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ICS65.100B17备案号：37013-2013江苏省地方标准DB32DB32/T2236-2012农药对家蚕急性毒性测定方法浸叶法DeterminationoftheacutetoxicityofpesticidesagainstBombyxmoriwithleafdippingmethod2012-12-28发布2013-02-28实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T2236-2012前言本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编制。本标准由江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所本标准主要起草人：余向阳、刘贤进、王冬兰、严海娟、汪佳蕾。DB32/T2236-20121农药对家蚕急性毒性测定方法——浸叶法1范围本标准规定了采用浸叶法测定农药对家蚕急性毒性的试验条件、试验方法、质量控制、数据分析及评价标准。本标准适用于采用浸叶法测定农药对家蚕急性毒性，评价农药对家蚕的毒性等级。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1半致死浓度medianlethalconcentration引起50%供试生物死亡的供试物浓度，用LC50表示，在本部分中单位是a.i.mg/L。2.2供试物testsubstance试验中需要测试的物质。2.3农药pesticide用于预防、消灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物以及来源于生物、其他天然物质的一种或几种物质的混合物及其制剂。本标准适用的农药不包括性激素类、生长调节剂类等农药。2.4原药technicalmaterial在农药生产过程中直接得到的有效成分及杂质组成的最终产品。2.5制剂formulation使农药有效成分能够达到所称防效的、具有一定组分的农药加工形态。2.6有效成分activeingredient,a.i.农药原药或制剂中具有生物活性的部分。3方法摘要采用不同浓度的农药药液浸渍桑叶，晾干后供家蚕二龄幼虫食用。整个试验期间用带毒桑叶饲喂，DB32/T2236-20122并观察记录饲喂后24h、48h、96h、至三龄期受试家蚕的中毒及死亡情况，试验结束后对数据进行数据统计，计算半致死浓度LC50值。4试验条件4.1试验条件4.1.1供试生物试验用家蚕（Bombymmori）品种宜选用菁松×皓月，春蕾×镇珠，苏菊×明虎，或其他有代表性的品系。以二龄期蚕为毒性试验材料。4.1.2供试物供试物可使用农药制剂、原药或纯品,试验时用去离子水溶解并稀释至供试浓度。难溶于水的可用少量对家蚕毒性小的有机溶剂助溶。4.1.3主要仪器设备恒温培养箱、培养皿、移液管、玻璃烧杯、量筒等。4.1.4试验条件蚁蚕饲养和试验温度为（25±2）℃，相对湿度为70%～80%。4.2试验方法4.2.1预试验按正式试验的条件，以较大的间距设置4个～5个浓度组，通过预试验求出家蚕最高全存活浓度和最低全致死浓度，在此范围内设置正式试验的浓度。4.2.2正式试验根据预试验确定的浓度范围按一定间距设置5个～7个浓度组，每组20头蚕，并设空白对照，加溶剂助溶的还需要设溶剂对照。对照组和每一浓度组均设3个重复。在玻璃皿内饲养二龄蚁蚕，用不同浓度的药液完全浸渍桑叶10秒钟，自然晾干后供蚕食用。整个试验期间饲喂处理桑叶，观察并记录24h、48h、96h直至三龄期试验用家蚕的中毒症状及死亡情况。试验结束后对数据进行数据统计，计算半致死浓度LC50及95%置信限。4.2.3限度试验根据农药对家蚕的毒性划分标准，设置上限浓度2000a.i.mg/L，即在供试物达2000a.i.mg/L时仍未见家蚕死亡，则无需继续进行试验。此时，即可判定供试物对家蚕为低毒。4.3数据处理家蚕的半致死浓度LC50的计算可采用寇氏法、直线内插法或概率单位图解估算，也可应用有关毒性数据计算软件进行分析和计算。4.3.1寇氏法用寇氏法可求出家蚕在24h、48h、72h和96h的LC50及95%置信限。LC50的计算见式（1）：()5.0log50−−=∑PiXLCm………………………………………………………………（1）式中：Xm—最高浓度的对数；i—相邻浓度比值的对数；∑P—各组死亡率的总和（以小数表示）。DB32/T2236-2012395%置信限的计算见式（2）：5050log96.1log%95LCSLC±=置信限……………………………………………………（2）标准误的计算见式（3）：∑=npqiLCS50log………………………………………………………………………（3）式中：p—1个组的死亡率；q—1-p；n—各浓度组家蚕的数量。4.3.2直线内插法采用线性刻度坐标，绘制死亡百分率对实验物质浓度的曲线，求出50%死亡时的LC50值。4.3.3概率单位图解法用半对数纸，以浓度对数为横坐标，死亡百分率对应的概率单位为纵坐标绘图。将各实测值在图上用目测法画一条相关直线，从直线中读出致死50%的浓度对数，估算出LC50值。4.4质量控制质量控制条件包括：——空白对照组死亡率不超过10%；——试验期间，应保持试验室条件正常，如出现各种原因的故障，须重做试验。5评价标准按农药对家蚕96h半致死浓度LC50，将农药对家蚕的急性毒性划分标准分为四级，见表1.表1农药对家蚕的急性毒性等级划分毒性等级半致死浓度LC50a.i.mg/L剧毒LC50≤0.5高毒0.5＜LC50≤20中毒20＜LC50≤200低毒LC50＞2006试验报告试验报告应包括下列内容：——供试物的信息，包括供试农药的通用名、结构式、CAS号、纯度、基本理化性质、来源等；——供试生物的名称、来源、大小及饲养情况；——试验条件，包括试验温度、试验方法等；——试验药液的浓度，24h、48h、72h、96h的LC50值和95%置信限，并给出所采用的计算方法。——对照组家蚕是否出现死亡及异常反应；——观察到的毒性效应，如受家蚕的任何不正常的行为、中毒症状等；——试验结果及毒性评价。