DB32∕T 2792-2015 南粳9108原种生产技术规程

ICS65.020.20B22备案号：47706-2015DB32江苏省地方标准DB32/T2792-2015南粳9108原种生产技术规程BasicSeedProducingTechnologyofRiceVarietyNanjing91082015-10-20发布2015-12-20实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T2792-2015I前言为规范南粳9108原种生产技术，制定本标准。本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》编制。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准主要起草人：周丽慧、陈涛、赵庆勇、姚姝、赵春芳、赵凌、朱镇、张亚东、王才林。DB32/T2792-20151南粳9108原种生产技术规程1范围本标准规定了南粳9108原种生产的品种来源和类型、原种生产技术、株行决选技术。本标准适用于苏中及宁镇扬丘陵地区中上等肥力条件下南粳9108原种生产。2规范性引用文件下列文件对于文本的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.1-1995农作物种子检验规程总则GB/T3543.2-1995农作物种子检验规程扦样GB/T3543.3-1995农作物种子检验规程净度分析GB/T3543.4-1995农作物种子检验规程发芽试验GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定GB/T3543.6-1995农作物种子检验规程水分测定GB/T3543.7-1995农作物种子检验规程其他项目检验GB4404.l-2008粮食作物种子禾谷类GB/T17316-2011水稻原种生产技术操作规程DB32/T79-2007水稻壮秧与育秧技术标准DB32/T1762—2011稻米食味品质评价DB32/T2791—2015水稻品种南粳91083品种来源和类型3.1来源南粳9108原原种（育种家）种子。3.2类型迟熟中粳稻。4原种生产技术4.1方法采用改良混合选择方法，即单株选择、分系比较、混合繁殖的三圃制。4.2单株选择DB32/T2792-20152选择标准和决选标准应符合DB32/T2791—2015水稻品种南粳9108的规定。4.3株行圃4.3.1编号将上年当选的各单株种子，按顺序编号。4.3.2育秧所有单株种子(包括对照种子)的浸种、催芽、播种，均须分别在同1d进行，应符合DB32/T79-2007的规定。4.3.2.1播期湿润育秧5月10日～5月15日播种。4.3.2.2播种密度按湿润育秧每亩净秧板播量20kg的密度标准进行控制。4.3.2.3秧龄湿润育秧秧龄30d左右。4.3.3田间设计和隔离要求符合GB/T17316-2011的规定，空间隔离距离不少于100m，时间隔离扬花期要错开15d以上。4.3.4移栽应符合GB/T17316-2011的规定，单株栽插。4.3.5田间管理和记载应符合GB/T17316-2011的规定。4.3.6淘汰及收获应符合GB/T17316-2011的规定。4.3.7株行决选株行选择标准应符合DB32/T2791—2015的规定。收获后的株行按附录A进行暗胚乳突变基因和香味基因检测，淘汰不含暗胚乳突变基因和香味基因的株行。4.4株系圃应符合GB/T17316-2011的规定。4.5原种圃应符合GB/T17316-2011的规定。DB32/T2792-201535储藏和检验储藏和检验按GB/T3543.1～7-1995进行，符合GB4404.1-2008之规定的原种种子签发合格证书。ADB32/T2792-20154AB附录A（资料性附录）南粳9108暗胚乳突变基因和香米基因的分子检测方法南粳9108是含有暗胚乳突变基因Wx-mq和香米基因fgr的水稻品种，可针对这两个基因进行分子标记检测，辅助辨别品种的真伪。A.1Wx-mq基因四引物PCR分子标记检测A.1.1四引物PCR分子标记序列稻谷出苗后在三叶期按单株提取基因组DNA，利用四引物PCR标记进行分子检测。正向外引物（Wx-mq-O-F）序列为5'-ATGTTGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3'，反向外引物（Wx-mq-O-R）序列为5'-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3'，正向内引物（Wx-mq-I-F）序列为5'-GGGTGAGGTTTTTCCATTGCTACAATCG-3'，反向内引物（Wx-mq-I-R）序列为5'-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3'。A.2PCR反应体系。20μLPCR反应体系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL，Primer(4pmol/μL)2.0μL，10×PCRBuffer(含MgCl2)2.0μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4μL，Taq酶(5U/μL)0.5μL和ddH2O13.1μL。PCR反应在MJResearchPTC-200热循环仪上进行，反应程序如下：94℃下预变性5min，每个循环94℃下变性30s,65℃下退火30s，72℃下延伸1min，共35个循环，最后72℃下延伸10min，4℃下保存待用。A.1.3产物分析反应产物在质量比浓度为1.5%的琼脂糖凝胶上电泳，经溴化乙锭染色并于凝胶成像系统下观察分析。利用Wx-mq基因四引物分子标记扩增水稻品种的基因组DNA，南粳9108标准稻谷能同时扩增出439bp和292bp的DNA条带，而非南粳9108标准稻谷则同时扩增出439bp和200bp或同时存在439bp、292bp和200bp的DNA条带。（M：分子量标准；1、2、5、7、8、9、10为南粳9108稻谷标准带型，3、4、6为非标准带型。）A.2香米基因fgr的分子标记检测A.2.1fgr标记序列将稻谷进行幼苗DNA提取，利用InDel标记进行分子检测。正向引物（InDel-E2-F）序列为5׳-GGGAGGCGCTGAAGAGGA-3׳，反向引物序列（InDel-E2-R）序列为5׳-GGGTAGTCACCACCCTACCTTG-3׳。A.2.2PCR反应体系。20μLPCR反应体系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL，Primer(4pmol/μL)2.0μL，10×PCRBuffer(含MgCl2)2.0μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4μL，Taq酶(5U/μL)0.5μL和ddH2O13.1μL。PCR反应在MJ100bp250bp500bp750bp1000bp2000bpM12345678910439bp292bp200bpDB32/T2792-20155ResearchPTC-200热循环仪上进行，反应程序如下：94℃下预变性5min，每个循环94℃下变性30s，55℃下退火30s，72℃下延伸1min，共35个循环，最后72℃下延伸10min,4℃下保存待用。A.2.3产物分析反应产物在8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，经硝酸银染色并于凝胶成像系统下观察分析。利用fgr基因InDel分子标记扩增水稻品种的基因组DNA，南粳9108标准稻谷能扩增出100bp的DNA条带，而非南粳9108标准稻谷则扩增出107bp或同时具有100bp和107bp的带型。（M：分子量标准；1、2、3、4、5、6、9、10为南粳9108稻谷标准带型，7、8为非标准带型。）_________________________________M1234567891050bp100bp150bp107bp100bp