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1EvaluationWarning:ThedocumentwascreatedwithSpire.Docfor.NET.第33讲克隆技术考点克隆技术一、植物的克隆1.植物克隆(1)技术基础：植物组织培养(2)理论基础：植物细胞的全能性——原因：植物体的每个生活细胞都具有完整的全套遗传物质。(3)植物细胞的全能性的实现条件：离体；适当的营养(包括水、无机盐、维生素、蔗糖、氨基酸等)；适宜条件(无菌、温度、湿度、光照等)以及生长调节物质。(4)植物激素的作用：诱导愈伤组织的形成和生长；诱导和控制再分化过程。2.植物组织培养(1)程序：半固体培养基的配制→小组织块的切取→愈伤组织的获得→新植株的再生。(2)填写基本操作过程图：外植体――→①A――→②B―→植物体图中①脱分化，②再分化，A表示愈伤组织，B表示胚状体或丛状苗。3.植物细胞培养和器官培养(1)植物细胞培养程序：愈伤组织→用摇床进行液体悬浮培养→单个胚性细胞→在适宜培养基中培养→细胞团→球形胚→心形胚→胚状体→完整植株。(2)器官发生和形态建成的实现：通过平衡的植物激素配比进行调控。如适量的生长素和细胞分裂素配比，可诱导芽的分化；适量的吲哚乙酸及适当减除其他某些激素，可诱导生根。4.原生质体培养与植物细胞工程(1)原生质体的获得方法：在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液环境(较高渗透压)下，用纤维素酶和果胶酶混合液处理根尖、叶片、愈伤组织或悬浮培养细胞，除去细胞壁，获得球形的原生质体。(2)植物细胞工程的操作过程2外源遗传物质――→基因工程技术导入受体细胞(1)实验材料及仪器：不同浓度的PC，胆囊癌QBC939细胞悬液，MTT仪器(测定细胞培养液的吸光度)等(2)实验思路：①取若干个培养瓶分成________组，均加入等量且适量的胆囊癌QBC939细胞悬液，再分别加入等量的相应浓度PC。②在适宜条件下培养，定时取样测定________，并计算细胞抑制率。实验过程中每个培养瓶测定________次。(3)实验结论：_________________________________________________。(4)讨论①研究发现实验组处于细胞周期中S期细胞的比例均显著增加，且随着药物剂量增加S期细胞的比例也增加，由此推测PC的作用机理是：________。②上述实验结果是胆囊癌QBC939细胞在离体条件下获得，如果要把PC作为治疗胆管癌的药物，还需要做哪方面的实验研究。________________________(写出一项)。解析(2)①据实验结果，PC浓度有6种，加上空白组，因此实验应分7组进行。②实验的测量指标是各培养瓶的吸光度值，每个组分24、48、72小时测量3次。(3)由实验结果曲线可知，随着PC浓度的增加和作用时间的延长，抑制效果增强。(4)①由于实验组S期细胞的比例增加，且药物剂量增加该比例也增加，因此，推测PC的作用机理是抑制DNA的复制过程，使得分裂细胞停滞在S期。②这是一个开放性试题，只要答案合理即可。答案(2)①7②各培养瓶的吸光度值3(3)随着PC浓度的增加和作用时间的延长，抑制效果增强(4)①抑制DNA的复制(抑制DNA的复制相关酶的合成)②研究PC对体内胆管癌细胞的抑制作用(或研究PC对人体正常细胞的毒害作用，只要写出一点即可，其他合理答案也对)13.(2017·嘉兴模拟节选)我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质(S蛋白)，对应的基因为s基因。请回答：(1)在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理________，并用________酶使两者结合。将重组DNA分子导入到哺乳动物细胞，经筛选得到工程细胞。(2)在细胞培养过程中，工程细胞在生长过程中有________现象，需要定期使用________酶3处理，以便于分瓶培养。(3)为提高工程细胞培养的成功率，下列措施中不采用的是________。A.取单个细胞进行培养B.加入胰岛素C.二氧化碳培养箱D.加入动物血清(4)由于哺乳动物细胞培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了“乳腺生物发生器”，进而从转基因动物的乳汁中提取所需产品。在这种技术中，作为重组DNA分子受体细胞的一般是________。解析(1)基因工程中，获得重组DNA时要先用相同限制性核酸内切酶处理目的基因和载体DNA，并用DNA连接酶使两者结合形成重组DNA分子。(2)在细胞培养过程中，细胞在生长过程中有接触抑制现象，需要定期使用胰蛋白酶处理，以便于分瓶培养。(3)为提高细胞培养的成功率，需要使用适合的培养液，并添加胰岛素和动物血清，使用二氧化碳培养箱进行培养，但细胞培养和细胞克隆培养不同，不需要从单个细胞开始进行培养。(4)在培养转基因动物过程中，一般用受精卵作为重组DNA分子的受体细胞。答案(1)s基因和载体DNADNA连接(2)接触抑制胰蛋白(3)A(4)受精卵14.(2017·台州模拟节选)请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱导剂________作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的________培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。(2)获得杂交瘤细胞后，在体外培养时需要特别加入的天然成分是________。(3)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________。A.用固体培养基培养B.用滋养层细胞支持生长C.能进行传代培养D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物(4)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导入受体细胞，该技术的核心步骤是________，噬菌体是这些关键基因的________。解析(1)制备单克隆抗体时，经免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞需要融合，电击振荡、PEG等方法可以促进融合，而生物诱导剂就是利用灭活的病毒介导。筛选得到的融合细胞需经过克隆培养，才能获得纯系细胞，同时还要进行抗体检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。(2)在体外培养细胞时需要特别加入的天然成分是血清。(3)杂交瘤细胞的体外培养过4程是一个克隆培养过程，需要使用液体培养基，并添加动物血清和胰岛素，而且要用滋养细胞支持生长，培养过程需要不断传代才能保证细胞不断生长。抗体是杂交瘤细胞合成并分泌的，不需要对细胞进行研磨破碎获得产物。(4)基因工程核心步骤是形成重组DNA分子，噬菌体是这些关键基因的载体。答案(1)灭活的(仙台)病毒克隆抗体(2)动物血清(3)C(4)形成重组DNA分子载体