BPF的定量限为20µg/kg。DBS13/007—20166附录A（资料性附录）标准物质基本信息表A.111种双酚类化合物基本信息序号中文名称英文名称简称CAS号化学分子式相对分子质量纯度%1双酚A-二缩水甘油醚BisphenolAdiglycidyletherBADGE1675-54-3C21H24O4340.41≥952双酚A-(2,3-二羟基丙基)缩水甘油醚BisphenolA(2,3-dihydroxypropyl)glycidyletherBADGE·H2O76002-91-0C21H26O5358.43≥953双酚A-(3-氯-2-羟丙基)缩水甘油醚BisphenolA(3-chloro-2-hydroxypropyl)glycidyletherBADGE·HCl13836-48-1C21H25ClO4376.87≥954双酚A-双(2,3-二羟基丙基)醚BisphenolAbis(2,3-dihydroxypropyl)etherBADGE·2H2O5581-32-8C21H28O6376.44≥955双酚A-双(3-氯-2-羟丙基)甘油醚BisphenolAbis(3-chloro-2-hydroxypropyl)etherBADGE·2HCl4809-35-2C21H26Cl2O4413.33≥956双酚A-(3-氯-2-羟丙基)(2,3-二羟基丙基)醚BisphenolAbis(3-chloro-2-hydroxypropyl)(2，3-dihydroxypropyl)etherBADGE·H2O·HCl227947-06-0C21H27ClO5394.89≥957双酚F-二缩水甘油醚BisphenolFdiglycidyletherBFDGE2095-03-6C19H20O4312.36≥958双酚F-(2,3-二羟基丙基)醚BisphenolFbis(2,3-dihydroxypropyl)etherBFDGE·2H2O72406-26-9C19H24O6348.39≥959双酚F-(3-氯-2-羟丙基)甘油醚BisphenolFbis(3-chloro-2-hydroxypropyl)etherBFDGE·2HCl无CAS号C19H22Cl2O4385.28≥9510双酚ABisphenolABPA80-05-7C15H16O2228.29≥9511双酚F4,4'-Dihydroxy-diphenylmethaneBPF620-92-8C13H12O2200.24≥95DBS13/007—20167附录B（资料性附录）参考质谱条件参考质谱条件：a）电喷雾电压（IS）：正离子和负离子扫描模式下分别为5500V和-4500V；b）雾化气压力（GSI，psi）：40（氮气）；c）气帘气压力（CUR，psi）：30（氮气）；d）辅助气流速（GS2，psi）：50（氮气）；e）离子源温度（TEM）：550℃。碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）、碰撞