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质参考件PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXX陨悦杂65.100G食品安全国家标准植物源性食品中灭瘟素残留量的测定液相色谱-质谱联用法20180621发布原原20181221原原实施Nationalfoodsafetystandard要Determinationofblasticidin-Sresiduesinfoodsofplantorigin要Liquidchromatographytandemmassspectrometry23200.114—2018GB发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建—2018暋暋暋食品安全国家标准植物源性食品中灭瘟素残留量的测定液相色谱质谱联用法1暋范围本标准规定了植物源性食品中灭瘟素(blasticidin灢S)残留量的液相色谱质谱联用测定方法。本标准适用于植物源性食品中灭瘟素农药残留量的测定。2暋规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB2763暋食品安全国家标准暋食品中农药最大残留限量GB/T6682暋分析实验室用水规格和试验方法3暋原理试样中灭瘟素用乙酸水溶液萃取,再经净化处理后,采用液相色谱质谱联用法检测,外标法定量。4暋试剂和材料除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水。4灡1暋试剂4灡1灡1暋乙酸(CH3COOH,CAS号:64197):色谱纯。4灡1灡2暋乙腈(CH3CN,CAS号:75058):色谱纯。4灡1灡3暋甲酸(HCOOH,CAS号:64186):色谱纯。4灡1灡4暋甲酸铵(HCOONH2,CAS号:540692)。4灡1灡5暋甲醇(CH3OH,CAS号:67561):色谱纯。4灡2暋溶液配制4灡2灡1暋乙腈溶液(10+90,体积比):将100mL乙腈加入到900mL水中,混匀。4灡2灡2暋乙酸乙腈水溶液(2+10+88,体积比):将2mL乙酸、10mL乙腈加入到88mL水中,混匀。4灡2灡3暋甲酸甲醇溶液(10+90,体积比):将100mL甲酸加入到900mL甲醇中,混匀。4灡2灡4暋20mmoL/L甲酸铵水溶液(pH=3灡5):称取0灡385g乙酸铵溶解于适量水中,用水定容至1000mL,用乙酸调pH至3灡5。4灡3暋标准品灭瘟素标准品(C17H26N8O5,CAS号:2079007):纯度曒99灡6%。4灡4暋标准溶液配制4灡4灡1暋标准储备溶液(100mg/L):准确称取10mg(精确到0灡1mg)灭瘟素标准品于50mL烧杯中,用乙腈溶液(4灡2灡1)溶解并转移至100mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,混匀,-18曟冷冻避光保存,有效期3个月。1GB23200灡114—20184灡4灡2暋标准工作溶液(10mg/L):吸取1mL标准储备溶液,加到10mL容量瓶中,用乙腈溶液(4灡2灡1)定容,-18曟冷冻避光保存,有效期1个月。4灡5暋材料4灡5灡1暋固相萃取柱:弱阳离子交换固相萃取小柱(500mg/6mL,带羧基官能团的弱阳离子交换柱)。4灡5灡2暋滤膜:0灡22毺m,水系。4灡5灡3暋十八烷基键合硅胶(C18):40毺m~60毺m。5暋仪器和设备5灡1暋液相色谱串联质谱:配电喷雾离子源(ESI)。5灡2暋分析天平:感量0灡0001g和感量0灡01g。5灡3暋组织捣碎机。5灡4暋离心机:转速不低于10000r/min。5灡5暋旋转蒸发器。5灡6暋振荡混合器(1200次/min)。5灡7暋涡旋振荡器。6暋试样制备蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量,取样部位按GB2763的规定执行。对于个体较小的样品,取样后全部处理;对于个体较大的基本均匀样品,可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理;对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品,可在不同部位切取小片或截成小段处理;取后的样品将其切碎,充分混匀,用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。取谷类样品500g,粉碎后使其全部可通过425毺m的标准网筛,放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料样品各500g,粉碎后充分混匀,放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀。试样于-18曟以下温度条件下保存。7暋分析步骤7灡1暋提取7灡1灡1暋谷类、茶叶、香辛料、坚果、植物油称取5g(精确到0灡01g)试样于100mL离心管中,参见附录A补水,涡旋振荡2min。加入20mL乙酸乙腈水溶液(4灡2灡2),涡旋2min,振荡提取30min后,以8000r/min转速离心10min,倾出上清液,向装残渣的离心管中加入20mL乙酸乙腈水溶液(4灡2灡2)重复上述提取步骤2次,合并上清液,用提取液定容至100mL,混匀,待净化。7灡1灡2暋水果、蔬菜、食用菌称取20g(精确到0灡01g)试样于100mL离心管中,参见附录A所列基质含水量补水,涡旋振荡2min,加入20mL乙酸乙腈水溶液(4灡2灡2),涡旋2min,振荡提取30min后,以8000r/min离心10min,倾出上清液,向装残渣的离心管中加入20mL乙酸乙腈水溶液(4灡2灡2),重复上述提取步骤2次,合并提取液,用提取液定容至100mL,混匀,待净化。7灡2暋净化7灡2灡1暋谷类、茶叶、香辛料、坚果、植物油2GB23200灡114—2018用弱阳离子交换固相萃取小柱净化,固相萃取小柱分别用水、甲醇各5mL进行活化后,吸20mL提取液上样过柱,分别用5mL水、5mL甲醇淋洗,抽干淋洗液,最后用10mL甲酸甲醇溶液(4灡2灡3)进行洗脱,洗脱液收集至50mL梨形瓶中,于40曟条件下旋转蒸干,用乙酸乙腈水溶液(4灡2灡2)溶解并转移至5mL容量瓶中,用乙酸乙腈-水溶液(4灡2灡2)定容至5mL,过0灡22毺m微孔滤膜后,待测。