JJG 705-2014 液相色谱仪检定规程

司aaJJG705-20145h1-óI液相色谱仪LiquidChromatographs2014-02-14发布2014-08-14实施国家质量监督检验检夜总局发布JJG705-2014液相色谱仪检定规程LiquidChromatographs飞-o-0.。-0·。-dp句，血。…4ω吨。12c白川一咛白45。如-。。叫57HOO。、FMω7unc白Gi咛白山穿白白J叫什白白利卜C-P·O-o-o-0·。-hVerificationRegulationof归口单位:全国物理化学计量技术委员会起草单位:中国计量科学研究院本规程委托全国物理化学计量技术委员会负责解释JJG705-2014本规程起草人:何雅娟(中国计量科学研究院〉何海红(中国计量科学研究院〉赵敏(中国计量科学研究院)JJG705-2014引JJG705-2014((液相色谱仪》的编写是以JJF1001-2011((通用计量术语及定义》、JJF1002-2010((国家计量检定规程编写规则》为基础和依据，对JJG705-2002《液相色谱仪》进行修订的。与JJG705-2002((液相色谱仪》相比，除编辑性修改外，本规程主要技术内容有如下变化tE一--增加了蒸发光散射检测器;一一删掉了检测器换挡误差的检定项目;一一荧光检测器检定用标准物质改为茶-甲醇溶液;一一示差折光率检测器检定用标准物质改为甲醇中胆固醇溶液;一一一整机定性重复性由原来的1.5%修改为1.0%;一一检测器基线噪声和漂移采集时间由原来的1h改为30min。JJG705的历次版本发布情况为2一-JJG795-2002;一一-JJG705-19900'刊JJG705-2014目录E11111222333334川江MMM川口回试•.式测度式格能密格录t…υ.性相〉记咒uu试的动页定buu测片流内检…统……缸……能光下(仪……求…系制…和……性滤度书谱……要统……能要观路控件目果期她器温证色…能系箱器性术外电具条项结周谱色同定相……文…性液温测机技器器器定定定定色单不检液…围用述量输柱检整用仪仪量检检检检ABCDE范引概计通计1234121234录录录录录引1234ιιιι5116ιιιι附附附附附IJJG705-2014液相色谱仪检定规程范围本规程适用于配有紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、示差折光率检测器和蒸发光散射检测器的液相色谱仪的首次检定、后续检定和使用中检查。引用文件2荧光分光光度计JJG537-2006概述液相色谱仪〈以下简称仪器)是由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统等部分组成的分析仪器，图l是其组成的方框图。液相色谱仪根据样品中各组分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附等特性的差异，由流动相将样品带人色谱柱中进行分离，经检测器检测并通过数据处理系统记录色谱图，依据各组分的保留时间和响应值(峰面积或峰高〉进行定性和定量分析。3数据处理系统废液收集分离系统A川川川川川川}ι输液系统液相色谱仪组成方框图图1l计量性能要求4.1输液系统4.1.1输液管路接口紧密牢固，在规定的压力范围内无泄漏。4.1.2泵流量设定值误差S5和流量稳定性SR应符合表1的要求。4.1.3梯度最大允许误差Gc:士3%。4JJG705-2014表1泵流量设定值误差S5和稳定性SR的指标要求泵流量设定值/(rnL/rnin)o.2~0.50.6~1.0大于1.0测量次数333流动相收集时间/rnin20~1010~55泵流量设定值最大允许误差5s::f:5%士3%士2%泵流量稳定性5R3%2%2%注:①最大流量的设定值可根据用户使用情况而定;②对特殊的、流量小的仪器，流量的设定可根据用户使用情况选大、中、小三个流量，流动相的收集时间则根据情况适当缩短或延长.』、4.2柱温箱一一←4.4整机性能仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示，指标要求见表3。表3液相色谱仪整机性能指标要求?