药物分析：维生素类药物的分析

维生素类药物的分析2021/5/102本章要求掌握不同维生素的结构特点和主要性质掌握维生素A、B、C、E的主要分析方法了解维生素类药物分析方法的操作要点VitA、D2、D3、E、K1等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12、泛酸、叶酸)VitC、烟酸、烟酰胺维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质人体不能合成维生素CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯R:维生素A（维生素A1、视黄醇）CH2ORCH3CH3CH3CH3CH3环己烯共轭多烯侧链UV多异构体易被氧化结构分析维生素A325.5100%新维生素Aa32875%新维生素Ab320.524%新维生素Ac310.515%异维生素Aa32321%异维生素Ab32424%max相对生物效价环氧化物VitA醛VitA酸酸醛环氧化物、氧化剂紫外线、VitAVitAVitA]O[O2三氯化锑反应UVTLC鉴别试验1.三氯化锑反应条件无水（使得三氯化锑水解）无醇（使得碳正离子电荷消失）CHCl3紫红蓝色3SbClVitA不稳定碳正离子VitAVitAHCl去水△无水乙醇5个共轭双键λmax为326nm一个吸收峰2.UV法6个共轭双键λmax为350～390nm三个吸收峰溶剂：无水乙醇-盐酸（100:1）紫外分光光度法√三氯化锑比色法HPLC法含量测定“三点校正法”由来UV法（三点校正法）测定依据：分子结构中共轭多烯体系，具有紫外吸收特性，在λ325-328nm呈现选择性吸收但是混有多种杂质（异构体、氧化产物等杂质）在310~340nm波长范围内有吸收干扰紫外测定故采用“三点校正法”消除干扰☆1、杂质的吸收在310～340nm范围内呈一条直线随波长的增大而吸收度变小☆2、物质对光的吸收具有加和性即样品各波长的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和测定原理选择在三个波长处测定吸光度，结合校正公式计算A校正，再计算含量波长（三点）选择（1）1VitA的max（328nm）（2）23分别在1的两侧各选一点第一法第二法测定对象:VitA醋酸酯第一法等波长差法λ1=328nmλ2=316nmλ3=340nm测定波长300、316、328、340、3603283403163283403163283282523AAA.A校正等波长差法校正公式测定对象:VitA醇第二法等吸收度法(皂化法)λ1=325nmλ2=310nmλ3=334nm等吸收度法（6/7吸收度法）校正公式测定波长300、310、325、334334310325AAA76第一法无法消除杂质干扰时用此法334310325325260455528156A.A.A.A校正维生素A含量是用生物效价表示单位IU/g（国际单位）%11%11标样标样）（含量）（含量cmcmEEgIUgIU%11%11标标样样）（含量）（含量cmcmEgIUEgIU换算因数计算要求1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数为）（IU2907000g344.0g11g维生素A醇相当的国际单位数为）（IU3330000g300.0g1醇全反式维生素醋酸酯全反式维生素Ag1IUAg1IU300.0344.0）（含量标gIU%11%11标标样样）（含量）（含量cmcmEgIUEgIU190015302907000183018203330000(VitA酯)(VitA醇)换算因数换算因数含量样%11(cmEIU/g)第一法测定维生素A醋酸酯时，换算因素为1900第二法测定维生素A醇时，换算因素为1830换算因数由纯品计算而得lmlgCAcm)100/(%)(1样)1830(1900)100/(mlgCA应用：维生素A胶丸的测定，求标示量％％标示量100)1830(1900)100/(WmlgCA100％标示量平均丸重换算因数E＝%1cm(样)A328或A328校正03%－15%－3%第二法校正328A328A第二法维生素E生育酚OR1HOR2CH3***R1、R2均为CH3R1、R2为H和CH3R1、R2均为H生物效价右旋体：消旋体=1.4：10（天然品）（合成品）乙酰化（生育酚醋酸酯）CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3CO结构：dl－α－生育酚醋酸酯游离生育酚还原性水解维生素E硝酸反应鉴别试验]O[HNO3VitE生育红生育酚水解橙红色HNO3强氧化剂OOCH3C16H33H3CCH3O邻醌结构75℃15′三氯化铁－联吡啶反应红色生育醌对生育酚联吡啶2FeKOHFeVitE3△[O]OOH3CCH3OHCH3C16H33CH3弱氧化剂原理生育醌对生育酚3422CeCe利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈杂质检查铈量法检查游离生育酚1