GB 23200.117-2019 食品安全国家标准 植物源性食品中喹啉铜残留量的测定 高效液相色谱

食品安全国家标准植物源性食品中喹啉铜残留量的测定高效液相色谱法25中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ65.100G23200.117—2019Nationalfoodsafetystandard—Determinationofoxine-copperresidueinfoodsofplantorigin—HighperformanceliquidchromatographyGB20190815发布－－20200215－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会GB２３２００􀆰１１７—２０１９　　　食品安全国家标准植物源性食品中喹啉铜残留量的测定　高效液相色谱法１　范围本标准规定了植物源性食品中喹啉铜残留量的高效液相色谱测定方法.本标准适用于植物源性食品中喹啉铜残留量的测定.２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的应用文件,仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB２７６３食品安全国家标准　食品中农药最大残留限量GB/T６６８２分析实验室用水规格和试验方法３　原理试样中残留的喹啉铜,用１％草酸溶液提取,亲水亲脂平衡的水可浸润性的反相固相萃取柱净化,１％草酸水溶液复溶,用带有紫外检测器的高效液相色谱测定,外标法定量.４　试剂与材料除非另有说明,在分析中仅使用确认为色谱纯的试剂和符合GB/T６６８２规定的一级水.４􀆰１　试剂４􀆰１􀆰１　草酸(C２H２O４,CAS号:１４４－６２－７):分析纯.４􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH,CAS号:６７－５６－１).１􀆰２　溶液配制４􀆰２􀆰１　草酸溶液(１０g/L):称取１０g草酸加水溶解,用水定容至１L.４􀆰２􀆰２　氢氧化钠溶液(１mol/L):称取４g氢氧化钠,用水溶解并稀释至１００mL.４􀆰２􀆰３　淋洗液:甲醇－水溶液(１＋９,体积比):量取１００mL甲醇,加入到９００mL水中,混匀.４􀆰２􀆰４　洗脱液:草酸甲醇溶液(１０g/L),称取１g草酸,用１００mL甲醇溶解,混匀.４􀆰２􀆰５　流动相A:称取１􀆰２６g草酸,用水溶解并定容至１L,过０􀆰２２μm有机滤膜,现用现配.４􀆰３　标准品喹啉铜(C１８H１２N２O２Cu,CAS号:１０３８０－２８－６):纯度≥９８％.４􀆰４　标准溶液配制４􀆰４􀆰１　喹啉铜标准储备溶液(１００mg/L):称取１０mg(精确至０􀆰１mg)喹啉铜标准品于１００mL聚丙烯容量瓶中,用甲醇溶解后定容,作为标准储备溶液,－１８℃以下保存,有效期６个月.４􀆰４􀆰２　喹啉铜标准工作溶液(１０mg/L):吸取１０mL(精确至０􀆰１mL)喹啉铜标准储备溶液于１００mL聚丙烯容量瓶中,用甲醇定容,配制成标准工作溶液,０℃~５℃保存,有效期１个月.４􀆰５　材料４􀆰５􀆰１　有机滤膜:０􀆰２２μm.４􀆰５􀆰２　聚乙烯筛板:２０μm,１３mm,或者相当规格的滤膜.１GB２３２００􀆰１１７—２０１９４􀆰５􀆰３　亲水亲脂平衡的水可浸润性的反相固相萃取柱(HLB固相萃取柱):２００mg,６mL,或相当者.４􀆰５􀆰４　精密pH试纸:pH２􀆰７~４􀆰７.５　仪器和设备５􀆰１　高效液相色谱仪:配有紫外检测器或者二极管阵列检测器.５􀆰２　分析天平:感量０􀆰１mg和感量０􀆰０１g.５􀆰３　容量瓶:１L.５􀆰４　聚丙烯广口瓶:２５０mL.５􀆰５　聚丙烯容量瓶:１００mL.５􀆰６　聚丙烯试管:１０mL.５􀆰７　聚丙烯离心管:１５０mL.５􀆰８　振荡仪.５􀆰９　离心机:≥５０００r/min.５􀆰１０　氮吹仪.５􀆰１１　涡旋振荡合器.５􀆰１２　固相萃取装置.６　试样制备蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量,样品取样部位按GB２７６３的规定执行.对于个体较小的样品,取样后全部处理;对于个体较大的基本均匀样品,可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理;对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品,可在不同部位切取小片或截成小段后处理;取后的样品将其切碎,充分混匀,用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆.匀浆放入聚乙烯容器中.取谷类样品５００g,粉碎后使其全部可通过４２５μm的标准网筛,放入聚乙烯瓶或袋中.取油料作物、茶叶、坚果和香辛料样品各５００g,粉碎后充分混匀,放入聚乙烯瓶或袋中.