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质参考件PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXX陨悦杂65.100G食品安全国家标准植物源性食品中二氯吡啶酸残留量的测定液相色谱-质谱联用法20180621发布原原20181221原原实施Nationalfoodsafetystandard要Determinationofclopyralidinfoodsofplantorigin要Liquidchromatography-massspectrometry23200.109—2018GB发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建—2018暋暋暋食品安全国家标准植物源性食品中草铵膦残留量的测定液相色谱质谱联用法1暋范围本标准规定了植物源性食品中草铵膦残留量的液相色谱质谱联用方法。本标准适用于植物源性食品中草铵膦残留量的测定。2暋规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB2763暋食品安全国家标准暋食品中农药最大残留限量GB/T6682暋分析实验室用水规格和试验方法3暋原理试样中的草铵膦用水和甲醇提取,再经固相材料分散净化处理,净化液与氯甲酸9芴基甲酯(9fluorenylmethylchloroformate)反应后生成的衍生物草铵膦FMOC(glufosinate灢FMOC)经液相色谱质谱联用法检测,外标法定量。4暋试剂和材料除另有说明外,在分析中仅使用分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。4灡1暋试剂4灡1灡1暋乙腈(CH3CN,CAS号:75058):色谱纯。4灡1灡2暋甲醇(CH3OH,CAS号:67561):色谱纯。4灡1灡3暋乙酸铵(CH3COONH4,CAS号:631618)。4灡1灡4暋硼酸钠(Na2B4O7·10H2O,CAS号:1303964)。4灡1灡5暋氯甲酸9芴基甲酯(C15H11ClO2,CAS号:28920436):纯度99灡0%,0曟~4曟保存。4灡2暋溶液配制4灡2灡1暋硼酸盐缓冲溶液(50灡0g/L,pH=9):称取5g硼酸钠(Na2B4O7·10H2O),用水溶解并定容至100mL。4灡2灡2暋氯甲酸9芴基甲酯乙腈溶液(10灡0g/L):称取1g氯甲酸9芴基甲酯,用乙腈溶解并定容至100mL。4灡2灡3暋乙酸铵水溶液(5mmol/L):称取0灡385g乙酸铵溶解于适量水中,用水定容至1000mL。4灡3暋标准品草铵膦(C5H18N3O4P,CAS号:77182822)标准品:纯度曒99灡0%。4灡4暋标准溶液配制4灡4灡1暋草铵膦标准储备溶液(100mg/L):准确称取草铵膦标准品10灡0mg于50mL烧杯中,用水溶解后转移到100mL容量瓶中,并用水定容。放置于0曟~4曟冰箱,有效期6个月。1GB23200灡108—20184灡4灡2暋草铵膦标准中间溶液(10mg/L):吸取5灡0mL草铵膦标准储备溶液于50mL容量瓶中,用水定容。放置于0曟~4曟冰箱,有效期1个月。4灡5暋材料4灡5灡1暋中性氧化铝(Al2O3,CAS号:1344281):0灡075mm~0灡15mm。4灡5灡2暋多壁碳纳米管(MWCNTs):粒径范围10nm~20nm;颗粒物长度5毺m~15毺m;比表面积(225暲25)m2/g。4灡5灡3暋滤膜:0灡22毺m,有机系。5暋仪器和设备5灡1暋液相色谱质谱联用仪:配有电喷雾离子源(ESI)。5灡2暋分析天平:感量0灡0001g、感量0灡01g。5灡3暋组织捣碎仪。5灡4暋离心机:转速不低于10000r/min。5灡5暋涡旋振荡器。5灡6暋恒温水浴锅。6暋试样制备蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量,样品取样部位按照GB2763的规定执行。