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ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1384.8—2011饲料中氯羟吡啶的测定液相色谱－串联质谱法DeterminationofcopidolinfeedLC-MS/MSmethod2011-05-10发布2011-05-20实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1384.8—2011I前言本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学、石家庄市疾病预防控制中心、北京出入境检验检疫局技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人：张岩、杨立学、李挥、张宏、丛斌、卢晓宇、吕品、贾茜、李强、李志平、马春玲、米振杰、沈磊、高振同、武英利。DB13/T1384.8—20111饲料中氯羟吡啶的测定液相色谱－串联质谱法1范围本标准规定了饲料中氯羟吡啶的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中氯羟吡啶的测定。本标准的方法检出限为20μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682－1992，neqISO3696：1987〉3原理试样中氯羟吡啶经甲醇提取，用中性氧化铝柱净化分离，浓缩后用甲醇溶解，液相色谱-串联质谱定性定量测定。.4试剂和溶液除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇。4.2中性氧化铝萃取柱：1g，6mL。4.3氯羟吡啶标准品：纯度均应大于95%。4.4氯羟吡啶标准贮备液：分别准确称取己知纯度的氯羟吡啶标准品10mg（精确至0.000lg），置于100mL棕色容量瓶中，加甲醇超声使之完全溶解，定容至刻度，摇匀。该溶液中氯羟吡啶浓度为100g/mL，于4℃保存可使用6个月。4.5氯羟吡啶标准工作液：准确移取氯羟吡啶标准储备液5mL，置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，该溶液中氯羟吡啶浓度均为10g/mL，于4℃保存可使用1个月。4.6正己烷。4.7氨水。5仪器和设备除实验室常用仪器和设备外，还包括以下仪器和设备。5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2电子天平：感量为0.lmg和1mg。DB13/T1384.8—201125.3旋涡混匀器。5.4滤膜：孔径0.45μm，有机相。5.5高速离心机。5.6中性氧化铝固相萃取柱：500mg，6mL，或相当者。6试样的制备6.1提取准确称取样品5g（精确至0.00lg）于50mL离心管中，加入甲醇10mL，旋涡混合，于振荡器振荡30min，5000r/min离心5min，取上清液再加入10mL水、500μL氨水、10mL正己烷，涡旋30s，8000r/min离心5min，取下层清液待净化。6.2净化将上清液移入中性氧化铝柱中，用20mL甲醇洗脱，将过柱液及洗脱液全部接收于50mL离心管中，氮吹至干，用lmL甲醇溶解残渣，过0.45μm微孔滤膜，待测。7分析步骤7.1测定7.1.1液相色谱条件色谱柱：C18，5μm，150mm×2.lmm（内径）或相当者。水（A）+甲醇（B）。流速：0.25mL/min。梯度：0～4.0min10％～90％B；4.0min～8.0min90％B，8.1min～10.0min10％B。柱温：25℃。进样量：25μL。7.1.2串联质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子监测。扫描方式：选择离子检测（MRM）。雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气。电喷雾电压、碰撞电压等自动优化至最佳值。定性离子对(m/z)：192.2/174.2，192.2/101.0。定量离子对定量离子对(m/z)：192.2/101.0。7.2定性、定量氯羟吡啶标准工作溶液在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以样品峰面积为纵坐标，工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中泰乐菌素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。氯羟吡啶标准物质质谱图参见附录A。7.3空白试验DB13/T1384.8—20113除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算结果用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值：mVcX•=.......................................(1)式中：X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）。c——从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）。V——样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)。m——样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。9重复性同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于15％。DB13/T1384.8—20114AA附录A（资料性附录）氯羟吡啶标准质谱图表A.1氯羟吡啶标准物质质谱图_________________________________