植物油类样品搅拌均匀.试样于－２０℃~－１６℃条件下保存.７　分析步骤７􀆰１　提取７􀆰１􀆰１　蔬菜、水果、植物油和食用菌称取１０g(精确至０􀆰０１g)试样于２５０mL聚丙烯广口瓶中,加入９０mL草酸溶液(４􀆰２􀆰１),振荡提取１h,转移至离心管(５􀆰７),４０００r/min离心５min,上清液(植物油取水相层)转移至１００mL聚丙烯容量瓶,用草酸溶液定容至１００mL,准确移取１０mL提取液过聚乙烯筛板(４􀆰５􀆰２),然后用氢氧化钠溶液(４􀆰２􀆰２)调节pH至３,待净化.７􀆰１􀆰２　谷物、油料、坚果称取５g(精确至０􀆰０１g)试样于２５０mL聚丙烯广口瓶中,准确加入１００mL草酸溶液(４􀆰２􀆰１),振荡提取１h,转移至离心管(５􀆰７),４０００r/min离心５min,取１０mL上清液用氢氧化钠溶液(４􀆰２􀆰２)调节pH至３,４０００r/min离心５min,取上清液过聚乙烯筛板(４􀆰５􀆰２),待净化.７􀆰１􀆰３　茶叶和香辛料称取５g试样(精确至０􀆰０１g)于２５０mL聚丙烯广口瓶中,准确加入１００mL草酸溶液(４􀆰２􀆰１),振荡提取１h,转移至离心管(５􀆰７),４０００r/min离心５min,取１０mL上清液过聚乙烯筛板(４􀆰５􀆰２),用氢氧化钠溶液(４􀆰２􀆰２)调节pH值至３,待净化.７􀆰２　净化２GB２３２００􀆰１１７—２０１９HLB固相萃取柱(４􀆰５􀆰３)依次用５mL甲醇和５mL水活化,加入上述的待净化液,加入５mL淋洗液,舍弃流出液,抽干固相萃取柱,再加３mL洗脱液(４􀆰２􀆰４),收集洗脱液于１０mL聚丙烯试管中,置于５０℃水浴中氮气吹至近干,准确加１mL草酸溶液(４􀆰２􀆰１),涡旋１min溶解残渣,过０􀆰２２μm有机滤膜(４􀆰５􀆰１),供高效液相色谱测定.注:全过程应避免接触玻璃器皿.７􀆰３　测定７􀆰３􀆰１　仪器参考条件a)色谱柱:C１８,２５０mm×４􀆰６mm(内径),粒径５μm,或相当者;b)色谱柱温度:４０℃;c)检测波长:２５２nm;d)进样体积:２０μL;e)流动相:甲醇(４􀆰１􀆰２)和流动相A(４􀆰２􀆰５),流速及梯度洗脱程序见表１.表１　流动相及梯度洗脱程雪时间min流速mL/min甲醇V１流动相AV２０１􀆰０５９５１０１􀆰０５９５１３１􀆰０９０１０１４１􀆰０９０１０１６１􀆰０５９５２０１􀆰０５９５７􀆰３􀆰２　标准曲线的绘制用草酸溶液(４􀆰２􀆰１)将标准工作液逐级稀释得到质量浓度分别为０􀆰０５mg/L、０􀆰２mg/L、１mg/L、２mg/L和５mg/L的标准工作溶液,质量浓度由低至高依次进样测定,以峰面积和质量浓度计算,得到标准曲线回归方程.标准溶液色谱图参见附录A中的图A􀆰１.７􀆰３􀆰３　测定按照保留时间进行定性,样品与标准品保留时间的相对偏差不大于２％.待测样液中喹啉铜的响应值应在标准曲线范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析,外标法定量.７􀆰４　空白试验不加试样或仅加空白试样的空白试验应采用与试样测定完全相同的试剂、设备和步骤等进行.８　结果计算试料中的喹啉铜含量以质量分数ω计,单位以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(１)计算.ω?＝A×V１×V３As×V２×m×ρ(１)式中:A———样品溶液中喹啉铜的峰面积;As———标准溶液中喹啉铜的峰面积;r　———标准溶液中喹啉铜的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);V１　———提取溶剂总体积,单位为毫升(mL);V２　———吸取出用于检测用的提取溶液的体积,单位为毫升(mL);V３　———样品溶液定容体积,单位为毫升(mL);m　———试料的质量,单位为克(g).计算结果保留两位有效数字,当结果大于１mg/kg时,保留３位有效数字.９　精密度３GB２３２００􀆰１１７—２０１９９􀆰１　在重复性条件下,２次独立测定结果的绝对差不大于重复性限(r),重复性限(r)的数据为:a)含量为０􀆰１mg/kg时,重复性限(r)为０􀆰０１７３;b)含量为１mg/kg时,重复性限(r)为０􀆰１３８７;c)含量为２mg/kg时,重复性限(r)为０􀆰３３９３;d)含量为４mg/kg时,重复性限(r)为０􀆰６８４０.９􀆰２　在再现性条件下,２次独立测定结果的绝对差不大于再现性限(R),再现性限(R)的数据为:a)含量为０􀆰１mg/kg时,再现性限(R)为０􀆰０３９７;b)含量为１mg/kg时,再现性限(R)为０􀆰４３８３;c)含量为２mg/kg时,再现性限(R)为０􀆰６０７８;d)含量为４mg/kg时,再现性限(R)为１􀆰７４６９.１０　其他本标准方法定量限为０􀆰１mg/kg.４GB２３２００􀆰１１７—２０１９附　录　A(资料性附录)１mg/L喹啉铜标准品色谱图　图A􀆰１　１mg/L喹啉铜标准品色谱图５