组织总磷含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法

北京索莱宝科技有限公司第1页，共2页组织总磷含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号：BC2850规格：50T/48S产品内容：试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存（强腐蚀性，强氧化性）。试剂二：液体11mL×1瓶，4℃保存。试剂三：粉剂×2瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入10mL蒸馏水，溶解后再加入5mL试剂二，混匀。标准品：液体1mL×1支，1mmol/L无机磷标准液，4℃保存。产品说明：磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。总磷经消化后，转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法，一定条件下，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量，进而可计算出组织中总磷含量。自备仪器和用品：可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。操作步骤：一、有机磷消化：取带盖试管，进入精确称取约0.1g组织，加浓硫酸1.0mL，盖紧（防止水分散失）后沸水浴10min左右，待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后，加试剂一200μL，充分混匀，盖紧后继续沸水浴，直到溶液呈透明状，取出室温冷却后，加蒸馏水3.8mL，充分混匀；室温，10000rpm，离心10min，取上清液，待北京索莱宝科技有限公司第2页，共2页测。二、测定：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。2.打开水浴锅，调节温度到40℃。3.测定：试剂名称（μL）空白管标准管测定管标准液50上清液50蒸馏水500450450试剂三500500500混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于660nm测定吸光度，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。三、组织总磷含量计算：总磷含量(mmol/gFW)=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W=0.005×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷WC标准液：1mmol/L；V总：上清液总体积，5mL=0.005L。W：样品质量，g。注意事项：1、试剂三需临用前配制，限当天使用。2、测定前先用1~2个样品做预实验，如吸光值大于0.8，需用蒸馏水做相应稀释。