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书书书!#$%&’’()*犌犅１８８６．９９—２０１５!#$%&’(!)*+ 犔α,-./犖（２，２，４，４012３345612）犇7./8（9:;=）２０１５０９２２?２０１６０３２２@A!#$%&’’(+,&-.,/012?书书书犌犅１８８６．９９—２０１５１ 食品安全国家标准食品添加剂 犔α天冬氨酰犖（２，２，４，４四甲基３硫化三亚甲基）犇丙氨酰胺（又名阿力甜）１ 范围本标准适用于食品添加剂Ｌα天冬氨酰犖（２，２，４，４四甲基３硫化三亚甲基）Ｄ丙氨酰胺（又名阿力甜）。２ 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量２．１ 化学名称Ｌα天冬氨酰犖（２，２，４，４四甲基３硫化三亚甲基）Ｄ丙氨酰胺２．２ 分子式Ｃ１４Ｈ２５Ｎ３Ｏ４Ｓ·２．５Ｈ２Ｏ２．３ 结构式２．４ 相对分子质量３７６．４７（按２００７年国际相对原子质量）３ 技术要求３．１ 感官要求感官要求应符合表１的规定。表１ 感官要求项 目要 求检验方法色泽白色状态结晶粉末气味无味或略有特殊性气味将样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽状态，嗅其气味犌犅１８８６．９９—２０１５２ ３．２ 理化指标理化指标应符合表２的规定。表２ 理化指标项 目指 标检验方法阿力甜含量（以干基计），狑／％９８．０～１０１．０附录Ａ中Ａ．３β异构体（以干基计），狑／％≤０．３附录Ａ中Ａ．３丙氨酸酰胺（以干基计），狑／％≤０．２附录Ａ中Ａ．３水分，狑／％１１～１３ＧＢ／Ｔ６２８３比旋光度α犿（２５℃，Ｄ）／［（°）·ｄｍ２·ｋｇ－１］＋４０～＋５０附录Ａ中Ａ．４灼烧残渣，狑／％≤１．０ＧＢ／Ｔ９７４１ａ铅（Ｐｂ）／（ｍｇ／ｋｇ）≤１．０ＧＢ５００９．１２ ａ灼烧温度为８００℃±２５℃。犌犅１８８６．９９—２０１５３ 附 录 犃检验方法犃．１ 一般规定本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和ＧＢ／Ｔ６６８２规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂和制品，在没有注明其他要求时均按ＧＢ／Ｔ６０１、ＧＢ／Ｔ６０２和ＧＢ／Ｔ６０３的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。犃．２ 鉴别试验犃．２．１ 溶解性易溶于水和乙醇。犃．２．２ 红外光谱图红外光谱图符合图Ｂ．１。犃．２．３ 狆犎５０ｇ／Ｌ样品溶液的ｐＨ为５．０～６．０。犃．２．４ 显色反应犃．２．４．１ 称取３００ｍｇ茚三酮加入１００ｍＬ正丁醇和２ｍＬ冰乙酸中配制成溶液，取此溶液５ｍＬ，加入１０ｍｇ样品，加热至缓慢回流，应出现亮蓝紫色。犃．２．４．２ 取５ｍＬ新鲜制备的犮（１５ＫＭｎＯ４）＝０．００１ｍｏｌ／Ｌ的高锰酸钾标准溶液，加１０ｍｇ样品并充分混合，溶液由紫色变成棕色。犃．３ 阿力甜（以干基计）含量、β异构体和丙氨酸酰胺的测定犃．３．１ 方法提要用反相离子对高效液相色谱测定法，在选定的工作条件下，通过色谱柱使样品溶液中各组分分离，用紫外吸收检测器检测，用外标法定量，计算样品中阿力甜、β异构体和丙氨酸酰胺的含量。犃．３．２ 试剂和材料犃．３．２．１ 甲醇。犃．３．２．２ 乙腈：色谱级，在２１０ｎｍ透光率大于９０％。犃．３．２．３ β异构体：标准样品。犃．３．２．４ 丙氨酸酰胺：标准样品。犃．３．２．５ 阿力甜：标准样品。犃．３．２．６ 缓冲溶液：称取０．６９ｇ磷酸一钠（一水合物）和４．３２ｇ１辛基硫酸钠，精确至０．０００１ｇ，置于犌犅１８８６．９９—２０１５４ １０００ｍＬ容量瓶中。加入２００ｍＬ水使其溶解，用磷酸调节ｐＨ至２．５，加水稀释至刻度。经孔径为０．２２μｍ微孔滤膜或相当的滤膜过滤。犃．３．３ 仪器和设备犃．３．３．１ 高效液相色谱系统（ＨＰＬＣ）。犃．３．３．２ 恒流泵。犃．３．３．３ 紫外吸收检测器。犃．３．４ 色谱分析条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表Ａ．１。表犃．１ 色谱柱和典型色谱操作条件Ｃ１８色谱柱１５ｃｍ×０．４ｃｍ柱温室温流动相附录Ａ中Ａ．３．５．１流动速度／（ｍＬ／ｍｉｎ）１．０检测器检测波长／ｎｍ２１７犃．３．