对于个体较小的样品,取样后全部处理;对于个体较大的基本均匀样品,可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理;对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品,可在不同部位切取小片或截成小段后处理;取后的样品将其切碎,充分混匀,用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。取谷类样品500g,粉碎后使其全部可通过425毺m的标准网筛,放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料样品各500g,粉碎后充分混匀,放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀。试样于-18曟以下温度保存。7暋分析步骤7灡1暋提取7灡1灡1暋蔬菜、水果、食用菌类称取10g(精确至0灡01g)试样于50mL离心管中,参见附录A补水,然后加入10mL甲醇(4灡1灡2),涡旋振荡2min后,以3800r/min离心5min,待净化。7灡1灡2暋香辛料、茶叶类称取2g(精确至0灡01g)试样于50mL离心管中,参见附录A补水,然后加入10mL甲醇(4灡1灡2),涡旋振荡2min后,以3800r/min离心5min,待净化。7灡1灡3暋谷物、坚果、油料作物、植物油类称取5g(精确至0灡01g)试样于50mL离心管中,参见附录A补水,然后加入10mL甲醇(4灡1灡2),涡旋振荡2min后,以3800r/min离心5min,待净化。7灡2暋净化7灡2灡1暋蔬菜、水果、坚果、食用菌类、香辛料、茶叶类、谷物类准确吸取1mL提取液于称有5mg多壁碳纳米管(4灡5灡2)的2mL离心管中,涡旋1min后,以10000r/min离心3min,取上清液过0灡22毺m有机系滤膜(4灡5灡3)于另一个2mL离心管中,待衍生化。2GB23200灡108—20187灡2灡2暋油料作物类用吸量管准确吸取4mL提取液于5mL离心管中,置于-20曟的冰箱中冷冻过夜,然后取1mL上清液于称有5mg多壁碳纳米管(4灡5灡2)和50mg中性氧化铝(4灡5灡1)的2mL离心管中,涡旋1min后,以10000r/min离心3min,取上清液过0灡22毺m有机系滤膜(4灡5灡3)于另一个2mL离心管中,待衍生化。7灡2灡3暋植物油类准确吸取1mL提取液直接过0灡22毺m有机系滤膜(4灡5灡3)于另一个2mL离心管中,待衍生化。7灡3暋衍生化准确吸取0灡5mL净化后的提取液于2mL离心管中,加入0灡5mL硼酸盐缓冲溶液(4灡2灡1),混匀后再加入0灡5mL氯甲酸9芴基甲酯乙腈溶液(4灡2灡2),涡旋1min,于40曟水浴中衍生1h,衍生后以10000r/min离心1min,取上清液过0灡22毺m有机系滤膜(4灡5灡3),供检测。准确吸取草铵膦标准溶液(7灡5)0灡5mL按此方法同时进行衍生化。7灡4暋仪器参考条件7灡4灡1暋液相色谱参考条件a)暋色谱柱:C18,50mm暳2灡1mm,粒径1灡7毺m,或相当者;b)暋流动相:A为5mmol/L乙酸铵水溶液,B为乙腈,梯度洗脱程序见表1;c)暋流速:0灡2mL/min;d)暋柱温:室温;e)暋进样体积:5毺L。表1暋流动相及梯度洗脱程序(VA+VB)时间min流动相VA流动相VB095547030670306灡15958灡05958灡1955109557灡4灡2暋质谱参考条件a)暋离子源:电喷雾离子源;b)暋扫描方式:正离子扫描;c)暋喷雾电压:3500V;d)暋毛细管温度:320曟;e)暋气化温度:300曟;f)暋鞘气(N2):45psi;g)暋辅助气(N2):10psi;h)暋碰撞气氩气:1灡5mTorr;i)暋检测方式:多反应监测(MRM),多反应监测条件见表2。表2暋草铵膦衍生物glufosinate灢FMOC的保留时间和多反应监测(MRM)条件中文名称保留时间min定量离子对m/z定性离子对m/z碰撞能量V草铵膦衍生物5灡5404灡0/182灡0404灡0/182灡015404灡0/208灡0103GB23200灡108—20187灡5暋标准工作曲线将草铵膦标准中间溶液用空白提取液稀释成质量浓度为0灡01mg/L、0灡05mg/L、0灡1mg/L、0灡5mg/L和1mg/L的系列基质匹配标准溶液,经衍生化(7灡3)后按参考色谱和质谱条件测定。以草铵膦质量浓度为横坐标、其衍生物的峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数。