HJ 775-2015 水质 蛔虫卵的测定 沉淀集卵法

中华人民共和国国家环境保护标准HJ775-2015水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法WaterqualityAscaridovadeterminationNaturesedimentationmethod（发布稿）本电子版为发布稿。请以中国环境科学出版社出版的正式标准文本为准。2015-12-04发布2016-01-01实施发布环境保护部目次前言.............................................................................................................................................ⅱ1适用范围...................................................................................................................................12规范性引用文件.......................................................................................................................13方法原理...................................................................................................................................14试剂和材料...............................................................................................................................15仪器和设备...............................................................................................................................16样品...........................................................................................................................................27分析步骤...................................................................................................................................28结果计算与表示.......................................................................................................................39精密度.......................................................................................................................................410质量保证和质量控制...............................................................................................................411废物处理...................................................................................................................................412注意事项...................................................................................................................................4附录A（资料性附录）硝酸钠水中溶解度、离心机离心力及转速计算公式..........................5附录B（资料性附录）蛔虫卵的鉴定.........................................................................................6附录C（资料性附录）蛔虫卵配制样品的制备.........................................................................8前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护环境，保障人体健康，规范水中蛔虫卵的测定方法，制定本标准。本标准规定了地表水和废水中蛔虫卵测定的沉淀集卵法。本标准为首次发布。本标准的附录A～附录C为资料性附录。本标准由环境保护部科技标准司组织制订。本标准主要起草单位：常州市环境监测中心。本标准验证单位：上海市环境监测中心、江苏省环境监测中心、浙江省环境监测中心、苏州市环境监测中心、徐州市环境监测中心站和泰州市环境监测中心站。本标准环境保护部2015年12月4日批准。本标准自2016年1月1日起实施。本标准由环境保护部解释。