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ICS65.020.01B47DB21辽宁省地方标准DB21/T2219.2—2014玉米高粱主要病害抗性鉴定技术规范第2部分高粱煤纹病抗性鉴定RulesforevaluationofsorghumandmaizeforresistancetodiseasesPart2:Ruleforevaluationofsorghumforresistancetosootystripe2014-11-19发布2015-1-19实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T2219.2—20141前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。《玉米、高粱主要病害抗性鉴定技术规范》分为六个部分：——第1部分：高粱靶斑病抗性鉴定；——第2部分：高粱煤纹病抗性鉴定；——第3部分：高粱镰孢菌茎腐病抗性鉴定；——第4部分：高粱丝黑穗病抗性鉴定；——第5部分：玉米灰斑病抗性鉴定；——第6部分：玉米弯孢菌叶斑病抗性鉴定。本部分为DB21/T2219-2014的第2部分。本标准由辽宁省农村经济委员会提出并归口。本标准由辽宁省农业科学院植物保护研究所起草。本标准主要起草人：徐婧、徐秀德、姜钰、胡兰、高德学、王丽娟、刘可杰、张万民、董怀玉。DB21/T2219.2—20142玉米高粱主要病害抗性鉴定技术规范第2部分高粱煤纹病抗性鉴定1范围《玉米、高粱主要病害抗性鉴定技术规范》第2部分：高粱煤纹病抗性鉴定，本部分规定了高粱抗煤纹病[Ramulisporasorghi(Ellis&Everhart)L.S.Olive&Lefebvre]鉴定技术中术语和定义、病原物接种体制备、田间抗性鉴定、病情调查、抗性评价和鉴定记载方法。本标准适用于粒用高粱[Sorghumbicolor(L.)Moench]品系、品种、杂交种及高粱种质资源对高粱煤纹病抗性的田间鉴定及评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance通过适宜技术鉴别植物对其特定侵染性病害的抵抗水平。2.2抗性评价evaluationofresistance依据采用的技术标准判别寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2.3人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位并使植物发病的过程。2.4病情级别diseaseratingscale植物个体或群体发病程度的量化描述。2.5鉴别寄主differentialhostDB21/T2219.2—20143用于鉴定和区分特定病原体的生理小种/致病型/株系的一套带有不同抗性基因的寄主品种。2.6分离物isolate采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原体的纯培养物。2.7接种体inoculum用于接种以引起病害的病原体或病原体的一部分。2.8接种悬浮液suspension用于接种的含有定量接种体的液体。2.9高粱煤纹病sootystripe由高粱座枝孢菌[Ramulisporasorghi(Ellis&Everhart)L.S.Olive&Lefebvre，异名RamulisporaandropogonisMiura]引起，主要为害高粱叶片和叶鞘，产生长椭圆形、梭形或长梭形大病斑，表生大量的黑色小菌核，病情严重时多个病斑汇合，导致叶片枯死。3病原物接种体制备3.1病原物分离以常规组织分离法从发病植株叶片的典型病斑上分离高粱煤纹病病原物。经分离纯化，形态学鉴定为高粱座枝孢菌[Ramulisporasorghi(Ellis&Everhart)L.S.Olive&Lefebvre]，经致病性测定，于4℃下保存或30%甘油液体中-40℃低温长期保存、备用。3.2接种体繁殖与保存接种前进行病原物接种体的繁殖，适宜病菌繁殖的培养基为玉米叶粉碳酸钙琼脂（MLPCA）培养基（玉米叶粉15g，CaCO32g，琼脂15g，加水1L，121℃高压灭菌30min，冷却后备用）。将MLPCA培养基倒入培养皿（直径12cm）中制成培养基平板，把高粱煤纹病菌接种在MLPCA培养基平板上，以菌体在培养基表面多点分布为宜，25℃培养7d~10d，用无菌水将培养基上产生的病菌分生孢子洗下，配制成孢子悬浮液（浓度2.0×106个孢子/mL），供大量扩繁用。