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补骨脂素和异补骨脂素的提取分离和结构鉴定摘要：补骨脂为中医治疗脾肾阳虚的传统补虚药物，其新型的生物活性已逐渐受到重视并被开发使用，同时对补骨脂所含活性成分的研究也逐步深入，为临床治疗提供新药物提供可靠依据。本文就有关补骨脂的研究作一综述。关键词：补骨脂异补骨脂结构提取分离结构鉴定中药补骨脂始载于开宝本草，为豆科植物补骨脂的干燥成熟果实，别名破故纸、黑故子、胡故子等，其性温，味辛，具补肾助阳之功效。在传统的中医临床上主治肾虚冷泻，阳萎，小便频数，腰膝冷痛，虚寒喘咳等病症。据现代研究表明，补骨脂还具有抗肿瘤，抗菌，抗骨质疏松，雌激素作用以及治疗白癜风等多重药理活性。补骨脂所具有的这些药理活性与其所含的活性成分有着密切联系。因此，近年来；国内外学者对补骨脂化学成分的提取分离及相关药理作用进行了多方面的研究，并取得一些新成果，为进一步开发利用补骨脂奠定了基础。补骨脂的植物来源、品种、科属及分布补骨脂来源为豆科植物补骨脂PsoraleacorylifoliaL.的果实。属于补骨脂属，蝶形花科，约130种，分布于热带和亚热带地区，我国有补骨脂P.corylifoliaFranch.1种，产西南部，种子入药。分布于山西、陕西、安徽、浙江、江西、河南、湖北、广东、四川、贵州、云南。临床应用和药理活性研究概况1药理作用研究进展1.1皮肤药理研究补骨脂素(PSO)口服后,增加皮肤对紫外线的敏感性,经UVA照射,可与表皮角质层细胞的DNA形成光加合物,抑制DNA合成,减低表皮细胞的过速增生,其用于银屑病治疗的疗效已为临床所肯定。PSO为一光敏感物质,PSO和8MOP均能促进皮肤黑色素的合成,并使之沉积于皮下。95%乙醇的补骨脂提取物对酪氨酸酶有明显的激活作用,而酪氨酸酶是人体内黑素合成的关键酶,因此认为补骨脂系通过提高酪氨酸酶的活性使黑色素的生成速度和数量增加。1.2抗癌活性研究有研究表明补骨脂具有抗癌活性,实验表明补骨脂素对KB细胞、Hela细胞、小鼠肉瘤、艾氏腹水癌等有抑制作用。该类物质能促进非特异性细胞进入分化,干扰细胞核有丝分裂,抑制DNA的合成,并与DNA形成交联,打开DNA双螺旋结构的氢键。。1.3对骨质的影响和性激素样作用补骨脂提取物能促进骨再生和重建。临床应用及现代药理研究结果都表明补骨脂确有强筋骨,防治骨质疏松的作用。采用体外成骨细胞试验法,将补骨脂的系统溶剂提取物作用于新生大鼠颅骨成骨细胞,通过检测成骨细胞的增殖率及碱性磷酸酶(ALP)的含量,筛选出补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性及其增殖。药理研究表明补骨脂具有雌激素样作用,每天给雌鼠补骨脂干粉0.35克或0.175克(混合在饮食中),可增加阴道角化,此作用为可逆性。0.35克使成熟雌鼠阴道开放,持续喂33~77天,能伤害成年雌鼠生育力,但改变正常饮食后一周即可恢复。喂雄鼠46天却无影响。1.4对心血管系统的作用补骨脂中的黄酮类成分对心血管有一定的作用。补骨脂乙素具有强心和扩张冠状动脉的作用。10-5–10-8mol/L的补骨脂乙素就能明显扩张大鼠、豚鼠、兔、猫等动物的离体心脏和冠状动脉,其作用强度是凯林(Khellin)的4倍,能对抗脑垂体后叶素对冠状动脉的收缩,但对总外周血管阻力影响不大;能加强豚鼠、大白鼠的心肌收缩力;能兴奋蛙心,并对抗乳酸引起的蛙心心力衰竭。犬静注20mg/kg时,冠脉血流量增加80%以上,冠脉阻力明显下降,每搏心输出量及作功量均有增加,而心肌耗氧量增加不明显,心肌呼吸商有所提高。补骨脂乙素对家兔实验性缓慢心律有明显提高作用,其效果可与阿托品相当。补骨脂甲素开环生成的查耳酮也有扩张冠脉的作用。1.5对免疫功能的影响实验研究证明了补骨脂提取液能明显地提高二倍体成纤维细胞(2BS细胞)的生长增殖速度,提高小鼠腹腔巨嗜细胞的吞噬功能。连续灌补骨脂煎剂7d,结果补骨脂煎剂和补骨脂黄酮注射液均能增加小白鼠免疫器官的脏器指数,对免疫功能有增强作用,其中,注射液组效果更明显。补骨脂多糖对机体特异性免疫有促进作用。用绵羊红细胞(SRBC)和卵清蛋白为抗原给小鼠注射后,灌服补骨脂多糖,结果显示,给药组SRBC抗体和卵清抗体生成水平,IL2、IFN1激发水平均显著高于对照组,提示补骨脂多糖对正常小鼠机体免疫有增强作用。临床应用进展1.治疗子宫出血补骨脂有较明显的缩短出血时间、减少出血量的效果,同时对子宫有明显的收缩作用。止血效果在90%以上。2.治疗银屑病100%补骨脂溶液2.5~3.0m,l肌内注射,每天1次,或皲裂者加用抗组胺药物或局部用药,治愈率24.2%。