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专题整合提升液体碳源氮源纯净的培养物外来杂菌煮沸消毒法高压蒸汽灭菌法倒平板平板划线选择培养基稀释涂布平板法样品的稀释多糖葡萄糖苷酶刚果红染色法梯度稀释透明圈1．技术流程：专题一微生物的纯化培养技术2．流程解读：(1)无菌技术：主要指消毒和灭菌，实验中对操作者和操作空间进行消毒，对实验用具和培养基进行灭菌。实验过程中严格遵循无菌技术。(2)倒平板：待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。(3)平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，培养后获得由单个菌体生长形成的菌落，从而实现菌种的纯培养。(4)稀释涂布平板法：先将菌液进行系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落，实现菌种的纯培养。【易错警示】(1)自然界中多种微生物混杂在一起，研究菌种时需要将它们分离开来，微生物的纯化培养技术实现了菌种的分离。(2)平板划线法操作简单，常用于微生物的分离；稀释涂布平板法操作复杂，稀释度足够高时，培养基上生长的菌落大都是由单个细菌形成的，除用于微生物的分离外，还可进行细菌的计数。1．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，实验中下列做法错误的是A．对接种环进行灼烧处理B．带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉C．带菌培养基必须经加热后才能倒掉D．接种后双手必须经肥皂洗净，再用体积分数为70%的酒精棉球擦拭［变式训练］解析接种环在接种前、接种后都要进行灼烧灭菌，A项正确；带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌后才能倒掉，简单的加热达不到灭菌效果，B项正确、C项错误；接种后操作者的双手要进行消毒，D项正确。答案C2．筛选是分离和培养微生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是A．在全营养的LB培养基(普通培养基)中，筛选大肠杆菌B．在尿素固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物C．用以纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物D．在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物解析在全营养的LB培养基上多种微生物可生长，筛选不到大肠杆菌，A项错误；在尿素固体培养基中，只有能分解尿素的微生物能生长，B项正确；在以纤维素为唯一碳源的培养基中，只有能分解纤维素的微生物能生长，C项正确；加入不同浓度氯化钠的培养基中抗盐突变体植物生长更好，D项正确。答案A【易错警示】区分选择培养基与鉴别培养基选择培养基鉴别培养基概念培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品用途培养、分离出特定的微生物鉴别不同种类的微生物实例筛选纤维素分解菌的选择培养基配方鉴别纤维素分解菌的培养基配方1．对比分析尿素分解菌和纤维素分解菌的分离和鉴定：专题二有关分解尿素的细菌和纤维素分解菌的比较尿素分解菌的分离纤维素分解菌的分离原理提供有利于目的菌株生长的条件(如营养、温度、pH等)，同时抑制其他微生物的生长，常用选择培养基筛选过程土壤取样→样品稀释→培养与观察土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布于含刚果红(CR)的鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落→发酵培养鉴定酚红指示剂(变红)刚果红(产生透明圈)培养基选择培养基：固体培养基，尿素为唯一氮源选择培养基：液体、富含纤维鉴别培养基：固体，加入刚果红2.分解尿素的细菌和纤维素分解菌的分离流程比较：分离流程分解尿素的细菌纤维素分解菌土壤取样选择富含有机质的土壤选择富含纤维素的环境选择培养不进行选择培养液体选择培养基，增加纤维素分解菌的浓度梯度稀释梯度稀释到104、105、106倍梯度稀释101～106倍涂布平板涂布到选择培养基涂布到鉴别培养基菌种鉴定培养基中加入酚红指示剂培养基中加入刚果红染色剂3．临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：［变式训练］(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用____________法或____________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用____________法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A____________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B____________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明____________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的____________。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素________________。解析本题主要考查微生物培养，解答本题可从以下两个方面着手：分离微生物方法：平板划线法和稀释涂布平板法。透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱。本题考查微生物接种和抗生素抗菌能力的判断。(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法是稀释涂布平板法或平板划线法。(2)为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂布法将微生物接种在培养基上。(3)在抗药性检验过程中，如果在抗生素周围出现透明的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌生长；透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱，据此可判断A、B、C抗菌能力强弱依次是A、C、B；D的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。(4)实验结果表明抗生素A对该致病菌的抗菌效果最好。答案(1)平板划线稀释涂布平板(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A