:2反应摩尔比硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄→灰紫）药典规定取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，用（0.01mol/L）硫酸铈液滴定，消耗硫酸铈液≤1.0ml，限量≤2.15％含量测定GC法特点选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制ChP维生素E原料及其制剂气相色谱法ChP内标法加校正因子内标物正三十二烷固定相硅酮（OV—17）检测器氢火焰离子化检测器√供试液（样品+内标）对照液（对照+内标）内标法加校正因子校正因子：含量计算：BPGC内标正三十二烷R≥1.4USPGC内标十六酸十六醇酯R≥1.0JPHPLC外标dl－α－生育酚R≥1.4氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+HClCl-维生素B1盐酸硫胺UVNNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+ClHCl-·还原性碱性与生物碱↓→↓非水碱量法ChP鉴别试验硫色素反应荧光消失硫色素铁氰化钾维生素OH1B正丁醇蓝色荧光H+OH-碱性VitB14242HgIH]B[HgIK淡黄H+2KIIIHI]B[2红色H+白色硅钨酸H+白色扇形苦酮酸H+沉淀反应OH4WO12OHSiO]B[23222非水溶液滴定法UV法硫色素荧光法含量测定HClOClOBHClOHClClBAcHg）（非水溶液滴定法滴定前需加入过量醋酸汞溶液——(为什么？)噻唑环上的季铵和嘧啶环上氨基，反应摩尔比1：2ChP原料药UV法共轭双键结构，UV特征紫外吸收峰随pH变化而变化溶剂pHλmax水7232-3345盐酸2246421%cmE11ChP片剂、注射剂含量计算（每片）相当于标示量的%=%100100%11标示量平均片重稀释倍数WEAcm规格g/片g（每ml）相当于标示量的%=%1001100%11标示量稀释倍数VEAcm规格g/mlmlOOHHOOCOHHCH2OH123456手性CUV己糖结构γ-内酯维生素CL－抗坏血酸OOHHOOCOHHCH2OH123456烯二醇强还原性酸性鉴别试验与氧化剂的反应糖类的反应UV去氢抗坏血酸]O[VitC与氧化剂的反应OHOOCOHHCH2OHHOCH2OHOOOOCOHH]O[NClHOClOHHNClHOClO与2,6-二氯靛酚反应ChP（2010）无色二氯靛酚，VitC62氧化型玫瑰红色H还原型蓝色OHˉ红碱性酒石酸铜OCuVitC与碱性酒石酸铜反应与KMnO4反应MnKMnOVitC与AgNO3反应（银镜）黑AgAgNOVitCChP（2010）UVBP0.01mol/LHClnmmax24358554511~E%cm碘量法2,6-二氯靛酚滴定法HPLC含量测定淀粉指示液，终点至蓝色不消失原理碘量法具有较强还原性，可被氧化OOCOHHOOCH2OHHI2+OHOOCOHHCH2OHHOH+I反应摩尔比1∶1（原料、片剂、注射液）方法Vc+新沸放冷H2O+稀HAc溶解立即用标准I2滴定至Blue淀粉指示液讨论新沸放冷H2O减少水中O2对测定的影响减慢VitC被O2氧化速度稀HAc,立即滴定附加剂干扰的排除片剂——滑石粉——过滤丙酮甲醛注射剂——抗氧剂——焦亚硫酸钠%100WFTV%VitC计算×W标示量V注射剂原料药、片剂、注射剂？1例：维生素C注射液（规格2ml：0.1g）的含量测定：精密量取本品2ml，加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.1003mol/L）滴定，至溶液显兰色并持续30秒钟不褪，消耗10.56ml。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。计算维生素C注射液的标示量%。%100WFTV%VitC×W标示量V注射剂1%27.93%100100021.0121.01003.0806.856.10%标示量2,6-二氯靛酚滴定法酚亚胺二氯靛酚，VitCUSPJP原理方法终点维生素C二氯氯靛酚HAcHPO3自身指示终点法溶液显玫瑰红色时，即为终点玫瑰红无色还原快速滴定2min内酸性环境HPO3-HAc稳定VitC防止其他还原性物质干扰并非维生素C的专一反应讨论例多种维生素片中VitA、VitB1、VitB2、VitB6、烟酰胺、VitC、VitE的含量测定色谱柱ODS流动相A、水-甲醇（4：1）B、甲醇检测波长272nm280nmHPLC法对象制剂、生物样品、果汁梯度洗脱一、维生素A（共轭多烯侧链）的三氯化锑鉴别反应和三点校正法测定含量的原理、波长选择方法、生物效价二、维生素E（水解还原性）的鉴别试验，游离生育酚的检查，GC的应用三、维生素B1（杂环、碱性、还原性）的硫色素鉴别反应，非水滴定、紫外法测定含量的应用四、维生素C（烯二醇、还原性、酸性）的2,6-二氯靛酚、硝酸银鉴别反应,碘量法的原理与注意事项、与二氯靛酚法的比较知识点回顾