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专题整合提升二苯胺蓝色去除滤液中的杂质柠檬酸钠引物变性复性高压灭菌粗分离缓冲液要与凝胶面平齐1．分离DNA、PCR技术、分离蛋白质的比较：专题一DNA和蛋白质技术分离DNAPCR技术分离蛋白质实验原理DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，且不溶于冷酒精利用DNA热变性原理体外扩增DNA依据相对分子质量的大小不同来分离蛋白质实验过程选取材料→破碎细胞释放DNA→除杂→DNA析出鉴定变性→复性→延伸样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定实验结果获得较纯净的DNA获得大量DNA相对分子质量不同的蛋白质得以分离实验意义为DNA研究打下基础解决了DNA研究中材料不足的问题为蛋白质的研究和利用提供了原材料2.PCR扩增的常见问题分析：(1)样品扩增后产物比预期少，即出现假阴性。①主要原因。a．TaqDNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制。b．引物设计不合理导致不能复制。c．提取的模板质量不过关以及PCR系统的建立欠妥当。d．循环次数不够等。②预防措施。a．选用活力高的TaqDNA聚合酶。b．提取DNA模板时，要注意避免提取物中有抑制酶活性的酚、氯仿等污染物。c．保证引物与模板DNA互补。(2)样品扩增后产生新DNA，即出现假阳性。①主要原因：PCR技术高度灵敏，极其微量的外源DNA也会造成非目的DNA片段的大量增加，因此，外源DNA的污染是PCR出现假阳性结果的主要原因。②预防措施：隔离操作区、分装试剂、简化操作程序、使用一次性吸液枪头等。【易错警示】血红蛋白的提取与分离实验的易错点(1)红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；要低速、短时间离心，否则会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。(2)凝胶的预处理：用沸水浴法不但节约时间，而且能除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。(3)色谱柱的装填：装填时尽量紧密，减小颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。(4)色谱柱成功的标志：红色区带均匀一致地移动。1．下列有关物质提取与分离的叙述中，错误的是A．有机大分子的提取分离在思路上是根据不同物质的不同的理化性质，选择一定的物理化学方法，达到提取与分离的目的B．叶绿体中色素的分离是纸层析法，其原理是各种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸条上的扩散速度不同［变式训练］C．可以用电泳法从DNA和蛋白质的混合液中提取、分离DNA分子D．从多种蛋白质的混合液中提取、分离某种蛋白，可以用凝胶色谱法，也可用电泳法解析生物大分子的提取分离，一般就是根据其固有的理化性质，用不同的物理或化学方法，达到不同成分的分离。叶绿体中色素的分离借助各色素成分在层析液中的溶解度及其在滤纸条上的扩散速度不同而达到分离的目的。不同蛋白质分子由于其相对分子质量、分子大小、形状、带电荷数有很大差异，因此可借助凝胶色谱法或电泳法进行分离。而从DNA、蛋白质的混合液中分离DNA，多借助于二者在NaCl溶液中的溶解度不同来分离，而电泳法难以达到分离DNA的目的。答案C2．下列是有关DNA鉴定实验的1管(对照组)与2管(实验组)示意图，图示中恰当的选项是解析A中的1管中不应加酒精，加二苯胺，错误；在物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液DNA溶解度最大，DNA量溶解状态，有二苯胺，沸水溶液呈蓝色，B中2管正确；C中1管应除去酒精，1管错误；D中2管不应加酒精，错误。答案B专题二“DNA粗提取与鉴定”中方法与目的归纳方法目的溶于NaCl溶液中并稀释①NaCl溶液浓度为2mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质②当NaCl溶液稀释至0.14mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，其能水解蛋白质加入冷却酒精(体积分数为95%)DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质加入二苯胺，并沸水浴鉴定DNA【易错警示】(l)哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。(2)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟鸡血细胞吸水涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液。3．下列DNA粗提取的实验操作中，经过离心或过滤后，取上清液或液液的有［变式训练］A．在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠，混合均匀后离心B．在盛有血红胞的塑料烧杯中加蒸馏水，快速搅拌后过滤C．调节NaCl溶液的物质的量浓度至0.14mol/L后，轻轻搅拌后过滤D．在溶有DNA的NaCl溶液中缓慢加入蒸馏水，轻轻搅拌后过滤解析柠檬酸钠能够防止血液凝固，新鲜鸡血经过离心后，上清液中血细胞较少，则A项错误；在血细胞中加入蒸馏水，细胞因吸水而涨破，DNA在滤液中，则B项正确；当NaCl溶液的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最低而析出，杂质在滤液中，则C、D项错误。答案B4．在DNA的粗提取与鉴定实验中，将提取获得的含DNA的黏稠物(还含有较多杂质)分别处理如下：第一，放入0.14mol/L的氯化钠溶液中，搅拌后过滤，得滤液A和黏稠物a；第二，放入2mol/L的氯化钠溶液中，搅拌后过滤，得滤液B和黏稠物b；第三，放入冷却的95%的酒精溶液中，搅拌后过滤，得滤液C和黏稠物c。以上过程获得的滤液和黏稠物中，因含DNA少而可以丢弃的是________(填字母)。解析在不同浓度的NaCl溶液中，DNA的溶解度是不同的，在0.14mol/L的NaCl溶液中DNA溶解度最小，呈丝状物析出。在2mol/L的NaCl溶液中溶解度最大，所以DNA呈溶解状态，过滤后存在于滤液中。酒精溶液可使DNA分子凝集，呈丝状物，过滤后存在于黏稠物中。答案AbC