尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)说明书

北京索莱宝科技有限公司第1页共3页尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)说明书货号：U8180规格：200U保存：-20℃保存。产品说明：UDG酶分子量25kDa，能特异性识别DNA单链或双链中的尿嘧啶残基，并从DNA上水解去除尿嘧啶残基，防止DNA发生突变，是碱基切除修复过程中的重要组分，对RNA无活性。UDG酶常被用于消除PCR扩增中的残余污染。在PCR反应液配制时，将dUTP和dTTP按一定的比例混用，使得扩增产物都含有脱氧尿嘧啶。在进行PCR扩增前，在PCR混合液添加UNG酶，并增加2分钟37℃～50℃的保温步骤即可消除以往PCR产物的残留污染，由于UNG在PCR循环中的94℃变性一步便可被灭活，因此不会影响新的含dU的PCR产物。活性定义：60分钟内催化1nmol尿嘧啶从含尿嘧啶双链DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。质量控制：经多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。1×UDG反应缓冲液：20mMTris-HCl(pH8.0at25℃)；1mMDithiothreitol；1mMEDTA（可使用1×Taq反应缓冲液）使用建议：北京索莱宝科技有限公司第2页共3页UDG酶在Taq酶反应缓冲液中同样具有活性。在PCR反应液中直接添加UDG酶即可，推荐用量为0.2U每50μl体系，在PCR循环程序前增加2分钟37℃～50℃保温及可完全消除多达1ng含UTP模板的污染。应用实例：UNG酶特异性降解含UTP的DNA模板反应体系（以50μl反应体系为例）PCR循环程序：2×TaqPCRMasterMix25μl50℃，2分钟（降解含UTP的染模板）500bp模板（含UTP）1ng94℃，4分钟（灭活UDG，模板变性）500bp引物对终浓度0.2μM30次循环：94℃，30秒250bp模板（无UTP掺入）1ng54℃，30秒250bp引物对2终浓度0.2μM72℃，30秒ddH2Oupto50μl72℃,5分钟对照组未添加UDG酶；4℃,保温验组每50μl反应体系中添加0.2UUDG酶。北京索莱宝科技有限公司第3页共3页常用PCR残余污染消除体系及PCR程序（50μl扩增体系）5×TaqBufferwithMg2+10μl上游引物0.2-1.0μM(终浓度)下游引物0.2-1.0μM(终浓度)dATP,dGTP,dCTP各0.2mM(终浓度)dTTP0.1mM(终浓度)dUTP0.2mM(终浓度)*如全部使用dUTP替代dTTP，dUTP终浓度为0.4mM模板1-50ng（质粒）10ng-1μg(基因组)Taq酶0.25μl（1.25U）ddH2O至50μlUDG酶0.2U，如残余污染严重可适量增加酶用量