紫外-可见光检测器二极管阵列检测器荧光检测器示差折光率检测器蒸发光散射检测器定性重复性运1.0%ζ1.0%ζ1.0%三三1.5%定量重复性~3.0%ζ3.0%三三3.0%运4.0%25通用技术要求5.1仪器外观JJG705-2014仪器上应有仪器名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌，国产仪器应有制造计量器具许可证标志。5.2仪器电路系统仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。6计量器具控制计量器具控制包括:首次检定、后续检定和使用中检查。6.1检定条件6.1.1环境条件6.1.1.1检定室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，通风良好。6.1.1.2室温(15......，30).C，检定过程中温度变化不超过3.C(对示差折光率检测器，室温变化不超过2.C)，室内相对湿度20%'85%。6.1.1.3仪器应平稳地放在工作台上，周围无强烈机械振动和电磁干扰源，仪器接地良好。6.1.1.4电源电压为(220+22)V，频率为(50士0.5)Hz。6.1.2检定设备6.1.2.1秒表:最小分度值不大于0.1s。6.1.2.2分析天平:最大称量不小于100g，最小分度值不大于1mg。6.1.2.3数字温度计:测量范围为(0......，100).C，最大允许误差为+0.3.C。以上器具需经计量检定合格。6.1.3有证标准物质:荼-甲醇溶液标准物质:认定值为1.00X10-4g/mL，扩展不确定度小于4%,k=2;荼-甲醇溶液标准物质:认定值为1.00X10-7g/mL，扩展不确定度小于4%,k=2;甲醇中胆固醇溶液标准物质:认定值为200μg/mL，扩展不确定度小于2.0%,k=2;甲醇中胆固醇溶液标准物质:认定值为5.0μg/mL，扩展不确定度小于5.0%,k=2;胆固醇纯度标准物质:认定值为99.7%，扩展不确定度小于0.1%，k=2.6.1.4其他要求6.1.4.1检定用试剂:色谱级甲醇，纯水，分析纯的丙翻和异丙醇，紫外分光光度计溶液标准物质等。6.1.4.2注射器10μL，50μL和10mL各一支。36.1.4.3容量瓶50mL,10个。6.2检定项目和检定方法6.2.1检定项目检定项目见表4。JJG705-2014表4检定项目一览表序号检定项目首次检定输液系统:泵耐压+①泵流量设定值误差5s+1泵流量稳定性5R十梯度误差Gi②+柱温箱:温度设定值误差ðTs②+2温度稳定性Tc②+检测器:基线噪声+基线漂移+3最小检测浓度十波长示值误差和重复性③+线性范围+4整机:定性、定量重复性+注:①+表示应检定项目一表示可不检定项目;②无梯度洗脱装置和无柱温箱的仪器，此项不检定;后续检定使用中检查一①++十+++++十③紫外-可见光、二极管阵列和荧光检测器检定此项目，其他检测器不检定此项目。6.2.2检定方法6.2.2.1通用技术要求按5.1和5.2的要求，目视、手动检查。6.2.2.2输液系统a)泵耐压将仪器各部分连接好，以100%甲醇(或纯水〉为流动相，流量为0.2mL/min,按说明书启动仪器，压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接口处是否有湿迹。卸下色谱柱，堵住泵出口端(压力传感器以下)，使压力达到最大允许值的90%，保持5min应无泄漏。b)泵流量设定值误差S5和流量稳定性SR按表1的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先称重过的洁净容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按公式(3)计算流量实测值Fm按公式(1)、公式(2)计算S5和SR。每一设定流量，重复测量3次。4JJG705-2014SFm-F~x100%s=~-.,x100%式中:Fm一一同一设定流量3次测量值的算术平均值，mL/min;Fs一一流量设定值，mL/min。