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-1-EvaluationWarning:ThedocumentwascreatedwithSpire.Docfor.NET.微生物的培养与分离技术[核心精要]1．平板划线法和稀释涂布平板法的比较项目平板划线法稀释涂布平板法接种工具接种环涂布器操作难易程度操作较简便需要先进行梯度稀释，操作相对烦琐可否用于观察菌落特征可以可否用于计数不可以可以2.纤维素分解菌与尿素分解菌的分离及鉴定的比较项目尿素分解菌的分离与鉴定分解纤维素的微生物的分离与鉴定条件尿素为唯一氮源纤维素为唯一碳源鉴定方法在培养基中加入酚红指示剂在培养基中加入刚果红溶液鉴定原理细菌合成的脲酶使尿素分解成氨，氨使培养基pH升高，酚红指示剂变红微生物产生的纤维素酶能使纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖，使刚果红—纤维素复合物无法形成而出现透明圈步骤差异土壤取样→样品梯度稀释→涂布平板→培养与观察土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布培养→挑取菌落→进一步鉴定[对点训练]1．下列有关微生物分离、培养和计数的叙述，正确的是()A．分离土壤中微生物时，需要先对土壤灭菌，再进行培养B．测定土壤中细菌数量时，一般选用103～107倍的稀释液C．测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法或平板划线法进行计数D．统计菌落数目时，当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落D[分离土壤中微生物时，需要对培养基灭菌，但不能对土壤样品进行灭菌，A错误；由于土壤中各类微生物的数量不同，在进行分离和计数时，就需要按照不同的稀释度分别进行涂布，测定土壤中细菌的数量一般选择104、105、106倍的稀释液，B错误；测定土壤样品中的细菌数目常用稀释涂布平板法，平板划线法不能用于计数，C错误；统计菌落数目时，当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落，D正确。]2．下列说法错误的是()A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离-2-B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C．只有得到3个或3个以上菌落数目在30～300的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落数的计数D．牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显大于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基已筛选出一些细菌C[样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，土壤中各类微生物数量不同，含量最多的是细菌，占70%～90%，其次是放线菌，最少的是真菌，所以为获得不同类型的微生物，要按不同稀释倍数进行分离；在同一稀释度下只要得到2个或2个以上的菌落数目在30～300的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落数的计数；探究选择培养基是否具有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基接种后培养作为条件对照，若后者上的菌落数明显大于前者，说明前者具有筛选作用。]3．下列关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述，正确的是()A．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B．筛选分解尿素的细菌时应以尿素作为培养基中的唯一营养物质C．统计样品中的活菌数目时一般用平板划线法D．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌A[只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A正确；筛选分解尿素的细菌的实验中，采用的是以尿素为唯一氮源的培养基，B错误；统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法，C错误；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素，D错误。]4．下列关于尿素分解菌和纤维素分解菌的分离与鉴定的叙述，错误的是()A．分离尿素分解菌需要以尿素为唯一的氮源B．尿素分解菌能产生脲酶，纤维素分解菌能产生纤维素酶C．两个过程中都需要梯度稀释D．刚果红染色法也可以用于筛选尿素分解菌D[分离尿素分解菌的培养基以尿素为唯一氮源，A正确。尿素分解菌和纤维素分解菌分别产生脲酶和纤维素酶，B正确。由于样品中目的菌的浓度较大，所以都要进行梯度稀释，C正确。刚果红染色法仅能用于纤维素分解菌的筛选，D错误。]5．(2019·全国卷Ⅱ)物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是________。-3-(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是__________________________。(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源，若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路，预期结果和结论，即______________________________________________________________________________________________________________。(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异。该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加________，三处滴加量相同。②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明____________________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明__________________________。[答案](1)W(2)乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W(3)将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源(4)缓冲液缓冲液不能降解W酶E与天然酶降解W的能力相近