碱性磷酸酶-PAS联合染色液

碱性磷酸酶-PAS联合染色液简介：碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2～9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。1946年McManus最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖。过碘酸(高碘酸)是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基使之变为二醛，醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化。LeageneALP-PAS联合染色液不仅能够显示碱性磷酸酶活性位点和糖原等物质，亦能区分二者。冰冻切片及石蜡切片均可。组成：自备材料：1、蒸馏水2、温箱或水浴锅操作步骤：1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水，冰冻切片直接入水。2、冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，固定。3、切片入ALP孵育液(阴性对照切片入ALP对照液)，置于温箱。冰冻切片孵育，石蜡切编号名称DE00026×50mlStorage试剂(A):ALP孵育液50ml4℃避光试剂(B):硝酸钴溶液50mlRT试剂(C):ALP硫化溶液2×1mlRT避光试剂(D):高碘酸溶液50ml4℃避光试剂(E):Schiff试剂50ml4℃避光试剂(F):亚硫酸溶液50mlRT使用说明书1份片孵育。流水洗后入蒸馏水。4、入硝酸钴溶液，置于温箱染色。流水洗后入蒸馏水。5、上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂(C)用蒸馏水稀释即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育。6、流水洗后入蒸馏水。7、入高碘酸溶液，室温氧化。蒸馏水换洗。8、入Schiff试剂，置于温箱染色。9、亚硫酸溶液:蒸馏水按一定的比例配制亚硫酸工作液，清洗，入蒸馏水。10、冰冻切片直接用甘油明胶封片，石蜡切片脱水。常规透明，中性树胶封片。染色结果：碱性磷酸酶活性部位黑色PAS阳性物质紫红色阴性对照(可选)：1、ALP对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP对照液，其余同上。结果为阴性。2、(备选方案)切片进入ALP孵育液前，可先经碘液和硫代硫酸钠溶液各3min，充分水洗后再进行孵育等步骤，可用此法作阴性对照。注意事项：1、本染色液适用于冰冻切片、石蜡切片。染色过程中注意控制高碘酸处理的时间，否则容易褪色。2、碱性磷酸酶显色后，经高碘酸应特别小心，严格控制时间，否则褪色。3、ALP孵育液、ALP硫化液易失效，最好分成小分储存，一经开启立即使用。4、ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。5、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。有效期：6个月有效。相关：编号名称DC0032Masson三色染色液PT0001BCA蛋白定量试剂盒