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ICS65.020.20DB32B22备案号：28246-2010江苏省地方标准DB32/T1602—2010小菜蛾对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性检测技术规程点滴法TechnologicalSpecificationforDectecingPyrethroidInsecticidesResistanceinPlutellaxylostella（L.）toPolyesterbytopicalapplication2010-06-25发布2010-08-25实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T1602—2010前言本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编写。本标准由江苏省农药检定所提出。本标准由江苏太湖地区农业科学研究所和江苏省农药检定所起草。本标准主要起草人：张青、沈迎春、邓金花、顾俊荣。DB32/T1602—20101小菜蛾对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性检测技术规程点滴法1范围本标准规定了用点滴法检测小菜蛾[Plutellaxylostella(L.)]对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性检测的操作规程。本标准采用的点滴法适用于对小菜蛾具有强触杀作用的拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。NY/T1667.1~1667.8-2008农药登记管理术语3仪器设备可控温的温室（25±1℃）、控温控光光照培养箱、微量点滴器或毛细管点滴器（经标定，0.04μL～0.1μL）、电子天平、高压灭菌锅、微量移液器、量筒、白瓷盆、试管、养虫笼、镊子、毛笔、培养皿、卷纸、玻棒、脱脂棉、一次性塑料杯等。4试虫的采集和饲养4.1试虫采集小菜蛾发生期，抗性监测种群在待监测地点采集，从田间采集小菜蛾老熟幼虫或蛹携回室内。为确保试虫的代表性，同一监测点从10个样点进行采集，采用平行跳跃式取样，两相邻点相距50m，每株菜采集1～2头，每样点采集50头，合计每监测点采集500头。4.2试虫的饲养4.2.1寄主准备饲养小菜蛾的寄主一般选用甘蓝。将甘蓝种子漂洗干净，浸泡6～7h再冲洗滤干，用75%百菌清500倍液浸泡40min进行消毒，再用清水冲洗干净,滤干,然后在塑料盘中撒播甘蓝种子。塑料盘中营养土厚度不超过塑料盘高度的2/3,用喷壶淋水至饱和；待幼苗长至4～5片叶,将甘蓝幼苗移入直径15cm的塑料钵。甘蓝苗长成6～8片叶时,即可放入养虫室供小菜蛾取食。4.2.2试虫的饲养将小菜蛾蛹放入成虫饲养笼中(直径10cm,长40cm),笼四周以孔径198μm的纱网包围,笼内挂一个饱含5%蜂蜜水的脱脂棉球,供成虫补充营养,笼底铺一层盆栽甘蓝苗,将待羽化的蛹放入笼内,用甘蓝苗诱成虫产卵。每日定时收取卵叶置甘蓝苗上,卵孵出后让其自然发育。待甘蓝苗快被吃光时,用靠接法更换甘蓝苗,并及时补充营养土中水分。室内饲养的F1-F2代用于检测。DB32/T1602—201025抗药性监测5.1供试药剂拟除虫菊酯类试验药剂采用原药(母药)，并注明通用名、含量、生产厂家。溶剂用分析纯丙酮等合适的有机溶剂。5.2药剂配制药剂用丙酮等合适的有机溶剂溶解稀释，按照等比的方法设置5～7个系列质量浓度（m/v）。5.3药剂处理用标定好的毛细管或微量点滴器将药剂的丙酮溶液点滴于3龄幼虫前胸背板处，将点滴后的试虫转入放有甘蓝叶的直径90mm培养皿中，底部放湿润的滤纸保湿。根据预备试验结果，抗性监测种群和敏感种群均按等比设5～7个浓度，每个浓度设4个重复，每个重复10头虫，以分析纯丙酮作对照，处理后试虫放置于光照培养箱内，温度保持在25℃±1，相对湿度70%,光照强度为2000lx,光暗比为14h∶10h。24h后检查死亡率。调查时以用毛笔轻触虫体,试虫不动或不能正常爬行为死虫标准。6数据统计与分析6.1计算方法根据调查数据，计算各处理的校正死亡率，单位为百分率（%）。按公式（1）和（2）计算，计算结果均保留到小数点后两位：1001×=NKP…………………………………（1）式中:P1——死亡率；K——表示死亡虫数；N——表示处理总虫数。1001002×−−=PPPPt……………………………………（2）式中:P2——校正死亡率；Pc——处理死亡率；P0——空白对照死亡率。若对照死亡率5%，无需校正；对照死亡率在5%～20%之间，应按公式（2）进行校正；对照死亡率20%，试验需重做。6.2统计分析用统计分析系统（SAS）、数据处理系统（DPS）等软件进行几率值统计分析，计算抗性监测种群和敏感种群的LC50及其95%置信限。并由此计算抗性倍数（K）。抗性倍数=抗性监测种群LC50值/敏感品系LC50值，进行比较的LC50值为不同种群同一龄期试虫对同种药剂的LC50值。DB32/T1602—201036.3抗性分级和评价按抗性倍数进行抗性水平分级，害虫对杀虫剂抗性水平划分评价标准如下：K＜3为敏感；3.1≤K﹤5倍为敏感性下降；5.1≤K﹤10倍为低水平抗性；10≤K﹤40倍为中水平抗性；40.1≤K﹤160倍为高水平抗性；K≥160倍为极高水平抗性。7结果根据统计结果进行抗性分析评价，写出抗性监测报告，并列出原始数据。