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2ICS65.150B50备案号：江苏省地方标准DB32/T1736—2011水生动物车轮虫病诊断方法DiagnosemethodonAquaticanimaldiseaseofTrichodinaTrichodinaTrichodinaTrichodinaspp.spp.spp.spp.2011-04-15发布2011-06-15实施江苏省质量技术监督局发布DB32DB32DB32DB32DB32/T1736--2011I前言车轮虫病诊断是水生动物生物学诊断的重要部分，目前还没有该寄生虫病的诊断方法，特制定本地方标准。本标准按GB/T1.1–2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》编制。本标准由江苏省海洋与渔业局提出。本标准起草单位：江苏省水生动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：陈辉、黄春贵、邹勇、段翠兰、王习达、郭闯、方苹、陈静、刘训猛、郭立新。DB32/T1736-20111水生动物车轮虫病诊断方法1范围本标准规定了水生动物车轮虫病诊断方法的仪器、程序和操作步骤。本标准适用于水生动物车轮虫病的诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18088—2000出入境动物检疫采样3仪器3.1显微镜。3.2解剖镜。3.3解剖盘。3.4弯头镊子。3.5载玻片。3.6盖玻片。4诊断程序车轮虫病诊断程序见图1。车轮虫隶属于原生动物门、缘毛亚纲、缘毛目、壶形科、车轮虫属。车轮虫侧面观如毡帽状，反面观为圆碟形，运动时如车轮转动样。隆起的一面为前面或称口面，相对而凹入的一面为反口面。口面上有向左或反时针发方向螺旋状环绕的口沟，其末端通向胞口。口沟两侧各着生一列纤毛，形成口带，直达前庭腔。反口面的中间为齿环和辐线环。在辐线环上方有一马蹄形的大核，一个长形的小核和一个伸缩泡，其中部向体内凹入，形成附着盘，用于吸附在宿主身上。车轮虫用附着盘附着在鱼体的鳃丝或皮肤上，并来回滑动。游泳时一般用反口面向前像车轮一样转动，所以称为车轮虫。生殖用纵二分裂法和接合生殖。常见能致病的车轮虫有10多种，寄生于各种淡水鱼、海水鱼的体表、鳃等处，主要危害鱼苗、鱼种，严重时可引起大批死亡。大量寄生时，由于虫体的刺激，引起组织发炎，分泌大量粘液，在体部、鳃上形成一层粘液层，虫体密集处，如鳍、头部、体表出现一层白翳。病鱼消瘦、发黑、游动缓慢，呼吸困难，以致死亡。DB32/T1736-20112图1车轮虫诊断程序5操作步骤5.1样品的收集和处理鳃膀胱、输尿管等制片镜检10×10表观病鱼解剖皮肤确诊为车轮虫确诊为非车轮虫非优势种出报告优势种DB32/T1736-20113对有症状的水生动物，挑选3-5尾，至少不低于2尾的濒死个体；对无症状的水生动物，按GB/T18088—2000的规定，随机取一定数量的个体。对样品先进行目检，确定病变部位，然后取鳃、皮肤、前鼻孔内侧、膀胱、输尿管等病变组织或粘液制片。5.2制片用剪刀或解剖刀、镊子取病症的部位，同一部位分别制成两个玻片，标上组织名称。5.3确诊优势种将制好的玻片分别于显微镜低倍镜（10×10）下观察，见构成齿环的齿体具发达的空锥形锥部以及向外的齿钩，则确定为车轮虫（具体见图2）。只要有一片中有单种寄生虫出现80％以上，可定为寄生虫优势种。5.4确诊车轮虫病在低倍镜的视野下，车轮虫为优势种的可确定为车轮虫病。5.5结果确认上述结果如果为车轮虫病，不复查，报告为车轮虫病。若不是车轮虫病再复查，结果仍然如此，则报告为非车轮虫病。