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ICS67.080.01X24DB61陕西省地方标准DB61/T968—2015果汁及果葡糖浆中羟甲基糠醛的测定方法液相色谱法Determinationofhydroxymethylfurfuralinfruitjuiceandfructosesyrup—Liquidchromatography2015-05-25发布2015-07-01实施陕西省质量技术监督局发布DB61/T968—2015I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准的附录A、附录B均为资料性附录。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由陕西出入境检验检疫局提出。本标准由陕西省质量技术监督局归口。本标准由陕西出入境检验检疫局负责解释。本标准起草单位：陕西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孔祥虹、何强、李建华、包仁书、邹阳、张璐、付骋宇、李莹。本标准首次发布。联系信息如下：单位：陕西出入境检验检疫局；电话：029-85407235；地址：西安市含光北路10号；邮编：710068。DB61/T968—20151果汁及果脯糖浆中羟甲基糠醛的测定方法液相色谱法1范围本标准规定了果汁及果葡糖浆中羟甲基糠醛的液相色谱检测方法。本标准适用于苹果汁、梨汁、石榴汁等果汁及果葡糖浆中羟甲基糠醛的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样用水溶解稀释后，经聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物固相萃取柱净化，用液相色谱法检测，外标法定量。4术语和定义下列术语和定义适用于本标准。4.1定量限LimitofQuantity是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。5试剂和材料5.1除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.2甲醇：色谱纯。5.3乙腈：色谱纯。5.4甲醇-水（1+4，V/V）：取100mL甲醇和400mL水，混合均匀。5.5甲醇-水（1+9，V/V）：取100mL甲醇和900mL水，混合均匀。5.6羟甲基糠醛标准物质（hydroxymethylfurfural，C6H6O3，CAS:67-47-0）：纯度大于等于99％。5.7羟甲基糠醛标准储备溶液：准确称取适量的羟甲基糠醛标准物质，用甲醇配制成1000μg/mL的标准储备溶液，-18℃保存。5.8羟甲基糠醛标准工作溶液：测定时根据需要，用本标准5.5条要求的甲醇-水配制成适当浓度的标准工作溶液，4℃保存。DB61/T968—201525.9聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱：500mg/6mL，或相当者，使用前依次用5mL甲醇、10mL水活化。5.10微孔滤膜：0.2μm，水系。6仪器和设备6.1液相色谱仪：配有紫外检测器。6.2分析天平：感量0.01mg、0.01g。6.3涡旋混匀器。6.4固相萃取装置。7测定步骤7.1样品处理7.1.1一般果汁称取5g（精确至0.01g）试样于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇-水（1+4，V/V）稀释，用水定容至50.0mL，过0.2μm微孔滤膜，供高效液相色谱仪检测。7.1.2浓缩果汁称取5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加入20mL水，充分溶解混匀，将样品溶液全部上样于活化好的聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，用5mL水洗涤样品管，洗涤液也上样于固相萃取柱净化，再用5mL水淋洗固相萃取柱，弃去所有流出液，最后用25mL甲醇-水（1+4，V/V）洗脱，整个固相萃取过程保持流速2～3mL/min，收集洗脱液，用水定容至50.0mL，过0.2μm微孔滤膜，供高效液相色谱仪检测。7.2测定7.2.1液相色谱条件a)色谱柱：C18柱（长250mm，内径4.6mm，粒径5μm），或相当者；b)流动相：乙腈-水（8+92，V/V）等度洗脱；c)柱温：35ºC；d)检测波长：285nm；e)流速：1.0mL/min；f)进样量：10μL。注：7.2.1为典型的高效液相色谱条件，采用超高效液相色谱仪时，可根据情况进行调整。7.2.2液相色谱测定根据样液中羟甲基糠醛的含量情况，选定浓度与样液相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中羟甲基糠醛的响应值均应在仪器检测范围内，如果样液中羟甲基糠醛的含量超出检测范围，则稀释后再进样。对标准工作溶液和样液等体积分时段参插进样测定，以保留时间定性，外标法定量，在7.2.1给定的液相色谱条件下，羟甲基糠醛标准溶液的液相色谱图参见附录A中图A.1。7.3空白试验DB61/T968—20153除不加试样外，均按上述检测步骤进行。7.4结果计算和表述7.4.1用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中羟甲基糠醛含量10001000×××××=mAVcAXss…………………………………………（1）式中：X——试样中羟甲基糠醛的含量（mg/kg）；A——样液中羟甲基糠醛的色谱峰面积；cs——标准工作液中羟甲基糠醛的浓度（μg/mL）；V——样液最终定容体积（mL）；As——标准工作液中羟甲基糠醛的色谱峰面积；m——试样质量（g）。7.4.2计算结果应扣除空白值，计算结果保留小数点后一位。8检出限、定量限、回收率和精密度8.1检出限、定量限本方法的检出限为0.3mg/kg，定量限为1.0mg/kg。8.2回收率和精密度羟甲基糠醛的回收率及精密度数据参见附录B中表B.1。DB61/T968—20154AA附录A（资料性附录）羟甲基糠醛标准溶液液相色谱图图A.1羟甲基糠醛标准溶液（4μg/mL）的高效液相色谱图DB61/T968—20155BB附录B（资料性附录）羟甲基糠醛的添加回收率及精密度数据表B.1羟甲基糠醛的添加回收率及精密度数据样品名称加标水平/（mg/kg）回收率范围/%平均回收率/%相对标准偏差/%苹果汁1091.3～96.794.82.22092.4～98.095.82.25095.9～99.697.61.5梨汁1092.7～106.798.25.22099.4～105.3102.02.25096.4～99.597.71.4石榴汁1074.8～92.588.611.12088.4～110.895.910.05089.9～101.894.85.1果葡糖浆1086.9～95.691.84.42093.9～99.797.03.05094.3～99.496.62.1_________________________________