项目：维生素B12注射液含量测定

维生素B12注射液含量测定22一、任务依据【中国药典】2015版二部P1236维生素B12注射液本品为维生素B12的灭菌水溶液。含维生素B12（C63H88CoN14O14P）应为标示量的90.0%~110.0%【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定量稀释成每1mL中约含维生素B1225μg的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在361nm的波长处测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数（）为207计算，即得。1%1cmE33二、任务分解1.实验原理紫外-可见分光光度计紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范围内的的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的光学分析方法。定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。44二、任务分解2.计算计算稀释倍数根据维生素B12注射液【含量测定】中内容要求描述，“用水定量稀释成每1mL中约含维生素B1225μg的溶液”。【规格】（1）1ml：0.05mg（2）1ml：0.1mg（3）1ml：0.25mg（4）1ml：0.5mg（5）1ml：1mg（6）2ml：0.5mg5510mlmg025.0mlmg25.0ml1ug25ml2mg5.0供试品溶液浓度样品溶液浓度稀释倍数以下均以规格2ml：0.5mg为例样品溶液：实际使用的维生素B12注射液供试品溶液：按要求配制的每1mL中约含维生素B1225μg的溶液。66二、任务分解3.制定计划(1)填写所需溶液、药品及仪器药品名称规格数量用途及可用量维生素B12注射液2ml：0.5mg/2盒2盒药品，1人水纯化水500ml，1人仪器清洗、溶剂表1维生素B12注射液含量测定所需药品77二、任务分解3.制定计划(1)填写所需溶液、药品及仪器表2维生素B12注射液含量测定所需仪器仪器名称规格型号数量用途紫外-可见分光光度计北京通用T61台含量测定石英比色皿石英1套含量测定移液管10ml1支溶液配制容量瓶100ml2支溶液配制洗瓶500ml1支洗涤、稀释小烧杯100ml1个稀释胶头滴管2ml1支定容大烧杯500ml1个废液杯洗耳球塑料1个移液88二、任务分解99二、任务分解3.制定计划(3)操作步骤测定步骤操作内容数据记录1.仪器检定1.杂散光的检查2.波长准确度、吸光度准确度检定。3.杂散光的检查定期检查2.配制供试品溶液精密量取一定体积定量稀释成规定浓度的溶液。供试品的名称、批号、生产厂家。3.比色皿配对使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配对使用，否则必须加以校正。1010二、任务分解3.制定计划(3)操作步骤测定步骤操作内容数据记录4.溶剂空白吸收将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收光度溶剂空白吸收=5.确定测定波长除另有规定外，在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的吸光度，吸光度最大的波长应在规定的波长±2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。测定波长=nm6.吸光度测定1.将参比液、测定液装于吸收池中。2.以参比液为空白，测定吸光度，记录。A1=A2=7.记录与计算1.计算供试品的百分含量%2.计算平均百分含量%标示量%=平均百分含量%8.结果与判定1.将测得的含量与药典规定值比较，得出结论。2.相对偏差均应在±0.5%以内。相对偏差=结论：1111三、实验实施（一）.使用前仪器的校正和检定1.波长准确度1.1波长准确度的允差范围紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差，紫外区为±1nm，500nm处±2nm。P55-56（通则0401）1212三、实验实施（一）.使用前仪器的校正和检定1.2波长准确度检定方法1.用低压汞灯检定2.用仪器固有的氘灯检定3.用氧化钬玻璃检定4.用高氯酸钬溶液检定P55-56（通则0401）1313三、实验实施（一）.使用前仪器的校正和检定2.吸光度准确度精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀释至1000ml，用配对的1cm石英池，以0.005mol/L硫酸液为空白，在235、257、313、350nm分别测定吸光度，然后换算成，测得值应符合表1中规定的允差范围。P56（通则0401）1%1cmE1414三、实验实施（一）.使用前仪器的校正和检定表1分光光度法允差范围波长吸收强度吸收系数允差范围235最小124.5123.0～126.0257最大144.0142.8～146.2313最小48.647.0～50.3350最大106.6105.5～108.51%1cmEP56（通则0401）1515三、实验实施（一）.使用前仪器的校正和检定3.杂散光的检查可按表2所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表2中规定。表2杂散光的检查及限度试剂浓度（%，g/ml）测定用波长（nm）透光率（%）碘化钠1.002200.8亚硝酸钠5.003400.8P56（通则0401）1616三、实验实施（二）.供试品溶液的配制维生素B12注射液10.00ml100ml平行配制2份水17171.移液管使用三、实验实施1818三、实验实施1.移液管使用移液管、刻度吸管移液管的的拿持润洗1919三、实验实施1.移液管使用吸液调节液面放出液体2020配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时取容积一般不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。三、实验实施（二）.供试品溶液的配制P57-5821212.容量瓶的使用三、实验实施用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，加水至距标线约1cm处，等1～2分钟，使附在瓶颈内壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至弯液面下缘与标线相切，然后盖上瓶塞，左手用食指按住塞子，其余手指拿住瓶颈标线以上部分，右手指尖托住瓶底，将容量瓶倒转，使气泡上升到顶，使瓶振荡，正立后再次倒转进行振荡，如此反复15～20次以上，使瓶内溶液混合均匀。