中性、碱性土壤速效磷含量检测试剂盒说明书 微量法

北京索莱宝科技有限公司第1页共3页中性、碱性土壤速效磷含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。货号：BC2965规格：100T/96S产品内容：提取液：液体125mL×1瓶，4℃保存。试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入5mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入5mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。试剂三：液体5mL×1瓶，室温保存。标准品：10μmol/mL标准磷贮备液1mL×1支，4℃保存。工作液：35mL棕色空瓶×1瓶。工作液（定磷剂）的配制：按H2O：试剂一：试剂二：试剂三=2:1:1:1的比例配制，配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。产品说明：速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷、一部分微溶性的无机磷和易矿化的有机磷等，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。用弱碱法提取酸溶性磷和吸附态磷，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算磷含量。试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、20目筛、漩涡震荡仪、EP管、蒸馏水。操作步骤：一、样本处理：北京索莱宝科技有限公司第2页共3页新鲜土样风干，过20目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为1：10-20的比例（建议称取约0.05g土样，加入1mL提取液），振荡提取1h，10000g，25℃离心10min，取上清液待测。二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。2、将10μmol/mL标准液用提取液稀释为6、4、2、1、0.5、0.25μmol/mL的标准溶液备用。3、操作表：(在1.5mL离心管中或96孔板依次加入下列试剂)测定管标准管空白管样品（µL）20--标准溶液（µL）-20-提取液（µL）404060工作液（µL）808080H2O（µL）606060充分混匀，25℃静置30min，将液体置于微量玻璃比色皿/96孔板中，测定660nm处吸光值A，分别记为A测定管、A标准管和A空白管，△A=A测定管-A空白管，△A标准=A标准管-A空白管，空白管只需测一次。三、速效磷含量计算：1、标准曲线的绘制：以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的△A标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将△A带入方程得到x（μmol/mL）2、速效磷含量的计算：速效磷含量（μmol/g鲜重）=x×V样÷（V样×W÷V样总）=x÷W。V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g。注意事项：1、工作液（定磷剂）应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管或EP管等试验器材均要求严格无磷。3、显色结束后应立即检测。北京索莱宝科技有限公司第3页共3页4、当△A大于1时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。5、用96孔板检测时，注意板孔中的液体有无气泡，如有气泡应排除气泡后再测定OD值。