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1第2课时微生物分离和培养的技术操作（以大肠杆菌为例）[随堂检测][学生用书P13]知识点一培养基的配制1．在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确顺序为()①熔化②调pH③加棉塞④包扎⑤分装⑥称量A．①②⑥⑤③④B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③D．①②⑤④⑥③解析：选B。上述步骤中，培养基的配制顺序为称量→熔化→调pH→分装→加棉塞→包扎。2．牛肉膏蛋白胨培养基中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的说法，不正确的是()A．不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用B．在微生物生长温度范围内保持固体状态C．琼脂凝固点低，利于微生物的生长D．琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强解析：选C。在液体培养基中加入凝固剂如琼脂后，制成固体培养基，它是实验室中最常用的培养基之一。固体培养基中可形成肉眼可见的单个细胞繁殖而来的子细胞群体，即菌落，用于微生物的分离、计数和菌种鉴定等。琼脂作为一种理想的凝固剂，是其性质决定琼脂不会被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强。琼脂在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，所以在微生物生长温度范围内保持固体状态。知识点二无菌操作和接种技术3．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析：选D。A项，在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子。B项，倒平板时，用左手将2培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。C项，接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后再挑取菌落。D项，在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。4．下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是()A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行B．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养解析：选B。由图可知，①是倒平板，②是用接种环沾取菌液，③是进行平板划线，④是培养。①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，A正确；倒完平板后立即盖上培养皿，冷却后将平板倒过来放置，B错误；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落，C正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，有利于表面的水分更好的挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D正确。5．如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1→2→3→4→5。下列操作方法正确的是()A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B．划线操作应在火焰上进行C．在5区域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌解析：选D。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰旁进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。6．“创卫”是创建卫生城市的简称。“卫生城市”是一个城市综合功能和文明程度的重要标志。某同学欲利用所学习的微生物培养知识，通过实验证明痰液中含有细菌，来倡导同学们不要随地吐痰，为“创卫”添一份力。请回答下列问题：(1)欲培养细菌必须先制备可供细菌生长的培养基。实验室中常用牛肉膏蛋白胨固体3培养基来培养微生物，该培养基的组成成分包括牛肉膏、蛋白胨、NaCl、________、H2O等；该培养基中微生物所需的氮源来自________；制备该培养基的步骤是：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→倒平板，其中灭菌常用的方法是______________；培养基灭菌后，需要冷却到________℃左右才能倒平板，等平板冷凝后，还需要将平板倒置，主要目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)为了使实验更有说服力，该同学设置了空白对照组和若干实验组，其中对照组的作用是__________________。若在某次调查中，某一实验组平板上的平均菌落数为39个，而空白对照组的平板上出现了9个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了________现象。答案：(1)琼脂牛肉膏、蛋白胨高压蒸汽灭菌法50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染(2)排除实验组中非测试因素对实验结果的影响(答案合理即可)污染[课时作业][学生用书P63(单独成册)]一、选择题1．下面关于斜面接种大肠杆菌的主要目的，表述错误的是()A．菌种转移B．扩大培养C．保存纯净菌种D．消毒答案：D2．下列有关微生物培养的叙述，正确的是()A．培养前均需要对培养基进行高压蒸汽灭菌B．均要确保培养基中含有所需的全部营养物质C．平板划线法和涂布平板法均可用于鉴定菌种D．均需要放在恒温培养箱中通入氧气培养解析：选C。微生物接种前，要对培养基进行高压蒸汽灭菌，A错误；培养基中只需要含有满足微生物生长需要的营养物质，B错误；平板划线法和涂布平板法均可用于鉴定菌种，C正确；有些微生物属于厌氧型，就不需要氧气，D错误。