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7ICS65.150B50备案号：江苏省地方标准DB32/T1735—2011DB32DB32DB32DB32水生动物指环虫病诊断方法DiagnosemethodonAquaticanimaldiseaseofDactylogyrusspp2011-04-15发布2011-06-15实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T1735-2011I前言指环虫诊断是水生动物生物学诊断的重要部分，目前还没有该寄生虫病的诊断方法，特制定本地方标准。本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》编制。本标准由江苏省海洋与渔业局提出。本标准起草单位：江苏省水生动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：陈辉、黄春贵、邹勇、段翠兰、王习达、郭闯、方苹、陈静、郭立新、刘训猛。DB32/T1735-20111水生动物指环虫病诊断方法1范围本标准规定了水生动物指环虫病诊断方法的仪器和材料、程序和操作步骤。本标准适用于水生动物指环虫病的诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18088—2000出入境动物检疫采样3仪器和材料3.1显微镜。3.2解剖镜。3.3解剖盘。3.4弯头镊子。3.5载玻片。3.6盖玻片。4诊断程序指环虫病诊断程序见图1。指环虫病是由指环虫属中许多种类寄生而引起的寄生虫性疾病。我国饲养鱼类中常见的指环虫有鳃片指环虫、鳙指环虫、鲢指环虫和环鳃指坏虫等。指环虫虫体扁平（见图2），头部前端背面有4个黑色的眼点，口在眼点附近，口下面膨大的部分叫咽，咽后分两根肠管延伸到体后端连接成环状。虫体后端有固着盘，由1对中央大钩和7对边缘小钩组成，借此固着在鱼的鳃和体表上。指环虫是雌雄同体的卵生吸虫。在虫体的后部有一卵巢，精巢在卵巢的后面。指环虫大量寄生时，鳃部显著浮肿，病鱼鳃丝粘液增多，鳃丝全部或部分成苍白色，妨碍鱼的呼吸，鳃盖张开，病鱼游动缓慢，直至死亡。指环虫病是一种常见的多发性疾病。它主要以虫卵和幼虫传播，流行于春末夏初，大量寄生可使鱼苗鱼种大批死亡。对鲢、鳙、草鱼危害最大。DB32/T1735-20112图1指环虫诊断程序表观病鱼解剖鳃皮肤鳍制片镜检10×10确诊为指环虫确诊为非指环虫非优势种鳃上有50只以上、或低倍显微镜下发现一个视野中有5个以上时，可确诊为指环虫病数量达不到计数标准的优势种出报告DB32/T1735-201135操作步骤5.1样品的收集和处理对有症状的水生动物，挑选3-5尾，至少不低于2尾的濒死个体；对无症状的水生动物，按GB/T18088—2000的规定，随机取一定数量的个体。对样品先进行目检，确定病变部位，然后取鳃、皮肤、鳍等病变组织制片。5.2制片用剪刀或解剖刀、镊子取病症的部位，同一部位分别制成两个玻片，标上组织名称。5.3确诊优势种1、头器；2、眼点；3、头腺；4、咽；5、交接器；6、贮精囊；7、前列腺；8、输精管；9、睾丸；10、卵巢；11、卵黄腺；12、卵壳腺；13、卵模；14、输卵管；15、在子宫内成熟的卵；16、子宫；17、阴道孔；18阴道管；19受精囊；20、肠支；21、后吸器；（a.边缘小钩；b.联结片；c.中央大钩）。图2指环虫之构造（整体、幼虫及卵）DB32/T1735-20114将制好的玻片分别于显微镜低倍镜（10×10）下观察，根据所见的优势寄生虫种，见虫体扁平,大小为(0.192～0.529)mm×(0.072～0.136)mm，具四个眼点，２对头器。肠支在体末端相连成环，后固着器上有１对中央大钩，中央大钩具１对三角形的附加片（副片），联结片长片状，辅助片Ｔ形，后吸器具７对边缘小钩，则确定为指环虫。只要有一片中有单种寄生虫出现80％以上，可定为寄生虫优势种。5.4确诊指环虫病在低倍镜的视野下，指环虫在5个以上或者有一片鳃上的指环虫数量达50个以上的确定为指环虫病。5.5结果确认上述结果如果为指环虫病，不复查，报告为指环虫病。若不是指环虫病再复查，结果仍然如此，则报告为非指环虫病。