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质参考件PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXX陨悦杂65.100G食品安全国家标准植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-柱后衍生法20180621发布原原20181221原原实施Nationalfoodsafetystandard要Determinationof9carbamatepesticidesandmetabolitesresiduesinfoodsofplantorigin要Liquidchromatography-post-columnderivatizationmethod23200.112—2018GB发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会PDF文件使用pdfFactoryPro试用版本创建—2018暋暋暋食品安全国家标准植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定液相色谱柱后衍生法1暋范围本标准规定了植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物(参见附录A)残留量的液相色谱柱后衍生测定方法。本标准适用于植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定。2暋规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB2763暋食品安全国家标准暋食品中农药最大残留限量GB/T6682暋分析实验室用水规格和试验方法3暋原理试样用乙腈提取,提取液经固相萃取或分散固相萃取净化,使用带荧光检测器和柱后衍生系统的高效液相色谱仪检测,外标法定量。4暋试剂和材料除非另有说明,在分析中仅使用分析纯的试剂,水为GB/T6682规定的一级水。4灡1暋试剂4灡1灡1暋乙腈(CH3CN,CAS号:75058)。4灡1灡2暋甲醇(CH3OH,CAS号:67561):色谱纯。4灡1灡3暋二氯甲烷(CH2Cl2,CAS号:75092):色谱纯。4灡1灡4暋甲苯(C7H8,CAS号:108883):色谱纯。4灡1灡5暋氯化钠(NaCl,CAS号:7647145)。4灡1灡6暋邻苯二甲醛(C8H6O2,CAS号:643798)。4灡1灡7暋2二甲胺基乙硫醇盐酸盐(C4H12ClNS,CAS号:13242449),或相当者。4灡1灡8暋无水硫酸镁(MgSO4,CAS号:7487889)。4灡1灡9暋醋酸钠(CH3COONa,CAS号:6131904)。4灡1灡10暋氢氧化钠(NaOH,CAS号:1310732)。4灡1灡11暋十水四硼酸钠(Na2B4O7·10H2O,CAS号:1303964)。4灡2暋溶液配制4灡2灡1暋甲醇二氯甲烷溶液(1+99,体积比):量取10mL甲醇加入990mL二氯甲烷中,混匀。4灡2灡2暋乙腈甲苯溶液(3+1,体积比):量取100mL甲苯加入300mL乙腈中,混匀。4灡2灡3暋氢氧化钠溶液(0灡05mol/L):称取2灡0g氢氧化钠,用水溶解并定容至1000mL,混匀。1GB23200灡112—20184灡2灡4暋十水四硼酸钠溶液(4g/L):称取4灡0g十水四硼酸钠,用水溶解并定容至1000mL,混匀。4灡2灡5暋OPA试剂:称取50灡0mg邻苯二甲醛,溶于5mL甲醇中,混匀;再称取1灡0g2二甲胺基乙硫醇盐酸盐,溶于5mL十水四硼酸钠溶液(4灡2灡4),混匀;将上述2种溶液倒入490mL十水四硼酸钠溶液(4灡2灡4),混匀。4灡3暋标准品9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物标准品参见附录A,纯度曒95%。4灡4暋标准溶液配制4灡4灡1暋标准储备溶液(1000mg/L):准确称取10mg(精确至0灡1mg)各农药标准品,用甲醇溶解并分别定容到10mL。标准储备溶液避光-18曟保存,有效期1年。4灡4灡2暋混合标准溶液:准确吸取一定量的单个农药储备溶液于10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。混合标准溶液,避光0曟~4曟保存,有效期1个月。4灡5暋材料4灡5灡1暋固相萃取柱1:氨基填料(NH2)500mg,6mL。