3．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A．培养基分装到培养皿后进行灭菌B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C．接种后的培养皿需放在光照培养箱中培养D．培养过程中每隔一周观察一次解析：选B。微生物分离中培养基的制备应是先灭菌再倒平板，A项错误；每一次划线4前都要灼烧接种环，以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，B项正确；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，C项错误；培养过程中观察的间隔时间不能太长，适宜条件下观察一次一般不超过24h，D项错误。4．斜面培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的()A．1/5B．2/3C．1/4D．1/2解析：选D。搁置斜面长度不超过试管总长度的1/2。5．测定3类细菌对氧的需求，让它们在3个不同的试管中生长，如图显示了细菌的生长层。据此判断：只能在有氧培养基中繁殖、只能在无氧培养基中繁殖、在有氧和无氧的培养基中都能繁殖的细菌依次是()A．Ⅲ、Ⅰ、ⅡB．Ⅲ、Ⅱ、ⅠC．Ⅰ、Ⅱ、ⅢD．Ⅰ、Ⅲ、Ⅱ答案：A6．要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用()A．加入青霉素的培养基B．固体培养基C．加入高浓度食盐的培养基D．液体培养基解析：选B。如果加入青霉素则抑制大部分细菌生长；若加入高浓度食盐，则只能选择出金黄色葡萄球菌；液体培养基多用于生产，分离鉴定一般不用液体培养基。7．下列关于平板划线操作的叙述，错误的是()A．每次划线前都要灼烧接种环B．灼烧接种环后，要立即用接种环接种，防止杂菌污染接种环C．要在酒精灯火焰旁进行D．接种前，要将菌种试管口通过火焰解析：选B。灼烧接种环后，将接种环伸入管内，让环端先接触培养基上未长菌的部位，使其冷却，然后轻轻挑取少量菌体，再进行接种。灼烧接种环后，不可立即用接种环接种，以免接种环温度过高，将菌种杀死。8．微生物培养是微生物工程中的基础技术。下列相关叙述正确的一项是()A．病毒和细菌的培养基成分相同B．平板划线法中的划线是连续进行的5C．微生物培养基中并不都必须添加碳源或氮源D．在培养的过程中，细胞种类、数目都不断地增加解析：选C。病毒和细菌的培养基成分有区别。平板划线法中的划线可以是连续的，也可以是间断的。微生物的培养过程中，细胞数目不断增加，细胞的种类不变。9．下列关于对大肠杆菌的接种的叙述，不正确的是()A．接种环在接种的试管斜面上轻轻划“S”型曲线B．在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基、培养皿和接种环进行消毒C．不能用刚刚灼烧过的接种环直接挑取菌种D．使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃解析：选B。灭菌是指采用强烈的物理或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长繁殖能力，所以，对培养基、培养皿和接种环进行灭菌而不是消毒；因为灼烧过的接种环温度太高，直接接触菌种会将菌种杀死，所以要将接种环接触没有菌种的培养基的顶端待温度降低后再挑取菌种；有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，所以使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。10．如何判断制作的培养基是否灭菌彻底()A．看培养基是否透明B．有没有消灭细菌菌体C．未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后检验有无菌落生长D．是否消灭了微生物的芽孢、孢子解析：选C。配制好的培养基是否灭菌彻底通常在使用前，在恒温箱中保温1～2天后检验有无菌落生长，若无则说明灭菌彻底。11．下列操作属于灭菌的是()A．接种前用火焰灼烧接种环B．接种前用酒精擦拭双手C．将平板倒置，放入培养箱中培养D．接种在酒精灯的火焰旁完成解析：选A。要正确区分灭菌、消毒和防止杂菌污染。A项属于灭菌，B项属于消毒，C、D项都是实验操作过程中防止杂菌污染的措施，与灭菌无关。12．下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是()6解析：选D。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，故A正确；接种时，左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，故B正确；划线时要从上一次划线的末端开始进行，让菌种来源于上一次划线末端，故C正确，D错误。二、非选择题13．急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌、病毒的含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问题：(1)检验大肠杆菌含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用玻璃涂布器分别涂布到固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为________。下图所示的四种菌落分布图中，不可能由该方法得到的是________。(2)用该方法统计样本菌落数量是否需要对照组？________。为什么？________________________________________________________________________。(3)有三种材料或用具需要消毒或灭菌：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻璃棒、试管、烧瓶和吸管；③实验操作者的双手。其中需要消毒的是________，需要灭菌的是________。(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)平板划线法所得菌落集中呈线状，D的菌落分布情况可判断为平板划线法接种。(2)为判断培养基灭菌是否合格，本实验需要对照。7(3)消毒是指使用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不