取上述制备的孢子悬浮液1mL，用无DB21/T2219.2—20144菌三角玻璃棒均匀涂布在MLPCA培养基表面，置于25℃~28℃恒温培养7d~10d，待培养基上产生大量分生孢子后，用1%Tween20溶液将病菌分生孢子洗下，用无菌水配制成孢子悬浮液（浓度为2.0×104个孢子/mL），供田间接种用。如孢子悬浮液不能立即用，可置4℃冰箱内保存2d~3d。4田间抗性鉴定4.1抗性鉴定圃设置鉴定圃应具备良好的自然发病环境条件和灌溉条件。4.2鉴定设计鉴定材料按品种生育期顺序排列，如生育期相似可采用随机排列，行长5m，单行区，行距0.5m~0.6m，或与大田生产相同，小区保苗25株左右。3次重复。每50份鉴定材料各设1组抗、感病对照，抗病对照品种为L401B，感病对照品种为Tx622B。4.3种植要求鉴定材料播种时间与大田生产播种时间相同或适当调整，以使植株接种期和发病期能够与适宜的气候条件（湿度、温度）相遇，保证鉴定结果准确性。土壤肥力水平和栽培管理与大田生产相同。4.4接种4.4.1接种期接种期为植株喇叭口期，即一般中、晚熟品种10片~11片叶期，早熟类型品种9叶期接种。4.4.2接种方法采用注射接种法，将注射器针头平行地面自植株喇叭口处插入，将病菌孢子悬浮液（浓度：2.0×104个孢子/mL）注入植株喇叭口处心叶中，用量5mL/株。选择阴天或傍晚进行接种为宜。4.5接种后管理在接种期间若遇干旱天气，应在接种后24h内进行田间喷灌或叶面喷雾保湿，满足病害发生所需条件。5病情调查5.1调查时间接种后40d~50d左右，即高粱籽粒乳熟期进行病害调查。DB21/T2219.2—201455.2调查方法目测调查鉴定材料的发病情况，重点调查接种部位的上方和下方各2片叶，依据病害症状描述，以受害叶片病斑面积占叶片面积百分比划分病情级别。5.3病情分级病情分级及其对应的症状描述见表1。表1高粱抗煤纹病鉴定病情级别划分标准病情级别病害症状描述0叶片上无可见病斑1叶片病斑面积占叶面积1%～2%以下3叶片病斑占叶面积的2.1%～10%5叶片病斑占叶面积10.1%～25%7叶片病斑占叶面积25.1%～50%，部分叶片早枯9叶片病斑占叶面积50%以上，病斑连片，多数叶片枯死6抗性评价6.1鉴定有效性判别当感病对照材料达到其相应感病程度（7级或9级），该批次抗煤纹病鉴定视为有效。6.2抗性评价标准依据鉴定材料的群体发病程度（病情级别）确定其对煤纹病的抗性水平。以50%以上的发病个体（叶片）的病情级别作为鉴定材料的群体病情级别值，确定鉴定材料的抗性水平，划分标准见表2。表2高粱对煤纹病抗性评价标准病情级别抗性评价0免疫Immunity（IM）1高抗Highlyresistant（HR）3抗Resistant（R）5中抗Moderatelyresistant（MR）7感Susceptible（S）9高感Highlysusceptible（HS）DB21/T2219.2—201467鉴定记载表格高粱抗煤纹病鉴定结果记载表格见表3。表3年高粱抗煤纹病鉴定结果记载表编号品种名称来源病情级别抗性评价注1:鉴定地点注2:接种病原菌分离物编号注3:接种日期调查日期鉴定技术负责人（签字）：DB21/T2219.2—20147AA附录A（规范性附录）高粱煤纹病菌A.1学名和形态描述A.1.1学名高粱座枝孢菌[Ramulisporasorghi(Ellis&Everhart)L.S.Olive&Lefebvre，异名RamulisporaandropogonisMiura]，属无性态真菌座枝孢属。A.1.2形态描述病菌分生孢子座由寄主表皮下的子座发育而成，逐渐从气孔突出，在叶片两面着生。分生孢子梗极多，无色，圆柱形，0～1个隔膜，大小10μm～44μm×2μm～3μm。分生孢子单生于分生孢子梗顶端，许多孢子聚集在分生孢子座上，呈胶质团。分生孢子线形或鞭形，无色，多数具1～3个分枝，微弯，顶端略尖，具3～9个隔膜，内含物颗粒状，大小32μm～80μm×2μm～3μm。叶片后期的病斑两面产生菌核，近球形或半球形，表面粗糙或光滑，黑色，直径58μm～167μm；每个菌核以菌丝柱经气孔与气孔下的子座相连结。菌核萌发产生分生孢子座和分生孢子。DB21/T2219.2—20148附录B(规范性附录)高粱煤纹病症状B.1病名和症状描述B.1.1病名高粱煤纹病sorghumsootystripeB.1.2症状描述从高粱的苗期到成株期皆可发病，主要为害叶片和叶鞘。发病初期叶片上形成小的圆形病斑，淡红褐色或黄褐色，边缘具明显的黄色晕圈；后逐渐扩大，呈长椭圆形、长梭形，中央淡褐色，边缘紫红色，后期病斑大小50mm～140mm×10mm～20mm。病情严重时病斑汇合成不规则形，或发展成长条纹状大病斑，导致叶片枯死。在温暖和潮湿条件下，病斑上产生大量的淡灰色分生孢子，后期病斑变烟灰色，表生大量的黑色小菌核，涂抹或触碰易于脱落。_________________________________