4灡5灡2暋固相萃取柱2:石墨化炭黑填料(GCB)500mg,氨基填料(NH2)500mg,6mL。4灡5灡3暋乙二胺N丙基硅烷硅胶(PSA):40毺m~60毺m。4灡5灡4暋十八烷基甲硅烷改性硅胶(C18):40毺m~60毺m。4灡5灡5暋陶瓷均质子:2cm(长)暳1cm(外径)。4灡5灡6暋微孔滤膜(有机相):0灡22毺m暳25mm。5暋仪器设备5灡1暋液相色谱仪:配有柱后衍生反应装置和荧光检测器(FLD)。5灡2暋分析天平:感量0灡1mg和0灡01g。5灡3暋高速匀浆机:转速不低于15000r/min。5灡4暋高速离心机:转速不低于4200r/min。5灡5暋组织捣碎机。5灡6暋旋转蒸发仪。5灡7暋氮吹仪:可控温。5灡8暋涡旋振荡器。6暋试样的制备6灡1暋试样制备蔬菜和水果的取样量按照相关标准的规定执行,食用菌样品随机取样1kg。样品取样部位按照GB2763的规定执行。对于个体较小的样品,取样后全部处理;对于个体较大的基本均匀样品,可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理;对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品,可在不同部位切取小片或截成小段后处理;取后的样品将其切碎,充分混匀,用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆,放入聚乙烯瓶中。取谷类样品500g,粉碎后使其全部可通过425毺m的标准网筛,放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料各500g,粉碎后充分混匀,放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀,放入聚乙烯瓶中。6灡2暋试样储存试样于-18曟条件下保存。2GB23200灡112—20187暋分析步骤7灡1暋提取和净化7灡1灡1暋蔬菜、水果和食用菌称取20g试样(精确至0灡01g)于150mL烧杯中,加入40mL乙腈,用高速匀浆机15000r/min匀浆提取2min,提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的100mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1min,在室温下静置30min。准确吸取10mL上清液,80曟水浴中氮吹蒸发近干,加入2mL甲醇溶解残余物,待净化。将固相萃取柱1(4灡5灡1)用4mL甲醇二氯甲烷溶液(4灡2灡1)预淋洗,当液面到达柱筛板顶部时,立即加入上述待净化溶液,用10mL离心管收集洗脱液,用2mL甲醇二氯甲烷溶液(4灡2灡1)涮洗烧杯后过柱,并重复一次,收集的洗脱液于50曟水浴中氮吹蒸发近干,准确加入2灡50mL甲醇,涡旋混匀,用微孔滤膜(4灡5灡6)过滤,待测。7灡1灡2暋谷物称取10g试样(精确至0灡01g)于250mL具塞锥形瓶中,加入20mL水,混匀后,静置30min,再加入50mL乙腈,用振荡器200r/min振荡提取30min,提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的100mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1min,在室温下静止30min。准确吸取10mL上清液,80曟水浴中氮吹蒸发近干,加入2mL甲醇溶解残余物,待净化。将固相萃取柱1(4灡5灡1)用4mL甲醇二氯甲烷溶液(4灡2灡1)预淋洗,当液面到达柱筛板顶部时,立即加入上述待净化溶液,用10mL离心管收集洗脱液,用2mL甲醇二氯甲烷溶液(4灡2灡1)涮洗烧杯后过柱,并重复一次,收集的洗脱液于50曟水浴中氮吹蒸发近干,准确加入2灡50mL甲醇,涡旋混匀,用微孔滤膜(4灡5灡6)过滤,待测。7灡1灡3暋茶叶和香辛料称取5g试样(精确至0灡01g)于150mL烧杯中,加入20mL水,混匀后,静置30min,再加入50mL乙腈,用高速匀浆机15000r/min匀浆提取2min,提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的100mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1min,在室温下静置30min。