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ICS65.020.20B16备案号：37011-2013江苏省地方标准DB32DB32/T2234-2012小麦抗全蚀病鉴定方法与抗性评价技术规程Rulesforresistanceevaluationofwheattotake-alldisease2012-12-28发布2013-02-28实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T2234-2012前言为规范江苏省小麦品种抗全蚀病的鉴定方法及评价技术制定本标准。本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编写。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准起草人：陈怀谷、李伟、王宁。DB32/T2234-20121小麦抗全蚀病鉴定方法与抗性评价技术规程1范围本标准规定了小麦抗全蚀病鉴定方法和抗性评价的病原物接种体制备、抗性鉴定方法、病情分级和抗性综合评价标准。本标准适用于小麦对全蚀病抗性的鉴定和评价。2病原物接种体制备2.1接种菌株的分离从小麦全蚀病发病田采集病株，取小麦病根，剪成5mm左右的片段，用1%(w/v)AgNO3溶液表面消毒1分钟后，无菌水浸洗3次，转入含有0.1%(w/v)链霉素的PSA(马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂20g，加去离子水至1000mL)平板上，25°C培养，挑取菌落边缘菌丝尖端再培养，纯化后的菌株置于PSA斜面4°C保存。分离物经形态学和分子生物学鉴定等确认为Gaeumannomycesgraminisvar.tritici后，进行菌尖纯化。通过小麦幼苗期致病性测定，筛选强致病力菌株，冷冻保存备用。所用菌株需隔年进行致病力测定。2.2小麦全蚀病菌接种体制备接种所用分离物应为当地致病力强的分离物。室内接种鉴定的接种体为菌丝块，田间接种鉴定的接种体为带菌麦粒。2.2.1菌丝块接种体制备将保存的全蚀病菌菌丝接种到马铃薯蔗糖琼脂平板上，25℃培养4～5d，使菌落长至平板的3/4。2.2.2病麦粒接种体制备将麦粒在室温下浸泡24h，沥干后，装入三角瓶中，在121℃下灭菌1h，冷却后备用。将小麦全蚀病的菌丝块接种于麦粒培养基中，在23℃～25℃下黑暗培养15～20d，菌丝布满麦粒后，将麦粒从三角瓶中取出，室温下晾干备用。3抗病性鉴定3.1盆栽鉴定3.1.1播种盆钵（口径16×高12cm）底至高2/3处铺蛭石，在表面均匀对称接10个5mm菌碟，加蛭石覆盖，厚度约2cm。均匀播颗露白麦种25粒，加蛭石(或沙)将种子覆盖。抗病品种对照采用太空6号、中等感病品种对照采用矮抗58。3.1.2培养条件播种后，将盆钵置于温度为15～25ºC、湿度80%以上的温室内培养，并使蛭石保持湿润。3.1.3病情调查病情调查于小麦播种后21d进行。调查时将整盆植株连带蛭石浸泡于清水中，小心清洗干净，尽量DB32/T2234-20122保证植株根部完整。根据病害症状描述，调查和记载每个植株的病害严重度。3.2人工病圃鉴定人工病圃选择具备良好的自然发病环境和灌溉条件、地势平坦、砂性土壤的地块。鉴定圃内不施用任何杀菌剂。人工病圃鉴定小区畦宽2.5m，每鉴定品种种植1行，行长1m，行距0.3m，每隔20个品种设1组抗感对照，重复2次。在播种沟内均匀撒病麦粒25～100g/㎡，然后播种盖土。病圃内土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同，不施用任何杀菌剂。抗病品种对照采用太空6号、中等感病品种对照采用矮抗58。小麦的播种时间与大田生产一致，或适当调整播期以使植株接种期和发病期能够与适宜的气候条件（湿度与温度）相遇。3.2.1病情调查人工病圃鉴定在小麦穗期进行病情调查。每份鉴定材料每行取20株小麦，根据病害症状描述，逐株进行调查并记载病情级别。调查时用铁锹等将整株小心挖出，使根系保持完整，在水中清洗干净，在白色背景下调查根系发病情况。4病情分级4.1盆栽鉴定病情分级盆栽鉴定病情严重度分级及其对应的症状描述见表1。表1盆栽鉴定小麦全蚀病病情级别划分及其症状描述严重度分级症状描述0无可见发病症状1病根数占总根数10%3病根数占总根数10%～50%5病根数占总根数50%～100%7病根数占总根数100%，茎基部变褐，植株黄化矮化9植株死亡4.2人工病圃鉴定病情分级人工病圃鉴定严重度分级及其对应的症状描述见表3。表2人工病圃鉴定小麦全蚀病病情级别划分及症状描述严重度分级症状描述0无可见发病症状1发病根系面积占根系总面积25%3发病根系面积占根系总面积25%～50%5发病根系面积占根系总面积50%7茎基部变褐，植株黄化矮化9出现枯白（孕）穗4.3病情指数计算盆栽鉴定和人工病圃鉴定采用相同的病情指数计算公式。当严重度用分级代表值表示时，病情指数计算按公式（1）：DB32/T2234-20123()%100max1×⋅⋅=∑∑=aXaXDIiniii……………………………………………………………………………（1）式中：DI：病情指数；Xi：病害分级标准各级级值；ai：各级严重度的调查单元数；∑Xi：调查单元总数；amax：最高级值。5抗性评价当感病对照材料达到其相应感病程度（3级以上），该批次抗全蚀病鉴定视为有效。根据供鉴材料和感病对照的病情指数，计算供鉴材料的相对抗性指数，相对抗性指数计算按公式（2）：RRI=ln[DIm/(100-DIm)]×ln[DIck/(100-DIck)]……………………………………………………（2）式中：DIm：供鉴材料病指；DIck：对照病指。小麦对全蚀病抗性评价标准见表3表3小麦对全蚀病抗性评价标准相对抗病指数抗性评价≤-1.20高抗（R）≤-0.7中抗（MR）＜0低抗（LR）≥0低感（LS）＞0.9中感（MS）＞2.0高感（HS）6抗性综合评价6.1抗性评价依据鉴定材料在盆栽和人工病圃中发病程度综合确定其对全蚀病的抗性水平，在盆栽和人工病圃鉴定的结果不一致时，以人工病圃鉴定的结果为准。人工病圃鉴定结果的两次重复中，以病情指数高的为准。6.2重复鉴定初次鉴定中表现为高抗、中抗的材料，次年用相同的病原菌进行重复鉴定。当两年抗性鉴定结果不一致时，以记载的严重病情级别为准。7鉴定记载表格小麦抗全蚀病鉴定原始记录及结果记载表格格式见表4。抗性鉴定记录保存2年。DB32/T2234-20124表4年小麦抗全蚀病鉴定原始记录及结果记载表（式样）编号品种名称来源盆栽鉴定人工病圃鉴定抗性总评病情级别及病情指数抗性评价病情级别及病情指数抗性评价1级3级5级7级9级病情指数1级3级5级7级9级病情指数注1:鉴定地点地势注2:接种病原菌分离物编号注3:接种日期调查日期注4:播种日期鉴定技术负责人（签字）：