DB36T 767-2013 转基因抗虫抗除草剂棉花生存竞争能力检测技术操作规程

ICS65.020B05备案号：40671-2014DB36江西省地方标准DB36/T767—2013转基因抗虫抗除草剂棉花生存竞争能力检测技术操作规程OperationProceduresinTestingSurvivalCompetitivenessofTransgenicInsect-resistantandHerbicide-resistantGeneCotton2013-12-25发布2014-02-01实施江西省质量技术监督局发布DB36/T767—2013I目次前言................................................................................II 1范围..............................................................................1 2规范性引用文件....................................................................1 3术语与定义........................................................................1 4检测品种和对照品种................................................................1 5生存竞争力检测技术................................................................1 6农田条件下检测指标................................................................2 7荒地条件下检测指标................................................................5 8检测评价指标......................................................................6 9安全措施..........................................................................6 DB36/T767—2013II前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由江西省农业厅提出。本标准起草单位：江西省棉花研究所、中国农业科学院棉花研究所。本标准起草人：张兴华、崔金杰、马艳、李捷、乔艳艳、杨兆光、陈宜。DB36/T767—20131转基因抗虫抗除草剂棉花生存竞争能力检测技术操作规程1范围本标准规定了转基因抗虫抗除草剂棉生存竞争能力检测技术的术语与定义、生存竞争能力检测品种和对照品种、生存竞争能力检测技术、检测评价指标、安全措施。本标准适用于表达本省具有转（Cy1Ac+EPSPS）抗虫抗除草剂基因新性状的双价复合性状转基因棉生存竞争能力检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.4-1995农作物种子检验规程发芽试验DB36/T768转基因抗虫抗除草剂棉花生存竞争能力检测技术评价指标3术语与定义下列术语与定义适用于本标准。3.1转基因抗虫抗除草剂棉TransgenicCry1AcplusEPSPScotton指通过基因工程技术将外源抗虫抗除草剂基因导入棉花基因组的转基因棉花品种（系）。4检测品种和对照品种4.1检测品种转入了外源抗虫抗除草剂基因的棉花品种。4.2对照品种未转入外源抗虫抗除草剂基因的当地常规棉非亲本品种。