准确吸取10mL上清液,80曟水浴中氮吹蒸发近干,加入2mL乙腈甲苯溶液(4灡2灡2)溶解残余物,待净化。将固相萃取柱2(4灡5灡2)用5mL乙腈甲苯溶液(4灡2灡2)预淋洗,当液面到达柱筛板顶部时,立即加入上述待净化溶液,用100mL旋转蒸发瓶收集洗脱液,用2mL乙腈甲苯溶液(4灡2灡2)涮洗烧杯后过柱,并重复一次,再用25mL乙腈甲苯溶液(4灡2灡2)洗脱柱子,收集的洗脱液于40曟水浴中旋转蒸发近干,用5mL甲醇冲洗旋转蒸发瓶并转移到10mL离心管中,50曟水浴中氮吹蒸发近干,准确加入1灡00mL甲醇,涡旋混匀,用微孔滤膜(4灡5灡6)过滤,待测。7灡1灡4暋油料和坚果称取10g试样(精确至0灡01g)于150mL烧杯中,加入20mL水,混匀后,静置30min,再加入50mL乙腈,用高速匀浆机15000r/min匀浆提取2min,提取液过滤至装有5g~7g氯化钠的100mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1min,在室温下静置30min。准确吸取8mL上清液于内含1200mg无水硫酸镁、400mgPSA和400mgC18的15mL塑料离心管中,涡旋混匀1min,然后4200r/min离心5min,吸取5mL上清液于10mL离心管中,在50曟水浴中氮吹蒸发近干,准确加入2灡00mL甲醇,涡旋混匀,用微孔滤膜(4灡5灡6)过滤,待测。7灡1灡5暋植物油称取3g试样(精确至0灡01g)于50mL塑料离心管中,加入5mL水、15mL乙腈,并加入6g无水硫酸镁、1灡5g醋酸钠及1颗陶瓷均质子,剧烈振荡1min,4200r/min离心5min。准确吸取8mL上清液于内含1200mg无水硫酸镁、400mgPSA和400mgC18的15mL塑料离心3GB23200灡112—2018管中,涡旋混匀1min,然后4200r/min离心5min,吸取5mL上清液于10mL离心管中,在50曟水浴中氮吹蒸发近干,准确加入1灡00mL甲醇,涡旋混匀,用微孔滤膜(4灡5灡6)过滤,待测。7灡2暋测定7灡2灡1暋仪器参考条件a)暋色谱柱:C8柱,250mm暳4灡6mm(内径),5毺m(粒径);b)暋柱温:42曟;c)暋荧光检测器:毸ex=330nm,毸em=465nm;d)暋流动相及梯度洗脱条件,见表1;表1暋流动相及梯度洗脱条件(VA+VB)时间min流速mL/min流动相(水)VA流动相(甲醇)VB0灡001灡085152灡001灡075256灡501灡0752510灡501灡0604028灡001灡0604033灡001灡0208035灡001灡0208035灡101灡0010037灡001灡0010037灡101灡08515e)暋柱后衍生:0灡05mol/L氢氧化钠溶液,流速0灡3mL/min;OPA试剂,流速0灡3mL/min;水解温度,100曟;衍生温度,室温;f)暋进样体积:10毺L。7灡2灡2暋标准工作曲线精确吸取一定量的混合标准溶液,逐级用甲醇稀释成质量浓度为0灡01mg/L、0灡05mg/L、0灡1mg/L、0灡5mg/L和1灡0mg/L的标准工作溶液,供液相色谱测定。以农药质量浓度为横坐标、色谱峰的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。7灡2灡3暋定性及定量7灡2灡3灡1暋定性以目标农药的保留时间定性。被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较,相差应在暲0灡05min之内。阳性试样需更换C18柱进行定性确认。7灡2灡3灡2暋定量外标法定量。7灡3暋试样溶液的测定将混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱仪中,保留时间定性,测得目标农药色谱峰面积,根据式(1),得到各农药组分含量。待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内,超过线性范围时,应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。7灡4暋平行试验按7灡1~7灡3的规定对同一试样进行平行试验测定。7灡5暋空白试验除不加试料外,按7灡1~7灡4的规定进行平行操作。4GB23200灡112—20188暋结果计算试样中各农药残留量以质量分数氊计,单位以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算。氊=V1暳A