F-FSR=muFmmtn×100%式中:Fmax--同一设定流量3次测量值的最大值，mL/min;Fmin--同一设定流量3次测量值的最小值，mL/minoFm=(W2-W1)/(队.t)式中:Fm一一流量实测值，mL/minW2一一容量瓶+流动相的质量，g;W1一一容量瓶的质量，g;(1)(2)(3)Pt一一实验温度下流动相的密度，g/c时，(不同温度下流动相的密度参见附录C);t一一收集流动相的时间mlnoc)梯度误差由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序〈梯度程序可参照表5)，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酣的水溶液。将输液泵和检测器连接(不接色谱柱)，开机后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出B溶剂经由5段阶梯从0%变到100%的梯度变化曲线，如图2所示。求出由B溶剂变化所产生的每一段阶梯对应的响应信号值的变化值Li。重复测量2次，按公式(4)计算每一段阶梯对应的响应信号值的变化平均值Li;按公式(5)计算五段阶梯响应信号值的总平均值Li;按公式(6)计算每一段的梯度误差Gi，取Gi最大者作为仪器的梯度误差。式中:-y-(L1i-Ll(i_l))+(L2i-LW-1))'一2Li----第i段阶梯响应信号值的平均值;L1i一一第t段阶梯第1组响应信号值;L1(i-1)一一第(i-l)段阶梯第1组响应信号值;L2i一一第i段阶梯第2组响应信号值;L川-1)一一第(i-l)段阶梯第2组响应信号值。式中:2:LiL;=二三一Li一-5段阶梯响应信号值的总平均值;(4)(5)5JJG705一2014n一一梯度的阶梯数，η=5。L,-LG.=一二x100%L(6)式中:Gi一一第t段阶梯的梯度误差。注:当i为1(i-1=0)时，第(i-l)阶梯响应信号值为B溶剂为0%时的响应信号值。表5梯度程序设置A溶剂B溶剂序号(纯水〉(0.1%丙酣水溶液)1100%0%280%20%360%40%440%60%520%80%60%100%7100%0%输出信号O%A0%8时间图2梯度误差检定示意图6.2.2.3柱温箱温度设定值误差ðTs和柱箱温度稳定性TcJJG705一2014将数字温度计探头固定在柱温箱内与色谱柱相同的部位，选择35'C和45'C(也可根据用户使用温度设定〉进行检定。按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录1次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为柱温箱温度设定值误差ð.Ts，7次读数中最大值与最小值之差为柱温箱温度稳定性Tc。6.2.2.4紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器的性能a)波长示值误差和重复性将检测器和数据处理系统连接好，通电预热稳定后，用注射器将纯水注人检测池内进行冲洗后，充满检测池。待检测器示值稳定后，在(235士5)nm、(257士5)nm、(313土5)nm和(350土5)nm的波长下将示值回零，然后再用注射器将紫外分光光度计溶液标准物质(参考波长为235nm,257nm,313nm和350nm)从检测器人口注入样品池中冲洗，并将样品池充满至示值稳定。将检测器波长调到低于参考波长5nm处(例如检定257nm时，检测器波长先调到252nm)，改变检测器波长，每(5---10)s改变1nm，记录每个波长下的吸收值(吸收值变化的示意图见图3)，最大或最小吸收值对应的波长与参考波长之差为波长示值误差。每个波长重复测量3次，其中最大值与最小值之差为波长重复性。AU257波长/nrn图3波长示值误差检定中吸收值变化示意图有吸光值显示的检测器，改变波长时可直接读出吸光值，其最大(或最小)吸光值对应的波长与参考波长之差为波长示值误差。有波长扫描功能的仪器可画出标准溶液的光谱曲线，其波峰(或波谷〉对应的波长与参考波长之差为波长示值误差。对于有内量标准滤光片可进行自检的仪器可直接采用其测量数据。对改变波长有自动回零功能的紫外-可见光检测器，可采用连续进样的方法检定波长示值误差，具体做法是:用一节空管代替色谱柱将液路连通，以水做流动相，流量为(0.5---1.0)mL/min，采用步进进样方法，例如检定257nm时，从252nm开始到262nm，每2min改变1n