搜索
1EvaluationWarning:ThedocumentwascreatedwithSpire.Docfor.NET.第35讲克隆技术1．如图是植物体细胞杂交过程示意图，如果A、B植物均为二倍体，据图分析回答：(1)图中所示过程的原理有：_____________________________________________。(2)图中的①过程是________________________________________________________。(3)植物体细胞融合成功的标志是_______________________________________，其产生与细胞内________(细胞器)有关。(4)③和④过程分别是________和________的过程。则该杂交植物有________个染色体组。(5)该技术的最显著优势是：___________________________________________。解析：(1)植物体细胞杂交过程中有原生质体A和原生质体B的融合过程，其原理是细胞膜具有流动性；将杂种细胞培育成新的个体，其原理是植物细胞具有全能性。(2)图中的①过程是去除植物细胞壁，制备原生质体。(3)植物体细胞融合成功的标志是形成新的细胞壁，植物细胞壁的形成与高尔基体有关。(4)杂种细胞通过脱分化形成愈伤组织，再经再分化形成杂种植株。图中杂种植株是由两个二倍体的细胞融合成的杂种细胞培育成的新个体，含有四个染色体组。(5)植物体细胞杂交可以克服远缘杂交不亲和的障碍。答案：(1)细胞膜具有流动性、植物细胞具全能性(缺一不可)(2)(去壁)制备原生质体(3)形成新的细胞壁高尔基体(4)脱分化再分化四(5)克服远缘杂交不亲和的障碍2．(2020·浙江黄岩选考模拟)下面是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图，请回答：叶片→酶解→获得原生质体→原生质体培养→获得愈伤组织(1)酶解时，在纤维素酶和果胶酶的混合液中，还需添加________来提高混合液的渗透压，获得的完整的原生质体呈________(填形状)。(2)获得原生质体后，可用________方法检测原生质体是否存活，然后将原生质体制成悬浮液，滴加在________上，用显微镜观察并计数。要判定原生质体是否已形成细胞壁，可用________方法鉴别。(3)欲通过原生质体培养得到愈伤组织，从培养基的成分考虑，配制培养基时需要注意的主要方面有________________和________________的适当配比。解析：(1)在获得原生质体时，混合液中需添加甘露醇来维持较高渗透压，以免原生质2体吸水涨破。获得的原生质体是球形的。(2)可用红墨水染色法检测原生质体的死活，若细胞内部被染成红色，说明原生质体已经死亡；在显微镜下一般用血细胞计数板对原生质体进行计数；可用质壁分离方法鉴别原生质体是否已形成细胞壁。(3)在配制获得愈伤组织的培养基时，应注意营养物质和植物生长调节剂的适当配比。答案：(1)甘露醇球形(2)红墨水染色血细胞计数板质壁分离(3)营养物质植物生长调节剂3．(2020·浙江台州高三模拟)某科研团队利用植物细胞工程技术，把基因序列已知的抗除草剂(Bar)基因导入原生质体获得抗除草剂大豆。请回答下列相关问题：(1)对于已获得的Bar基因可以用____________技术进行扩增。图中的a过程通常使用相同的______________酶和DNA连接酶，使目的基因与载体连接形成重组DNA。(2)在b过程中，获得原生质体除了需要纤维素酶和果胶酶，还需要用到的试剂是________。(3)成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成Ⅰ——________，进而生长发育成植株。下列不属于Ⅰ细胞应具有的特征是________。A．薄壁细胞B．细胞质丰富C．液泡小D．细胞核小(4)若要判断转基因抗除草剂大豆是否成功，比较简便的检测方法是____________________。解析：(1)可通过PCR技术进行体外扩增，获得大量Bar基因。a过程为形成重组DNA分子，需要相同的限制性核酸内切酶和DNA连接酶处理，使目的基因与载体连接形成重组DNA。(2)在获得植物原生质体时，需在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液环境(较高渗透压)下用纤维素酶和果胶酶混合液处理实验材料，将细胞壁消化除去，获得球形的原生质体。(3)成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成愈伤组织，再经过再分化，分化出芽和根，进而生长发育成植株。Ⅰ细胞为愈伤组织，该类单细胞具有细胞质丰富、液泡小、细胞核大等特征，故D错误。答案：(1)PCR限制性核酸内切(2)(较高浓度的)甘露醇(3)愈伤组织D(4)用一定浓度的除草剂喷洒，观察转基因大豆的生长情况4．(2020·杭州名校测试)科学家利用植物体细胞杂交技术成功获得了番茄—马铃薯杂种植株，为了便于杂种细胞的筛选和鉴定，科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质，其培育过程如图所示：3(1)植物体细胞杂交依据的生物学原理有______________________________________。(2)过程①常用的酶是________________，细胞融合完成的标志是______________。(3)植物原生质体融合过程常利用化学试剂______________诱导融合，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，根据细胞膜表面荧光的不同可观察到______种不同的原生质体，当观察到__________________________时可判断该原生质体是由番茄细胞和马铃薯细胞融合而成的。(4)过程③和过程④依次为______________，过程④中的培养基常添加的植物激素是________________。(5)若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞中含n条染色体，则“番茄—马铃薯”细胞在有丝分裂后期含______条染色体。若杂种细胞培育成的“番茄—马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于______植株。