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ICS67.080.20B31备案号：35057-2012DB22吉林省地方标准DB22/T1583—2012黑木耳枝条菌种生产技术规程TechnicalregulationsofbranchesstrainsofAuriculariaauricula2012-09-15发布2012-10-31实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1583—2012I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省林业厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省林业科学研究院、吉林农业大学、九台市怡景园林绿化公司、吉林省白河林业局。本标准主要起草人：付晓霞、刘晓龙、刘桂英、李继平、姚瑞、王广发。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1583—20121黑木耳枝条菌种生产技术规程1范围本标准规定了黑木耳枝条菌种生产场地、厂房设置和布局、设备设施、使用品种、生产工艺流程、技术要求和贮存运输要求。本标准适用于黑木耳原种生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法—培养基和试剂GB9688食品包装用聚丙烯成型品卫生标准NY/T1742-2009食用菌菌种通用技术要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1枝条菌种branchesstrains利用硬杂木短木条作为原材料，经过处理并添加其它辅料后进行高压灭菌、冷却接种、恒温培养生产的菌种。4技术要求4.1技术人员菌种厂应有与固体菌种生产所需的相对应专业技术人员，专业技术人员应具有两年以上菌种生产经验。4.2场地选择地势平坦、高燥，通风良好，排水畅通，交通便利；周边300m之内无禽畜舍，无垃圾场，无污水和其他污染源，100m内无食用菌栽培场。4.3厂房与设施有晾晒场、原料库、配料室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、贮藏室、检验室等，厂房建造从结构和功能上能满足黑木耳枝条菌种生产的基本需要。4.3.1晾晒场本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1583—20122要求地势平坦高燥、通风良好、光照充足、空旷宽阔。4.3.2原料库要求通风干燥、防雨防晒防鼠，并远离火源。4.3.3配料室要求在室内，有水源和电源；如在室外还应有天棚，要防雨防晒防鼠。并配有蓄水池、天平、磅秤、搅拌机和分装设备等。4.3.4灭菌室要求水电方便，通风良好，并配备高压灭菌设备等。4.3.5冷却室清洁、防尘，易散热，并配备排风扇等降温除湿设备。4.3.6接种室设置缓冲间，防尘换气性好，墙内壁和屋顶光滑。接种室安装空调设备，并配备接种箱或超净工作台等无菌操作设备及常规接种工具。4.3.7培养室和贮藏室培养室安装通风设备，墙内壁和屋顶光滑。培养室和贮藏室利于控温保温。并配备恒温培养箱、培养架和保藏冰箱等设备。4.3.8菌种检验室水电方便，检验设备和仪器齐备。4.3.9厂房布局按照食用菌固体菌种生产工艺流程合理安排布局。4.4使用品种4.4.1品种从具有相应技术资质的供种单位引进，种性清楚，并经省级以上农作物品种审定委员会审定的品种。4.4.2种源质量检验菌种生产单位每年在种源扩大生产前应进行菌种质量和种性检验，包括纯度、活力、菌丝长势的一致性、菌丝生长速度、菌落外观等，并做出耳试验，验证种性。种源出耳试验方法及种源质量要求应符合NY/T1742-2009中5.4的规定。4.4.3移植扩大母种仅用于移植扩大原种，一支母种移植扩大原种不超过6瓶（袋）；原种只能用于栽培。4.5工艺流程本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1583—20123准备枝条→浸泡→装袋（瓶）→灭菌→灭菌效果检查→冷却接种→菌丝培养→检查→成品入库4.6生产过程中的技术要求4.6.1原种容器每批次菌种容器规格要一致。可以使用850ml以下、耐126℃高温、无色或近无色、瓶口直径小于4cm的近透明塑料瓶，或（15~17）cm×（28~33）cm规格、耐126℃高温的塑料袋，并符合GB9688的规定。塑料袋应使用棉塞或无棉塑料盖封袋口。4.6.2培养原料化学试剂类原料如硫酸镁、磷酸二氢钾等要使用化学纯级试剂；天然材料如枝条，木屑，麦麸、米糠等要新鲜、无虫螨、无霉变，洁净干燥。4.6.3枝条准备根据当地原料资源使用适宜的培养基配方（见附录A.1和A.2），严格掌握常规培养基的含水量和pH值。选择适宜黑木耳生长的桦树、柞树、紫穗槐树、桑树等硬杂木枝条做原料，要求枝条直径4mm~7mm，并截成15cm~18cm长。也可选用这些树种生产的方便筷。4.6.4枝条处理先将枝条或方便筷放在营养液中煮1h，然后在营养液中浸泡12h，浸泡后捞出沥干。营养液配方为马铃薯200g、蔗糖20g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.5g。马铃薯煮汁过滤后，添加配方中其它物质后加水至1000ml。4.6.5装袋（瓶）先在袋（瓶）底放一层常规培养料（见附录A.3），然后将枝条直立装入袋（瓶）内，要求枝条松紧适度，在最上层再撒一层常规培养料后封好袋（瓶）口。4.6.6灭菌装袋（瓶）封好袋（瓶）口后在4h内必须灭菌，高压灭菌0.12Mpa~0.15Mpa保持2h。灭菌完毕后自然降压，不应强制降压冷却。灭菌时防止棉塞被冷凝水浸湿。4.6.7效果检查将原种培养基经无菌操作接种于GB4789.28中规定的营养肉汤培养基中，在28℃恒温条件下培养48h后检查，无微生物长出为灭菌合格。4.6.8冷却冷却室使用前要进行清洁、除尘和消毒灭菌处理。将灭菌后的料袋（瓶）放置在冷却室中冷却到28℃以下。4.6.9接种4.6.9.1接种室（箱）消毒将接种室（箱）打扫干净，搬入母种和料袋（瓶），再用国家规定的药物进行消毒，同时用紫外灯照射30min。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1583—201244.6.9.2无菌操作在无菌室（箱）或超净工作台上严格按无菌操作规程进行接种。接种完成后及时贴好标签。接种室每次使用后，要及时清理干净，通风换气，台面用75％酒精擦拭消毒。4.6.10培养原种接种后在24℃~26℃适宜培养温度下进行暗光培养，并保持空气相对湿度在70％以下，培养室定期通风；培养后期温度降至20℃~22℃，并加强通风。菌丝长满瓶（袋）后继续培养15d~20d，促进菌丝向枝条内部生长。4.6.11检查杂菌菌种培养期间应定期检查，及时拣出被污染的不合格菌种。4.6.12标签、标志出售的菌种应贴标签。注明品种、接种日期、生产单位和地址电话，外包装上应有防晒、防潮、防倒立、防高温、防雨、防重压等标志，标志应符合GB/T191的规定。4.6.13贮藏运输完成培养的菌种要及时登记入库，低温冷藏。要求用纸箱包装，不能用塑料袋包装。采用1℃～4℃保温车运输。4.6.14留样待检枝条菌种应保留样本备查，每个批号留样数量3袋（瓶），在1℃～4℃条件下贮存，贮藏至使用者在正常生产条件下该批菌种出第一潮耳。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1583—20125AA附录A（规范性附录）枝条原种培养基配方A.1枝条培养基阔叶树枝条90%，阔叶树木屑7.8%，麸皮2%，葡萄糖0.1%，石膏粉0.1%。A.2方便筷培养基方便筷90%，阔叶树木屑7.8%，麸皮2%，葡萄糖0.1％，石膏粉0.1%。A.3常规木屑培养基阔叶树木屑78%，麸皮20%，葡萄糖1%，石膏粉1%，含水量58%±2%，pH6~6.5。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印