WS∕T 617-2018 天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度参考测量程序

中华人民共和国国家卫生健康委员会发布CS11.020C50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T617—2018天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度参考测量程序Referenceprocedureforthemeasurementofcatalyticactivityconcentrationofaspartateaminotransferase2018-08-20发布2019-03-01实施WS/T617—2018I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语和定义........................................................................14缩略语............................................................................35测量原理和方法....................................................................36测量前试剂准备....................................................................47测量前仪器准备....................................................................88测量前采样和样品准备.............................................................119测量过程.........................................................................1210测量结果处理.....................................................................1511结果报告........................................................................1812分析可靠性......................................................................1813质量保证........................................................................19附录A（资料性附录）试剂详细信息表.................................................21附录B（资料性附录）测定酶储存溶液中LD催化活性浓度................................23附录C（资料性附录）测定酶储存溶液中MD催化活性浓度................................26附录D（资料性附录）不同温度下溶液的pH值..........................................29附录E（资料性附录）ASTIFCC37℃参考测量程序与30℃参考测量程序的比较.............31参考文献............................................................................33WS/T617—2018II前言本标准按照GB/T1.1─2009给出的规则起草。本标准起草单位：中国医学科学院北京协和医院、南通大学附属医院、北京医院。本标准主要起草人：齐志宏、王惠民、赵芳、邸茜、宋耀虹、马嵘。WS/T617—20181天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度参考测量程序1范围本标准规定了在临床医学应用中，测量天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度的参考测量程序。本标准主要适用于参考实验室，作为天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测量的溯源，也可作为与酶催化活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源，可供有关认可监督管理单位及质量管理部门应用。此参考测量程序可用于我国临床常规方法测量结果的溯源。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ISO15193体外诊断器具-生物源样本中量的测量-参考测量程序的表述3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1实验室样品laboratorysample准备送到实验室或实验室接收的用于测定的原始样品或原始样品的分样品。3.2分析样品analyticalsample自实验室样本制备的、可从中取出分析部分的样品。注：在取出分析部分之前，分析样品可经过各种处理。3.3分析部分analyticalportion从分析样品中取出的用于实际测量和观察的物质部分。注：如果不需预处理，分析部分直接从原始样品或实验室样品中取出。某些情况下，需将分析部分溶解成分析溶液再上机测定。3.4WS/T617—20182分析溶液analyticalsolution将分析部分溶解在气体、液体或固体中而制备的溶液，溶解过程中可以有反应发生或无反应发生。3.5(某一物质系统的)基质matrix(ofamaterialsystem)一个物质系统中除被分析物之外的所有成分。