蛋白银染试剂盒

蛋白银染试剂盒简介：蛋白银染试剂盒(ProteinSilverStainKit)是一种比较快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。其优点还在于：1、操作简单、快速；2、可用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质朴检测；3、目的条带清晰；4、不含甲醇。ProteinSilverStainKit与ProteinFastSilverStainKit相比，前者检测灵敏度更高，尤其是在检测小分子量蛋白质的时候，但后者操作速度更快。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：自备材料：1、水平摇床或侧摆摇床2、去离子水(超纯)、乙醇、冰乙酸操作步骤(仅供参考)：1、准备工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程均应在摇床上持续摇动进行，摇床转速控制。提前配制固定液，固定液A按无水乙醇:冰乙酸:去离子水配制，固定液B按无水乙醇:冰乙酸:去离子水配制。2、水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中，摇床上清洗。3、固定：弃液，取凝胶放入固定液A中，在摇床上室温摇动；取凝胶放入固定液B中，在摇床上室温摇动2h至过夜；取凝胶放入去离子水中，在摇床上室温摇动；取凝胶放入1×SilverFixatonbuffer中，在摇床上室温摇动。(1×SilverFixatonbuffer，即取Silver编号名称PT002520TStorage试剂(A):SilverFixatonbuffer(5×)100mlRT避光试剂(B):SililverStainSensitizer(5×)100mlRT避光试剂(C):SilverStain2×250mlRT避光试剂(D):SilverStainEnhancer(25×)2×10mlRT避光使用说明书1份Fixatonbuffer(5×)5ml加入到去离子水中，混匀，即1×SilverFixatonbuffer，一般应24h内用完。)4、水洗：弃固定液，取凝胶放入去离子水中清洗。6、增敏：弃液。配制银染增敏工作液，即取SilverStainSensitizer5×)5ml加入到去离子水中，混匀，即1×SilverStainSensitizer，一般应2h内用完。室温下用1×SilverStainSensitizer孵育凝胶。立即用去离子水清洗凝胶。7、银染：配制银染工作液，即取SilverStainEnhancerl加入到SilverStain中，混匀，即得银染工作液，一般应2h内用完。取凝胶入银染工作液，在摇床上室温摇动。8、水洗：弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶4次，每次4min。9、显影：配制银染显影工作液，即取SilverStainDeveloper(5×)5ml加入到去离子水中，混匀，即1×SilverStainDeveloper，一般应30min内用完。清洗凝胶后，立即置于1×SilverStainDeveloper中，室温孵育，直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀，继续显影，亦可延长，如果显影效果不佳，可重新更换1×SilverStainDeveloper继续显影。10、迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度、背景染色。立即加入银染终止液，摇床上摇动，以终止显色反应。(配制银染终止液，即取SilverStainStopBuffer(10×)加入到去离子水中，混匀，即1×SilverStainStopBuffer，一般应24h内用完。)11、保存：弃终止液，加入去离子水，摇床上摇动，弃液。短期保存于新鲜去离子水，长期保存可以制备干胶。注意事项：1、背景过深：①显色时间过长；②洗涤不充分；③凝胶中残留物质未去除干净；④去离子水的纯度过低。2、蛋白条带较浅：①蛋白的半胱氨酸含量过低；②银染后水洗时间过长；③蛋白量较低；④固定后的洗涤时间不够，导致乙酸残留。3、凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹：①凝胶没有被充分浸没，应加入足量溶液；②容器没有清洗干净；③凝胶接触金属物质；④指纹或其他压迹。4、本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。有效期：3个月有效。