５ 分析步骤犃．３．５．１ 流动相的制备准确量取乙腈和缓冲溶液，体积比为１∶３，充分混合。经真空脱气。犃．３．５．２ 标准工作溶液的制备犃．３．５．２．１ 标准溶液Ａ１：称取β异构体和丙氨酸酰胺各约２５ｍｇ，精确至０．０００１ｇ，移入５００ｍＬ容量瓶中。加５０ｍＬ甲醇使之溶解，用水稀释至刻度。存储于冰箱中。犃．３．５．２．２ 标准溶液Ａ２：移取１５ｍＬ±０．０２ｍＬ标准溶液Ａ１至５０ｍＬ容量瓶中，用水稀释至刻度。犃．３．５．２．３ 标准工作溶液Ｗ１：称取约５０ｍｇ阿力甜标准样品，精确至０．０００１ｇ，移入１０ｍＬ容量瓶中，加５ｍＬ标准溶液Ａ２，用水稀释至刻度。犃．３．５．２．４ 标准工作溶液Ｗ２：移取５ｍＬ±０．０２ｍＬ标准工作溶液Ｗ１至５０ｍＬ容量瓶中，用水稀释至刻度。犃．３．５．３ 试验溶液的制备犃．３．５．３．１ 试验溶液Ｓ１：称取约５０ｍｇ样品，精确至０．０００１ｇ，置于１０ｍＬ容量瓶中，用水稀释至刻度。犃．３．５．３．２ 试验溶液Ｓ２：移取５ｍＬ±０．０２ｍＬ试验溶液Ｓ１至５０ｍＬ容量瓶中，用水稀释至刻度。犃．３．５．４ 系统适应性试验按高效液相色谱操作规程开机预热，调节温度及流量，达到分析条件并基线平稳。重复３次分别注入１００μＬ标准工作溶液Ｗ１和标准工作溶液Ｗ２，β异构体、阿力甜和丙氨酸酰胺的近似保留时间如表Ａ．２所示。峰面积的变化系数（１００乘以标准偏差除以平均峰面积）不应超过２％。犌犅１８８６．９９—２０１５５ 表犃．２ 各组分的近似保留时间组分名称近似保留时间／ｍｉｎβ异构体６阿力甜１０丙氨酸酰胺１５ 注：本近似保留时间为１５ｃｍ×０．４ｃｍ色谱柱得到。如果使用其他色谱柱或长度不同，应调整流动相中乙腈的比例，以获得所需的保留时间。犃．３．５．５ 测定将流动相泵入色谱柱，至基线不再漂移。在系统适应性试验条件下分析标准工作溶液和试验溶液。分三次注入标准工作溶液Ｗ１，计算β异构体和丙氨酸酰胺的平均峰面积。分三次注入标准工作溶液Ｗ２，计算阿力甜的平均峰面积。分三次注入试验溶液Ｓ１，计算β异构体和丙氨酸酰胺的平均峰面积。分三次注入试验溶液Ｓ２，计算阿力甜的平均峰面积。犃．３．６ 结果计算阿力甜含量（以干基计）的质量分数狑１，按式（Ａ．１）计算：狑１＝犚Ａ×犠Ｓ×犘Ｓ犚Ｓ×犠Ａ×１００％…………………………（Ａ．１） 式中：犚Ａ———试验溶液Ｓ２中检出峰的响应值；犠Ｓ———阿力甜标准样品减去水分后的质量，单位为克（ｇ）；犘Ｓ———β异构体或丙氨酸酰胺标准样品的纯度，％；犚Ｓ———标准工作溶液Ｗ２中检出峰的响应值；犠Ａ———样品减去水分后的质量，单位为克（ｇ）。β异构体（以干基计）的质量分数狑２，按式（Ａ．２）计算：狑２＝犚Ａ×犠Ｓ×犘Ｓ×犇犉犚Ｓ×犠Ａ×１００％…………………………（Ａ．２） 式中：犚Ａ———试验溶液Ｓ１中检出峰的响应值；犠Ｓ———未除去水分的β异构体标准样品或丙氨酸酰胺标准样品的质量，单位为克（ｇ）；犘Ｓ———β异构体标准样品的纯度，％；犇犉———稀释因子，即０．００３；犚Ｓ———标准工作溶液Ｗ１中检出峰的响应值；犠Ａ———样品未除去水分的质量，单位为克（ｇ）。丙氨酸酰胺（以干基计）的质量分数狑３，按式（Ａ．３）计算：狑３＝犚Ａ×犠Ｓ×犘Ｓ×犇犉犚Ｓ×犠Ａ×１００％…………………………（Ａ．３） 式中：犚Ａ———试验溶液Ｓ１中检出峰的响应值；犠Ｓ———未除去水分的β异构体标准样或丙氨酸酰胺标准样的质量，单位为克（ｇ）；犌犅１８８６．９９—２０１５６ 犘Ｓ———β异构体标准样品的纯度，％；犇犉———稀释因子，即０．００３；犚Ｓ———标准工作溶液Ｗ１中检出峰的响应值；犠Ａ———样品未除去水分的质量，单位为克（ｇ）。犃．４ 比旋光度α犿（２５℃，犇）的测定犃．４．１ 称取１０ｇ样品，精确至０．００１ｇ，加水溶解并转移至１０００ｍＬ容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，测定温度为２５℃±０．５℃。比旋光度α犿（２５℃，Ｄ），以“（°）·ｄｍ２·ｋｇ－１”计，按式（Ａ．４）计算：α犿（２５℃，Ｄ）＝α犾×ρα…………………………（Ａ．４） 式中：α———测得的旋光角，单位为度（°）；犾———旋光管的长度，单位为分米（ｄｍ）；ρα———溶液中有效组分的质量浓度，单位为克每毫升（ｇ／ｍＬ）。犃．４．２ 其他按ＧＢ／Ｔ６１３进行。犌犅１８８６．９９—２０１５７ 附 录 犅阿力甜标准红外光谱图 食品添加剂阿力甜标准红外光谱图见图Ｂ．１。图犅．１ 阿力甜标准红外光谱图