3.6参考测量程序referencemeasurementprocedure参考程序referenceprocedure在校准或参考物质定值时，为提供测量结果所采用的测量程序，它用于评价由同类量的其他测量程序获得的被测量的量值的测量正确度。3.7测量系统的灵敏度sensitivityofameasuringsystem灵敏度sensitivity测量系统的示值变化除以相应的被测定值变化所得的商。注1：测量系统的灵敏度可能与被测量的量值有关。注2：所考虑的被测量值的变化必须大于测量系统的分辨力。3.8分析特异性analyticalspecificity测量程序只测量可测量的量的能力。3.9分析干扰analyticalinterference由一个影响量引起的系统测量误差，该影响量自身在测量系统中不产生信号，但它会引起示值的增高或降低。3.10影响量influencequantity被测量以外的可影响测量结果的量。3.11检出限detectionlimit；limitofdetectionWS/T617—20183由给定测量程序获得的测得值，其声称的物质成分不存在的误判概率为，声称物质成分存在的误判概率为。注1：国际理论和应用化学联合会（IUPAC）推荐和的默认值为0.05。注2：有时使用缩写词LOD。注3：不要用术语“灵敏度”表示“检出限”。3.12校准品calibrator用于校准的测量标准。4缩略语下列缩略语适用于本文件。AST：天门冬氨酸氨基转移酶(AspartateAminotransferase）GUM：测量不确定度表达指南（GuidetotheexpressionofUncertaintyinMeasurement）IFCC：国际临床化学与检验医学联合会（InternationalFederationofClinicalChemistryandLaboratoryMedicine）LD：乳酸脱氢酶(LactateDehydrogenase)MD：苹果酸脱氢酶(MalateDehydrogenase）NAD：氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β-Nicotinamide-Adenine-Dinucleotide,oxidizedform）NADH：还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β-Nicotinamide-Adenine-Dinucleotide,reducedform）P-5-P：5′-磷酸吡哆醛（Pyridoxal-5-Phosphoricacid）QUAM：化学测量中不确定度的评定(QuantifyingUncertaintyInAnalyticalMeasurement)SOP：标准操作程序(StandardOperationProcedure)5测量原理和方法本参考测量程序采用偶联反应，反应式如下：L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸AST草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH+H+MDL-苹果酸+NAD+在339nm下，监测NADH的氧化速率，吸光度的下降速率与AST催化活性浓度呈正比。WS/T617—201846测量前试剂准备6.1试剂列表将所用试剂按表1列出。表1试剂列表分类系统名称通用名称,缩略语试剂三羟甲基氨基甲烷TrisL-天门冬氨酸无α-酮戊二酸，二钠盐，二水合物无β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原型，二钠盐还原辅酶I,NADH乳酸脱氢酶LD苹果酸脱氢酶MD叠氮钠无盐酸无氢氧化钠无氯化钠无牛血清白蛋白，FractionV无5′-磷酸吡哆醛，一水合物P-5-P丙酮酸一钠盐无草酰乙酸无溶剂质量与双蒸水类似的高纯度水（电导率＜2μS·cm-1，pH6～7，硅酸盐﹤0.1mg·L-1）无参考物质JCTLM和/或国家批准的参考物质无质控物质常规系统校准品无指示剂无无6.2试剂原料信息按表2填写试剂原料详细信息。表2试剂原料详细信息试剂系统名__通用名____信息指标内容CAS，CARN注册号生产厂家货号/批号分子式相对分子质量纯度特定合格要求（如有）WS/T617—20185危险度贮存要求失效期AST测定所用每个试剂原料详细信息见附录A。宜使用最高纯度的试剂。试剂的质量应由供应商提供分析证明。如果怀疑某一种化学物质中含有影响AST催化活性的不纯物，应进行进一步的检测，例如，比较不同厂家和不同批号的产品。建议使用在对比试验中已经鉴定或认可的试剂。以下三种试剂需要注意安全：盐酸、氢氧化钠和叠氮钠对人体有伤害作用，操作人员应经过专门培训，严格遵守操作规程，根据需要可以佩戴自吸过滤式防毒面具（全面罩）或头罩型电动送风过滤式防尘呼吸器，戴化学安全防护眼镜，穿橡胶耐酸碱材料制成的防护服以及戴橡胶耐酸碱手套等，做好安全防护工作。6.3试剂溶液配制6.3.1一般要求制备溶液时各成分给出的质量是指100％含量。如果化学物质的含量低于100％[例如y(%)]，则应用因子：Fcontent＝100／y，计算出与给出质量相当的某化学物质的质量。溶液的制备应使用质量与双蒸水类似的高纯度水（电导率＜2μS·cm-1，pH6～7，硅酸盐＜0.1mg·L-1)。每次称重的扩展不确定度（k＝2）(包括物质纯度的不确定度)（正态分布），应≤1.5％。6.3.2溶液1称量1.17gTris、4.02g天门冬氨酸（游离酸）、0.052g叠氮钠，将上述物质按以下步骤处理：——溶在约80mL水中；——加4.2mL～4.4mL5.00mol·L-1的氢氧化钠溶液；——搅拌直到试剂完全溶解；——混合液的pH值应比pH靶值低（约0.3pH～0.9pH）；——在37℃用2mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH到7.65；——转移至100mL容量瓶中；——将容量瓶和水平衡至20℃；——加水（20℃）至容量瓶的刻度线。最终配制的溶液中Tris浓度为96.92mmol·L-1，天门冬氨酸浓度为302.4mmol·L-1，叠氮钠浓度为8.00mmol·L-1。该溶液2℃～8℃稳定性为3个月。注:加水