7灡2灡2暋水果、蔬菜、食用菌从提取液中吸取5mL放入10mL离心管中,加入100mg的C18粉,涡旋3min后,以8000r/min的速度离心10min,取上清液过0灡22毺m微孔滤膜后,待测。7灡3暋仪器参考条件7灡3灡1暋液相色谱参考条件a)暋色谱柱:HILIC100mm暳2灡1mm(内径),1灡7毺m或相当者;b)暋柱温:室温;c)暋流动相:A为20mmoL/L甲酸铵水溶液(pH=3灡5),B为乙腈,流动相及梯度洗脱条件见表1;d)暋流速:0灡25mL/min;e)暋进样量:10毺L;表1暋流动相及梯度洗脱条件(VA+VB)时间min流动相VA流动相VB010900灡510902灡030704灡590105灡010907灡3灡2暋质谱参考条件a)暋离子源类型:电喷雾离子源;b)暋喷雾电压:2灡8kV;c)暋毛细管温度:550曟;d)暋雾化气流量:600L/h;e)暋碰撞气类型:氮气;f)暋扫描方式:正离子扫描;g)暋检测方式:多反应监测(MRM),监测条件见表2。表2暋灭瘟素多反应监测(MRM)的条件化合物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量V灭瘟素423灡2/312灡2423灡2/171灡2423灡2/312灡2702270297灡4暋基质标准工作曲线的配制通过7灡1和7灡2制得空白基质溶液,将标准中间溶液稀释成质量浓度为0灡01毺g/mL、0灡02毺g/mL、0灡05毺g/mL、0灡1毺g/mL和0灡2毺g/mL的系列基质标准溶液,基质标准溶液应现配现用。以测得峰面积为纵坐标、对应的标准溶液质量浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数。7灡5暋定性及定量7灡5灡1暋保留时间被测试样中灭瘟素色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较,相对误差应在暲2灡5%3GB23200灡114—2018之内。7灡5灡2暋定量离子、定性离子及子离子丰度比在相同实验条件下进行样品测定时,如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致,并且在扣除背景后的样品质谱图中,目标化合物的质谱定性离子应出现,至少应包括1个母离子和2个子离子,而且同一检测批次,对同一化合物,样品中目标化合物的2个子离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液相比,其相对偏差不超过表3规定的范围,则可判断样品中存在灭瘟素。表3暋定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分率相对离子丰度5020~50(含)10~20(含)曑10允许相对偏差暲20暲25暲30暲507灡6暋试样溶液的测定将基质标准溶液和待测溶液分别注入液相色谱质谱联用仪中,以保留时间和定性离子定性,外标法定量。样品中灭瘟素质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内,超过标准工作曲线最高点的则应稀释后再进行分析。7灡7暋空白试验除不加试料外,按照7灡1~7灡6的规定进行平行操作。8暋结果计算试料中灭瘟素残留量以质量分数氊计,单位以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算。氊=V1暳Ai暳V3V2暳Asi暳m暳氀(1)………………………………………暋暋式中:氊———试样中灭瘟素残留量,单位为毫克每千克(mg/kg);氀———标准溶液中灭瘟素的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);Ai———样品溶液中灭瘟素的峰面积;Asi———农药标准溶液中灭瘟素的峰面积;V1———提取溶剂总体积,单位为毫升(mL);V2———用于净化的提取溶液体积,单位为毫升(mL);V3———样品溶液定容体积,单位为毫升(mL);m—试样的质量,单位为克(g);计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,保留2位有效数字。当计算结果大于1mg/kg时,保留3位有效数字。9暋精密度9灡1暋在重复性条件下,2次独立测定结果的绝对差不大于重复性限(r),重复性限(r)的数据为:a)暋质量含量为0灡05mg/kg时,重复性限(r)为0灡0639;b)暋质量含量为0灡1mg/kg时,重复性限(r)为0灡179;c)暋质量含量为0灡2mg/kg时,重复性限(r)为0灡482。9灡2暋在再现性条件下,2次独立测定结果的绝对差不大于再现性限(R),再现性限(R)的数据为:a)暋质量含量为0灡05mg/kg时,再现性限(R)为0灡0181;b)暋质量含量为0灡1mg/kg时,再现性限(R)为0灡0432;c)暋质量含量为0灡5mg/kg时,再现性限(R)为0灡100。4GB23200灡114—201810暋其他方法的定量限为0灡05mg/kg。11暋图谱0灡01毺g/mL灭瘟素标准溶液色谱图见图1。!#!!!#$!$#%!%#&!&#’!’#!()*+$,-!’$,.!!$,’!!$,%!!$,!!!/!!.!!’!!%!!!图1暋0灡01毺g/mL灭瘟素标准溶液色谱图5GB23200灡114—2018附暋录暋A(资料性附录)所选基质含水量、称样量及提取前补水量信息表暋所选基质含水量、称样量及提取前补水量信息表见表A灡1。表A灡1暋所选基质含水量、称样量及提取前补水量信息表基质名称含水量%称样量g提取前补水量g结球甘蓝85203灡0芹菜95201灡0番茄95201灡0茄子90202灡0马铃薯80204灡0萝卜95201灡0菜豆75205灡0韭菜85203灡0苹果85203灡0桃90202灡0葡萄80203灡0柑橘85203灡0香蕉75205灡0木瓜90202灡0香菇90202灡0杏仁10510大豆油10510糙米10510小麦10510玉米10510花生10510绿茶10210花椒10210注1:不包含在本表中的基质可根据其含水量测试结果进行补水。注2:按照基质含水量补水至10g。6