当地单价转Bt抗虫基因杂交抗虫棉品种（靶标害虫不防治、草甘膦使用、黄萎病圃三种生态检测时列入）。5生存竞争力检测技术转基因抗虫抗除草剂棉生存竞争力检测分别在农田生态：①常规耕作，②靶标害虫不防治，③草甘膦除草剂喷施，④黄萎病圃，⑤种子野外越冬，和荒地自然生态2类生态的5种环境条件下开展，通常仅需检测农田生态5种环境条件下的生态适应性，只有在农田生态5种环境条件下检测出转基因抗虫抗除草剂棉生存竞争能力显著增强的情况下，才需要进行荒地自然生态条件的检测。DB36/T767—201326农田条件下检测指标6.1越冬竞争力6.1.1检测内容①种子发芽势，②种子发芽率，③出苗率，④室内种子发芽势衰减值，⑤室内种子发芽率衰减值，⑥野外棉种越冬出苗率。6.1.2种子发芽势按GB/T3543.4-1995规定方法进行。用试验地中当年收获的转基因抗虫抗除草剂棉和对照的棉种进行检测。发芽势=发芽4d内正常苗数÷试验种子数×100。6.1.3种子发芽率按GB/T3543.4-1995规定方法进行。用试验地中当年收获的转基因抗虫抗除草剂棉和对照的棉种进行检测。发芽率=发芽12d内正常苗数÷试验种子数×1006.1.4出苗率转基因抗虫抗除草剂棉和对照品种，5月中旬包衣种直播然后用杀虫剂24%螺虫乙酯500倍+80%多菌灵500倍混合液喷灌籽土。小区四个重复，随机排列，每重复小区20穴，每穴播5粒棉种，计算出苗率，用方差分析，显著性极差比较，评价种子的出苗率。6.1.5室内种子发芽势衰减值按GB/T3543.4-1995方法，将上年试验地中收获的棉种于3月中旬进行发芽测试，室温控制在25℃左右。将年前与年后发芽测试中的发芽势进行衰减值计算，用方差分析，显著性极差比较评价种子在室内的越冬生存能力。6.1.6室内种子发芽率衰减值按GB/T3543.4-1995方法，将上年试验地中收获的棉种于3月中旬进行发芽测试，室温控制在25℃左右。将年前与年后发芽测试中的发芽率进行衰减值计算，用方差分析，显著性极差比较评价种子在室内的越冬生存能力。6.1.7野外棉种越冬出苗率于12月底将转基因抗虫抗除草剂棉和对照每小区土表点播40粒棉种，4个重复，随机排列，来年从4月中旬～10月上旬观察统计出苗率，用方差分析，显著性极差比较评价种子在野外的越冬生存竞争能力。6.2生育性状竞争力6.2.1检测内容①棉株高，②棉覆盖度，③产量性状，④生殖性状。6.2.2棉株高DB36/T767—20133转基因抗虫抗除草剂棉和对照品种，5月中旬直播，四个重复，随机排列，每重复定苗20株，在苗期（4片～6片真叶期）、现蕾期、花铃期及吐絮期，每小区测10株棉花，用方差分析，显著性极差比较评价棉株高竞争力。6.2.3棉覆盖度转基因抗虫抗除草剂棉和对照品种，在5月中旬直播试验地上于苗期（6月20日左右）、蕾期（7月10日～15日）、花铃期（7月底～8月初）、吐絮期（9月20日左右）用游标卡尺测量棉株冠直径，每小区测10株棉花，求出平均值，然后用平均值半径的平方×3.1416得出棉单株株冠圆面积，用单株冠圆面积×小区植棉数得出小区总棉花株冠面积，再用这个小区总株冠面积÷小区面积×100=棉花实际覆盖度，然后用方差分析，显著性极差比较评价棉覆盖度竞争力。6.2.4产量性状对转基因抗虫抗除草剂棉和对照品种于9月底或10月上旬每小区测10株棉花，统计每株棉花上的单株成铃数，用方差分析，显著性极差比较评价棉单株成铃总数、籽棉、皮棉产量竞争力。6.2.5生殖性状单铃重、单铃籽棉重、单铃皮棉重、单铃壳重、小样衣分、籽指、衣指、单铃不孕籽粒数、单铃平均不孕籽重量。于10月份转基因抗虫抗除草剂棉和对照各小区收取50个棉中部吐絮铃，晒干后用室内考种方法取得单铃重，单铃籽棉重和单铃皮棉重等上述考种内容数据，然后用方差分析，显著性极差比较评价。6.3抗虫性状竞争力6.3.1检测内容①不防治环境下单株成铃数，②不防治环境下籽棉产量，③不防治环境下皮棉产量。