1水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法1适用范围本标准规定了测定水中蛔虫卵的沉淀集卵法。本标准适用于地表水和废水中蛔虫卵的测定。当取样体积为10L时，本方法的检出限为5个/10L。2规范性引用文件本标准内容引用了下列文件或其中的条款。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。HJ/T91地表水和污水监测技术规范3方法原理沉淀集卵法主要通过样品浓缩、杂质分离、镜检计数等环节对水中蛔虫卵进行测定。用60目筛网过滤去除样品中较大的杂质，利用蛔虫卵比重大于水和易于沉淀的特性过夜沉淀浓缩水样，用虹吸的方法弃去上清液，用表面活性剂吐温80作为残液及沉淀转移时的清洗剂，进一步离心浓缩转移的剩余物，收集到的浓缩物用乙酸-乙酸钠缓冲液混匀，控制溶液pH值，获得最佳亲水-亲脂平衡，加入乙酸乙酯吸收水中的脂肪类杂质，使蛔虫卵更易下沉。再次离心浓缩样品并弃去上部脂肪杂质层及缓冲液层，获得的含卵沉淀层用饱和硝酸钠溶液混匀，于计数框中静置漂浮后镜检，即可测得水样中蛔虫卵的数量。4试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂，实验用水为新制备的蒸馏水或去离子水。4.1乙酸乙酯（C4H8O2）。4.2乙酸-乙酸钠缓冲液：pH=4.5。称取15.0g三水合乙酸钠（CH3COONa·3H2O），溶于约800ml实验用水中，加入3.6ml乙酸（CH3COOH）调节pH值至4.5，用实验用水定容至1000ml。此溶液保质期为30d。4.3吐温80溶液：φ（C24H44O6）=1‰。移取1ml吐温80（Tween80），用实验用水稀释定容至1000ml，临用现配。4.4饱和硝酸钠（NaNO3）溶液。称取略多于实验环境温度对应溶解度的硝酸钠（NaNO3），充分溶解于100g实验用水中，用滤纸滤去残渣，临用现配。硝酸钠在不同温度下的溶解度见附录A。5仪器和设备除非另有说明，分析时均使用符合国家标准A级玻璃量器。25.1显微镜：物镜4×、10×倍，目镜10×倍。5.2冰箱：0℃～4℃。5.3水平转子离心机：带50ml螺口尖底离心管，离心力1000g以上。5.4漩涡混匀器。5.5筛网：60目，׎250μm。5.6不锈钢开口直壁容器：10L。5.7开口直壁量筒：1000ml。5.8虹吸管。5.9洗瓶。5.10螺口尖底离心管：50ml。5.11一次性巴氏滴管：3ml、10ml。5.12微量移液器：1000μl。5.13定量计数框：1ml（网格）、5ml（S型）定量计数框。6样品按HJ/T91中对一般污染物采样的要求，用10L以上容积的塑料桶采样。采样前需用样品荡洗塑料桶，采集样品量应≥10L，常温下运回实验室，立即进行过滤（7.1）和沉淀（7.2）。7分析步骤7.1过滤充分摇匀样品，转入不锈钢开口直壁容器（5.6）至10L刻度。如样品中含有草梗、纸渣等较大杂质，需将样品用筛网（5.5）过滤，并用吐温80溶液（4.3）清洗筛网（5.5）及杂质，洗液并入过滤后的10L样品中。7.2沉淀上述样品（7.1）在15℃～25℃室温下静置过夜沉淀12h～24h，用虹吸管（5.8）小心吸取并弃去上清液，避免扰动，保留1L含沉淀物的样品，转入1000ml开口直壁量筒（5.7），分别用50ml吐温80溶液（4.3）彻底清洗不锈钢开口直壁容器3次，洗液并入开口直壁量筒（5.7）。在15℃～25℃室温下再次静置过夜沉淀12h～24h，用虹吸管（5.8）吸取并弃去上清液，避免扰动，保留90ml～100ml含沉淀物的样品。注1：若样品中蛔虫卵浓度在10倍检出限以上（50个/10L），采样时，可只采总量不小于1L的样品，取1L水样直接进行第二步的量筒沉淀浓缩。当样品中含有草梗、纸渣等较大杂质，同样应先将样品用筛网（5.5）过滤，并用吐温80溶液（4.3）清洗筛网及杂质，洗液并入1L样品中沉淀。7.3离心沉淀浓缩后的样品（7.2）小心转移至3个螺口尖底离心管（5.10），分别用15ml吐温80溶液（4.3）彻底清洗开口直壁量筒3次，洗液均匀并入3个螺口尖底离心管。以1000g的离心力（离心机转速计算见附录A）离心15min，用巴氏滴管（5.11）小心吸取并弃去上清液，少量留之，避免带出沉淀。用少量吐温80溶液（4.3）将3个离心管中的沉淀进行悬浮，将沉淀量少的2个离心管中的悬浮液并入沉淀量最多的一个离心管中；分别用3ml～5ml吐温80溶液彻底清洗被转移悬3浮液的2个离心管，每支清洗3次，确保没有沉淀被丢弃，洗液并入沉淀量最多的离心管。以1000g的离心力离心15min，用巴氏滴管（5.11）小心吸取并弃去上清液，少量留之，避免带出沉淀。7.4脂类杂质分离去除用与离心后沉淀（7.3）等体积的乙酸-乙酸钠缓冲液（4.2）对沉淀进行悬浮（即：离心后沉淀体积为2ml，加入2ml缓冲液）。如果离心后沉淀体积不足2ml，加入缓冲液至4ml。以确保用乙酸乙酯（4.1）浸提后，沉淀上方有足够体积的缓冲液，便于脂类杂质层完全倾出，且避免蛔虫卵沉淀层的丢失。加入2倍离心后沉淀（7.3）体积的乙酸乙酯（4.1），用涡旋混匀器（5.4）完全混合。以1000g的离心力离心15min，样品被分为清晰的三层。所有的非脂肪物质、重碎片，包括蛔虫卵、幼虫和原生动物在底层；中间层是缓冲液层；脂肪和其他脂溶性物质在上方形成黑而厚的一层。将上层和中间层液体平稳倾出弃去，记录底层沉淀体积。如有必要，可用细针在离心管壁四周对上层的脂肪层进行松动。7.5镜检加入5倍底层沉淀（7.4）体积的饱和硝酸钠溶液（4.4），对分离去除脂类杂质后的含卵底层沉淀进行悬浮。该悬浮液可置于0℃～4℃冰箱（5.2）冷藏保存，备检，于1周内检测完毕，检测时需将其静置至室温。充分摇匀悬浮液，将其转入定量计数框（5.13），静置5min，在显微镜下计数，直至全部悬浮液镜检完成。分别用1ml饱和硝酸钠溶液（4.4）充分洗涤镜检完的离心管3次，将洗液转入定量计数框（5.13），按以上步骤镜检。所有检测到的蛔虫卵全部计数。镜检时，需保持环境条件的稳定，无震动和风扰，缓移计数框，自上而下“U”型逐列计数。蛔虫卵鉴定