GB 31660.6-2019 食品安全国家标准 动物性食品中5种α2-受体激动剂残留量的测定 液相

GB31660.6—20192019-09-06发布2020-04-01实施食品安全国家标准动物性食品中5种α2-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法Nationalfoodsafetystandard-Determinationoffivekindsofalpha-agonistsresiduesinanimalderivedfoodbyliquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod发布GB31660.6—2019I前言本标准系首次发布。GB31660.6—20191食品安全国家标准动物性食品中5种α2-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了动物性食品中5种α2-受体激动剂的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于猪肌肉、肝脏和肾脏组织及鸡肌肉和肝脏组织中替扎尼定、赛拉嗪、溴莫尼定、安普乐定和可乐定残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中残留的α2-受体激动剂，用碳酸钠缓冲溶液、乙酸乙酯提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。4试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.3甲醇（CH3OH）。4.1.4氨水（NH4OH）。4.1.5无水碳酸钠（Na2CO3）。4.1.6碳酸氢钠（NaHCO3）。4.1.7乙酸乙酯（CH3COOC2H5）。4.2溶液配制4.2.1碳酸钠溶液：取无水碳酸钠10.6g，用水溶解并稀释至100mL。4.2.2碳酸氢钠溶液：取碳酸氢钠8.4g，用水溶解并稀释至100mL。4.2.3碳酸钠缓冲溶液：取碳酸钠溶液90mL、碳酸氢钠溶液10mL，混匀，现用现配。4.2.4甲酸溶液（0.2％）：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至500mL。4.2.5甲酸-乙腈溶液：取0.2%甲酸溶液80mL，加乙腈20mL，混匀。4.2.6氨水甲醇溶液（5％）：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀释至100mL。4.3标准品盐酸替扎尼定（Tizanidinehydrochloride,C9H8ClN5S·HCl,CAS:64461-82-1）、盐酸赛拉嗪（XylazineHydrochloride,C12H16N2S,CAS:7361-61-7）、溴莫尼定（Brimonidine,C11H10BrN5,CAS:59803-98-4）、盐酸安普乐定（Apraclonidinehydrochloride,C9H10N4Cl2·HCl,GB31660.6—20192CAS:73218-79-8）和盐酸可乐定（Clonidinehydrochloride,C9H10Cl3N3,CAS:4205-91-8）：含量均≥98%。4.4标准溶液制备4.4.1标准贮备液：取盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准品各约10mg，精密称定，分别于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度均为1mg/mL的盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准贮备液。2～8℃保存，有效期6个月。4.4.2混合标准工作液：分别精密量取上述标准贮备液各1mL，于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液。于2～8℃保存，有效期1个月。4.4.3标准曲线制备：分别精密量取混合标准工作液适量，用甲酸-乙腈溶液稀释配制成浓度为0.5、1、10、50和100μg/L系列混合标准工作液，临用现配。4.5材料4.5.1固相萃取MCX柱：60mg/3mL，或相当者。4.5.2滤膜：有机相，0.22μm。5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源。5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。5.3均质机。5.4离心机。5.5涡旋振荡器。5.6旋转蒸发仪。5.7固相萃取装置。5.8鸡心瓶。5.9离心管：50mL。6试料的制备与保存6.1试料的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎并使均质。——取均质的供试样品，作为供试试料。——取均质的空白样品，作为空白试料。——取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2样品的保存-20℃以下保存。GB31660.6—201937测定步骤7.1提取取试料2g（准确至±20mg），于50mL离心管中，加碳酸钠缓冲液5mL，振荡混匀，加乙酸乙酯10mL，充分振荡，于8000r/min离心5min，取上清液于鸡心瓶中，下层溶液中加乙酸乙酯10mL重复提取一次，合并两次上清液。于55℃旋转蒸发至干，加甲酸-乙腈溶液4.0mL溶解残余物，备用。7.2净化MCX柱依次用甲醇、水各3mL活化。取备用液过柱，用水3mL、甲醇3mL分别淋洗，挤干，氨水甲醇溶液6mL洗脱，收集洗脱液，于60℃旋转蒸发至干，用甲酸-乙腈溶液1.0mL溶解残余物，滤过，液相色谱-串联质谱测定。7.3测定7.3.1色谱条件a）色谱柱：C18（100mm×3.0mm，粒径1.8μm），或相当者；b）柱温：30℃；c）进样量：10L；d）流速：0.3mL/min；e）流动相：A：乙腈；B：0.2％甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序时间minA：乙腈%B：0.2%甲酸溶液%0.010903.030704.030704.580205.580205.610907.3.2质谱条件a）离子源：电喷雾离子源；b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应监测；d）离子源温度：150℃；GB31660.6—20194e）脱溶剂温度：500℃；f）毛细管电压：3.0V；g）定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见表2。表25种α2受体激动剂类药物的质谱参数被测物名称定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV替扎尼定254.144.1254.144.13822254.1210.030赛拉嗪221.190.0221.190.03022221.1164.026溴莫尼定292.2170.2292.2212.34035292.2212.330安普乐定245.2174.2245.2174.24028245.2209.220可乐定230.0160.0230.0213.04334230.0213.0247.4测定法7.4.1定性测定在同样测试条件下，试样液中α2-受体激动剂的保留时间与标准工作液中相应α2-受体激动剂的保留时间之比，偏差在±5%以内，且检测到离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致，其允许偏差应符合表3要求。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度%＞5020～5010～20≤10允许的最大偏差%±20±25±30±507.4.2定量测定取试样溶液和相应的标准工作液，按外标法以峰面积定量，标准工作液及试样溶液中的α2受体激动剂类响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述条件下，α2受体激动剂标准溶液特征离子质量色谱图见附录A。7.5空白试验除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。8结果计算和表述试料中待测药物的残留量按式（1）计算：GB31660.6—20195mAVACXss…………………………………………………（1）式中：X——供试试料中相应的α2受体激动剂类药物残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；Cs——标准溶液中相应的α2受体激动剂类药物浓度，单位为微克每升（g/L）；A——试样溶液中相应的α2受体激动剂类药物的色谱峰面积；As——标准溶液中相应的α2受体激动剂类药物色谱峰面积；V——溶解残余物所用的溶液体积，单位为毫升（mL）；m——供试试料质量，单位为克（g）；计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度和精密度9.1灵敏度本方法的检测限为0.5μg/kg，定量限为1μg/kg。9.2准确度本方法在1～100μg/kg添加浓度水平上的回收率为60％～100％。9.3精密度本方法批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。GB31660.6—20196附录A（资料性附录）特征离子质量色谱图图A.110μg/Lα2受体激动剂类药物标准溶液特征离子质量色谱图1-赛拉嗪特征离子质量色谱图（221.190.0）2-可乐定特征离子质量色谱图（230.0213.0）3-替扎尼定特征离子质量色谱图（254.144.1）4-溴莫尼定特征离子质量色谱图（292.2212.3）5-安普乐定特征离子质量色谱图（245.2174.2）