3.治疗白癜风以50%补骨脂注射液5ml肌内注射,每天1次,外用补骨脂液涂抹局部白斑处。本品含有补骨脂素,有使色素新生的作用。4．治疗秃发5%补骨脂注射液5ml肌内注射,每天1次,同时紫外照射治疗。5．治疗指(趾)甲癣用补骨脂配合等量菟丝子制成的注射液5ml肌内注射,每天1次,可连续数月。治愈率50%。综上所述,补骨脂的临床应用较为广泛,涉及到皮肤科、妇科各个领域。近年来对其补肾填精作用亦有新的开发,对其治疗骨质疏松亦有新的制剂面世。（二）主要化学成分的结构及性质补骨脂为豆科植物补骨脂PsoraleacorylifoliaL.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯（补骨脂素）、异补骨脂内酯（异补骨脂素）和补骨脂次素等。其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。1.补骨脂素(psoralen)又称补骨脂内酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。2.异补骨脂素(isopsoralen)分子式C11H6O3，分子量186.16。无色针状结晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。OOOOOO补骨脂素异补骨脂素3.补骨脂乙素(isobavachalcone)又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。分子式C20H20O4，分子量324.36。黄色片状结晶（甲醇-水），mp.166～167℃。4.补骨脂甲素(coryfolin)又称补骨脂黄酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。无色针状结晶，mp.191～192℃。CH3H3CHOOHOOHOOOHHOCH3H3C补骨脂乙素补骨脂甲素提取分离方法：浸提法的详细步骤设计称取补骨脂粗粉200g，用l500ml的乙醇冷浸提取4攻(600ml，300ml，300ml，300ml)，过滤，合并滤液，水浴加热，回收乙醇至700ml，放置过夜，抽滤，弃去滤液，得浸膏。取浸膏置烧瓶中，加甲醇50ml和适量活性炭，回流15min，趁热抽滤。滤液浓缩至小体积，放置，释出沉淀抽滤，沉淀用甲醇淋洗。乙醇浓度选择采用75%乙醇提取的产率较高，但因补骨脂中大量脂溶性物质被溶解，使提取液旅缩后过于粘稠，过滤较困难，增加实验难度，杂质多而沉淀外观差。采用50%乙醇提取，产率略低，但其它二方面较佳。特别是实验难度低，在生产上有较大优势，因此采用5O%乙醇提取优于用75%乙醇。鉴定1.外观：两种方法得到的晶体都呈白色针晶，且在uV灯下显蓝色荧光。2.异羟肟酸铁反应：分别取上述晶体各少许，加乙醇1ml溶解．加6d盐酸羟胺的饱和乙醇液混匀后加人6dKoH的饱和乙醇液，水浴加热10rain，冷却，用5HC1使呈酸性(pH6左右)沿壁滴10FeCl3溶液30s后出现紫红色(反应阳性)。3.mp：50%晶I：136．6～138．6℃50%晶II：162．8～163．8℃75%晶I：136．9～138．8℃75%晶II：l62．8～l64．0℃4.TLc：照薄层层析方法(《中国药典~1995版I部附录)试验，分别取晶I，晶II，和补骨脂索对照品和异补骨脂索对照品的乙酸己酯溶液各，5ul点样于同一硅腔G薄层板上(硅腔G加3倍量0.5％CMC-Na溶液铺顿，晾干后105℃活化3Omin)，以石油醚(60～90℃)一己酸乙酯(2：1)上行展开10cm，取出晾干，置254nmUV灯下观察，相同位置的斑点显相同颜色的荧光。参考文献：参考文献：【1】曹金一，刘京晶，黄文华，郭宝林.补骨脂药理作用与临床应用研究进展.中药药理与临床,2008,24(6)【2】张红莲,王雅楠,王建华.补骨脂的化学成分及药理活性研究概况。天然产物研究与开发,2010,（22）【3】刘志林,张相年,赵树进,周日笑.补骨脂中补骨脂素的提取及纯化。第一军医大学学报,2005,25(6)【4】罗志冬，郭晏华.补骨脂有效成分提取工艺的考察.中国新药杂志,2007,16(9)【5】余得平.不同浓度乙醇提取补骨脂的比较.时珍国医国药,2009,11(7)【6】吴阿富,徐爱仁,黄欣欣,汪大海.中药补骨脂薄层分离条件的选择.浙江大学学报(医学版),2001【7】李晶晶，鹿秀梅，李发美，熊志立补骨脂的化学及代谢成分的超高效液相色谱串联质谱法鉴定时珍国医国药2010年第21卷第9期【8】刘自力施静补骨脂临床研究进展中国民族民间医药2008年第13卷第2期