6.3.2不防治环境下单株成铃数从棉移栽后直至吐絮收获，不用杀虫剂喷施防治害虫（个别高温干旱期遇棉叶螨大发生年份可适当使用杀螨剂杀螨），10月10日～15日期间调查统计各试验小区单株成铃数。方法：每试验小区随机连续调查10株棉花，记录每株棉花上的大铃和小铃（已吐絮收获的空壳铃或剩铃柄都须计算为大铃），然后进行平均，计算出单株成铃数。6.3.3不防治环境下籽棉产量各试验小区吐絮棉花总收获量。6.3.4不防治环境下皮棉产量各试验小区吐絮棉花轧花后的产量。6.4抗除草剂性状竞争力6.4.1检测内容①草甘膦压力下棉苗抗级，②草甘膦压力下成株期株高，③草甘膦压力下覆盖度，④草甘膦压力下单株成铃，⑤草甘膦压力下果枝层数，⑥草甘膦压力下蕾铃脱落率，⑦草甘膦压力下籽棉产量，⑧草甘DB36/T767—20134膦压力下皮棉产量，⑨草甘膦压力下单铃重，⑩草甘膦压力下单铃籽棉重，○11草甘膦压力下单铃皮棉重，○12草甘膦压力下单铃壳重，○13草甘膦压力下不孕籽粒数。6.4.2棉苗抗草甘膦分级标准每处理小区100个营养钵播种，4个重复，随机排列，待棉苗二叶一心期时用41%草甘膦异丙胺盐4000mg/L喷洒一次，药后18d进行药害分级调查，分级标准如下表1：表1棉苗抗草甘膦分级标准级别症状抗级0级健株，无药害高抗1级子叶、真叶略有褪绿，心叶不褐，叶不萎抗2级真叶褪绿黄化不干枯，心叶不枯萎中抗3级真叶失绿黄化略有干枯，心叶不褐萎耐4级全株苗叶失绿，黑褐色枯死不抗6.5抗黄萎病性竞争力（黄萎病圃）6.5.1检测内容①病株率，②病指数，③抗病级别，④株高，⑤覆盖度，⑥单株成铃数，⑦果枝层数，⑧蕾铃脱落率，⑨籽棉产量，⑩皮棉产量，○11单铃重，○12单铃籽棉重，○13单铃皮棉重，○14单铃壳重，○15衣分率，○16不孕籽粒数。6.5.2病株率发病率（%）=发病株数调查总株数×100……………………（1）6.5.3病情指数病情指数=∑（病级株数×代表数值）调查株数总和×发病最重级的代表数值（4）×100……………………（2）相对抗性指数IR=K×鉴定材料病情指数……………………（3）K=规定感病对照品种病指50÷感病对照品种的病情指数……………………（4）相对抗病效果ER=（感病对照品种病指—鉴定材料病指）感病对照品种病指×100……………………（5）6.5.4抗病级别以相对抗性指数（IR）和相对抗病效果（ER）来划分品种的抗病类型，将棉花的抗病性分为5级，其分级标准见表2。DB36/T767—20135表2棉花抗黄萎病分级标准抗级ＩHRRTS类型免疫高抗抗病耐病感病相对抗指（IR）00.1~10.010.1~20.020.1~35.0≥35.1相对抗效（ER）100.099.0~80.180.0~60.160.0~30.1≤30.06.6纤维品质竞争能力按品种处理4个重复每重复小区收摘50个中部吐絮铃，晒干后轧取皮棉送国家有资质的纤维品质机构检测，检测内容：上半部平均长度、整齐度、马克隆值、伸长率、断裂比强度、反射率、黄度、纺纱均匀指数。上述特性指标在正常天气年份下检测期限为一年，检测当年遇灾害性天气年份则需连续检测两年。7荒地条件下检测指标7.1竞争力分以下内容进行检测：出苗率、株高、生育期进程、自生苗、单株吐絮铃瓣数、吐絮铃瓣落粒率。7.2试验设计应遵守原则a)选用抛荒一年以上长有各种杂草的耕地或选用非耕作过的长有各种杂草的荒地；b)采用随机区组设计，四个重复，每重复小区长3m×宽2m=6m2，4月下旬或5月上旬撒播40粒棉种；c)不除草，施肥，灌溉等管理；d)播种前调查试验地杂草种类，覆盖度（目测），草高度，以及转基因抗虫抗除草剂棉和对照小区杂草平均覆盖度，播种后每30d调查一次至10月底结束；e)转基因抗虫抗除草剂棉和对照竞争能力各项指标播种后每隔30d调查一次，至第二年6月底结束。7.3出苗率播种后每隔30d调查一次至10月底，用百分数方法，统计出苗率，并进行差异比较，以此评价出苗率显著性差异和出苗持续性。a）差异不显著——出苗率差值5个百分点以下；b）差异显著—