解析：(1)植物体细胞杂交包括原生质体融合和培育杂种植株两大步骤，两者的原理分别是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。(2)去除细胞壁常用的酶是纤维素酶和果胶酶，细胞融合完成的标志是形成新的细胞壁。(3)化学促融剂是聚乙二醇，两两融合的原生质体有三种：番茄—番茄、马铃薯—番茄、马铃薯—马铃薯，其中杂种细胞的细胞表面有两种颜色的荧光。(4)过程③和过程④分别表示脱分化和再分化，诱导细胞分化所用的植物激素主要是生长素和细胞分裂素。(5)“番茄—马铃薯”体细胞有m＋n条染色体，有丝分裂后期染色体数目加倍。由配子发育成的个体均为单倍体。答案：(1)细胞膜的流动性、植物细胞的全能性(2)纤维素酶和果胶酶形成了新的细胞壁(3)聚乙二醇(或PEG)3融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色荧光(4)脱分化和再分化生长素和细胞分裂素(5)2(m＋n)单倍体5．如图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答下列问题：(1)若A、B到C过程是体外受精过程，则对已取得的精子必须先进行________处理，若需获取更多的卵细胞一般要对雌性个体注射________________，使其________________。(2)若该过程是制备单克隆抗体的过程，在A、B到C的过程中，A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为能产生抗体的B淋巴细胞，那么D细胞称为________细胞。从融合细胞中选择出它4的方法是在特定的选择性培养基中培养，筛选出该类细胞后还需进行________培养和抗体检测，经多次筛选可获得数量足够的能分泌所需抗体的细胞。(3)若A、B细胞为植物细胞，D细胞在植物组织培养时，先配制________培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较少时，愈伤组织可发育形成________。(4)若要培育转基因植物，则可采用__________________法将目的基因导入受体细胞中。受体细胞应该是________(A.体细胞B．卵细胞C．受精卵D．雄配子)。为了得到农杆菌的单菌落，常采用的分离方法有两种，即________________和________________。解析：(1)受精之前，对已取得的精子先进行获能处理；若需更多的卵细胞，一般要对雌性个体注射促性腺激素，使其超数排卵。(2)依据题中信息可确定图中D细胞为杂交瘤细胞；对获得的杂交瘤细胞需进行克隆化培养以扩大数量。(3)若要培育转基因植物，则可采用诱导生芽或生根的培养基(MS培养基)培养；当生长素相对较少时，愈伤组织可发育形成丛状苗。(4)若要培育转基因植物，通常采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞中；受体细胞应该是植物体细胞；为了得到农杆菌的单菌落，常采用的分离方法有两种，即划线分离法和涂布分离法。答案：(1)获能促性腺激素超数排卵(2)杂交瘤克隆化(3)MS丛状苗(4)农杆菌转化A划线分离法涂布分离法6．(2020·浙江绿色评估联盟高三考试)科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。(1)由过程①获得的A为___________________________________________________。(2)在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是__________________________________________________________________________________________。受体应选用________期卵母细胞。(3)进行胚胎移植时，代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生________________________________________________________________________，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)分析图示可知，过程①构建的A为含目的基因的表达载体。(2)核移植以前，必须去掉受体卵母细胞的核，目的是保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞。受体应5该选用处于减数第二次分裂中期的卵母细胞。(3)在进行胚胎移植时，受体即代孕母羊对移入子宫的外来胚胎基本上不会发生免疫排斥反应。(4)转基因体细胞克隆产生的重组细胞具有全能性，培养产生的含目的基因的成纤维细胞可进行传代培养，因此理论上可获得无限个转基因绵羊。答案：(1)含目的基因的表达载体(2)保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞MⅡ中(3)免疫排斥反应(4)整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养7．(2020·浙江超级全能生联考)如图表示动物细胞克隆和制备单克隆抗体的相关过程，请回答相关问题：(1)过程①常应用____________法导入重组诱导基因后得到干细胞；部分干细胞经过诱导可分化成全身的不同组织或器官，说明这些细胞具有__________性。(2)该过程利用了甲细胞具有____________的能力，甲和乙细胞可经过生物诱导剂____________的作用形成丙细胞。取一个丙细胞，放在含大量失去____________的小鼠成纤维细胞的特定培养体系中培养，最后产生大量的细胞群，这种方法为____________法。(3)下列关于经③和④过程得到单克隆抗体的叙述，错误的是________。A．该过程应用了细胞膜具有流动性的原理B．丙细胞要具有分泌多种抗体的能力C．该过程应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术D．丙细胞的形成先通过筛选得到杂交瘤细胞，再进行抗体检验解析：(1)题图中的过程①常应用显微注射法导入重组诱导基因