22222.容量瓶的使用三、实验实施容量瓶容量瓶的检漏转移初混定容2323三、实验实施（二）.供试品溶液的配制加水至距标线约1cm处，等1～2分钟，使附在瓶颈内壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至弯液面下缘与标线相切2424三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用1.实验仪器的准备开机自检2525三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用1开机自检结束，按Enter键进入仪器界面按Start键进入测量界面1.实验仪器的准备进入测量界面按GOTOλ键输入测量波长，输入数字“361”按Enter键确认输入232626三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用2.吸收池（比色皿）的配对检查清洗比色皿的操作装液擦拭放置2727三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用2.吸收池（比色皿）的配对检查取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装样品溶液的体积以池体积的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。2828三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用2.吸收池（比色皿）的配对检查比色皿的配对（测透光率）进入透光率测量界面透光率相差应在0.3%以下，否则必须加以校正值2929三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用2.吸收池（比色皿）的配对检查使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干，防尘保存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3：1V/V）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。P573030三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用3.溶剂空白吸收对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收光度，溶剂和吸收池的吸光度应符合表3规定。P57（通则0401）3131三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用3.溶剂空白吸收表3以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度的规定波长范围（nm）220～240241～250251～300300以上吸光度≤0.40≤0.20≤0.10≤0.05每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的同批溶剂。P57（通则0401）3232三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用3.溶剂空白吸收3333三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用3.溶剂空白吸收3434三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用4.确定测定波长123在给定波长±2nm处测样品吸光度，选择实际最大吸收波长测定波长是多少？3535三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用4.确定测定波长测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长加减2nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。P58（通则0401）3636三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用5.供试品溶液的吸光度值的测定3737三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用5.供试品溶液的吸光度值的测定关于皿差问题：由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。（通则0401）3838三、实验实施（三）.紫外-可见分光光度计的使用5.供试品溶液的吸光度值的测定供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸光度以在0.3～0.7之间为宜，吸光度读书在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度。P58（通则0401）3939三、实验实施（四）.实验数据的记录与计算1.公式%100b%%1cm1标供稀释倍数百分含量CEA4040三、实验实施（四）.实验数据的记录与计算2.原始数据记录表紫外－可见分光光度法：记录仪器型号，检查溶剂是否符合要求的数据，吸收池的配对情况，供试品与对照品的称量（平行试验各2份）及其溶解和稀释情况，核对供试品溶液的最大吸收峰波长是否正确，测定波长及其吸光度值（或附仪器自动打印记录），计算式及结果。必要时应记录仪器的波长校正情况。4141检品名称检验日期批号规格完成日期生产单位或产地包装检验者供样单位有效期核对者检验项目检品数量检品余量检验依据紫外分光光度仪：电子天平：溶剂：溶剂空白吸收：＝供试品溶液的制备方法：照紫外－可见分光光度法，在nm的波长处测定吸光度（标准规定检测波长：nm）。W样（V样）：计算公式：标准规定：结论：1%1cmE424243434444三、实验实施（五）.实验结果与检验报告1.有效数字：与药典标准中规定限度的有效位数相一致百分含量可以多保留一位，平均含量均保留位数应与标准规定一致。2.数据有效性精密度相对偏差SD≤±0.5%3.结论：平均含量90.0%~110.0%符合规定＜90.0%或＞110.0%不符合规定P58P1236P5224545三、实验实施（五）.实验结果与检验报告检品名称检验日期批号规格完成日期生产单位或产地包装检验者供样单位有效期核对者检验依据检品数量检品余量检验项目标准规定检验结果【含量测定】结论：复核人：检验人：4646三、实验实施（六）.清场