基质匹配标准溶液应现配现用。7灡6暋定性及定量7灡6灡1暋保留时间被测试样中草铵膦衍生物glufosinate灢FMOC色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较,相对误差应在暲2灡5%之内。7灡6灡2暋定量离子、定性离子及子离子丰度比在相同实验条件下进行样品测定时,如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致,并且在扣除背景后的样品质谱图中,目标化合物的质谱定性离子必须出现,至少应包括1个母离子和2个子离子,而且同一检测批次,对同一化合物,样品中目标化合物的2个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比,其相对偏差不超过表3规定的范围,则可判断样品中存在草胺膦。表3暋定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分率相对离子丰度5020~50(含)10~20(含)曑10允许相对偏差暲20暲25暲30暲507灡7暋测定将基质匹配标准溶液和待测溶液经衍生化后分别注入液相色谱质谱联用仪中,以保留时间和定性离子定性,样品中草铵膦质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内,超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样,采用外标法定量。同时做空白试验。7灡8暋空白试验除不加试样外,按照7灡1~7灡7的规定进行平行操作。8暋结果计算试样中草铵膦的残留量以质量分数w计,单位以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算。w=A暳氀s暳vAs暳m(1)…………………………………………暋暋式中:w———试样中草铵膦残留量,单位为毫克每千克(mg/kg);A———试样溶液中草铵膦衍生物的峰面积;As———标准溶液中草铵膦衍生物的峰面积;氀s———基质匹配标准工作溶液中草铵膦的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);m———试样的质量,单位为克(g);v———提取溶液总体积,单位为毫升(mL),v=20。计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,保留2位有效数字。当结果大于1mg/kg时,保留3位有效数字。9暋精密度9灡1暋在重复性条件下,2次独立测定结果的绝对差不大于重复性限(r),重复性限(r)的数据为:4GB23200灡108—2018a)暋含量为0灡05mg/kg时,重复性限(r)为0灡01;b)暋含量为0灡1mg/kg时,重复性限(r)为0灡02;c)暋含量为0灡5mg/kg时,重复性限(r)为0灡09;d)暋含量为1mg/kg时,重复性限(r)为0灡19。9灡2暋在再现性条件下,2次独立测定结果的绝对差不大于再现性限(R),再现性限(R)的数据为:a)暋含量为0灡05mg/kg时,再现性限(R)为0灡02;b)暋含量为0灡1mg/kg时,再现性限(R)为0灡04;c)暋含量为0灡5mg/kg时,再现性限(R)为0灡16;d)暋含量为1mg/kg时,再现性限(R)为0灡24。10暋其他香辛料和茶叶的定量限为0灡1mg/kg,其他样品的定量限为0灡05mg/kg。11暋图谱11灡1暋5mg/L草铵膦衍生物标准溶液的全扫描质谱图见图1。!#!$%&%%’%%(%%)%%!#$!!%&’*+(+,%%,-%,(%,&%,!%,%##&,##$(,%#-!,%!%),.$(,&&,&!(,&&-,图1暋5mg/L草铵膦衍生物标准溶液的全扫描质谱图11灡2暋0灡01mg/L草铵膦衍生物标准溶液色谱图见图2。!#$!!#$%$&’()*+&$($+&’*&)+&!+!,(-&)&.-$-*--(--)-.-$-*--!%$-(*,$!./)!0123图2暋0灡01mg/L草铵膦衍生物标准溶液色谱图5GB23200灡108—2018附暋录暋A(资料性附录)所选基质含水量、称样量及提取前补